К проведению иммуногематологических

Исследований.

 

Общие положения.

Открытие К. Ландштейнером групп крови послужило основой современного развития учения о переливании крови. Переливание крови и ее компонентов стало настолько обычным явлением, что можно легко недооценить его опасность. Необходимое для спасения жизни переливание компонентов донорской крови связано со значительным потенциальным риском для реципиента. Одним из наиболее серьезных осложнений этой процедуры являются гемолитические реакции (осложнения), которые могут иметь место при несовместимых в антигеном плане гемотрансфузиях.

Предупреждение переливания несовместимых компонентов донорской крови начинается с иммуногематологических исследований, которые проводят и у донора, и у реципиента.

Первостепенное значение имеют определение группы крови и Rh фактора, определение антиэритроцитарных антител и выполнение тестов на совместимость крови донора и реципиента.

Чтобы понять, что означает переливание несовместимой крови и какова роль перечисленных исследований, требуются знания иммуногематологии.

 

Группы крови.

Антигены групп крови (аллоантигены) являются врожденными структурными образованиями на внешней поверхности мембраны эритроцитов, обладающими способностью образовывать комплекс с соответствующими антителами (комплекс антиген-антитело).

Часть антигена, непосредственно взаимодействующая с антителом, называется антигенной детерминантой. Одна молекула антигена может содержать одну или несколько антигенных детерминант.

При попадании в организм реципиента антигена, отсутствующего у данного индивидуума, создаются предпосылки для развития аллосенсибилизации и появления у реципиента антител.

В настоящее время известно 23 системы антигенов эритроцитов. Общее количество антигенов, которое описано, превышает 240. Роль многочисленных аллоантигенов эритроцитов крови человека неодинакова. Клиническое значение антигенов определяется способностью аллоантител реципиента взаимодействовать с данными антигенами и вызывать разрушение эритроцитов в его организме. В этом аспекте первостепенное значение имеют антигены системы АВО и резус.

Антигены системы АВО развиваются на эритроцитах еще до рождения ребенка. Однако полное созревание антигенов системы, со всеми присущими серологическими свойствами, проходит через несколько месяцев после рождения.

У взрослых людей на эритроцитах присутствуют антигены А, В, и Н. Последний является предшественником двух других антигенов (А и В), а так же обнаруживается на поверхности эритроцитов, принадлежащих к группе крови О.

При выявлении антигенов системы АВО стандартными сыворотками существуют определенные трудности, связанные с модификациями данных детерминант на мембране эритроцитов.

У здоровых людей отмечается гетерогенность антигена А.

В 1911 г. установлено существование двух подгрупп антигена А: А1 и А2. Среди европейцев 80% индивидуумов, принадлежащих к группе крови А1, остальные 20% принадлежит к А2 – подгруппе. К настоящему времени установлено, что различия между А1 и А2 антигенами является качественными и количественными. Сыворотка некоторой части А2 и А2В индивидов содержат анти- А 1 агглютинины.

Существует еще несколько подгрупп антигена А: Аm,Ax,Aint,Aend.

Это очень редкие и слабые варианты данного антигена.

Антигенная структура различных подгрупп определяется уменьшением количества Н антигена и увеличением А антигена. По содержанию Н вещества в эритроцитах группы крови располагаются в следующем порядке: О>Ах>А3>А2>А1.

Существуют слабые формы В антигена, но они крайне редки: В3,Bx,Bw,Bm.

Для выявления вариантов антигена А используются сыворотки крови человека. Антиген А2 имеет низкую активность в отношении изогемагглютинирующих сывороток по сравнению с антигеном А1. Поэтому эритроциты, имеющие антиген А2, часто не агглютинируется изогемагглютинирующими сыворотками В группы. В результате чего наблюдается несоответствие данных исследования по стандартным сывороткам и стандартным эритроцитам.. Наиболее эффективно идентифицировать антиген А2 и антиген А1 можно при использовании моноклональных антител анти-А1 или лектина анти-А1 реактива, приготовленного из семян бобовых Dolichos biflorus. Анти А1 реактив агглютинирует эритроциты А1 и не агглютинирует эритроциты А2.

Успешно используются так же лектин со специфичностью Н, приготовленный из семян Ulex europaeus. Анти-Н реактив агглютинирует эритроциты А2 и не агглютинирует эритроциты А1.

Долгие годы в трансфузиологии считалось, что выявление вариантов антигена А эритроцитов системы АВО не имеет значения при выборе крови для трансфузии. Следствием этого является отсутствие в инструкции по переливанию крови требования учитывать наличие А2 антигена у реципиента. Эта позиция основана на мнении, что эритроциты А1 и А2 имеют только различия в количестве антигенных детерминант. Кроме того, считалось, что анти- А1 антитела (экстра агглютинины), присутствующие иногда в крови реципиента, проявляют свою активность при 20ºС и не выявляются при 37ºС, поэтому не имеют клинического значения. В последние десятилетия показана возможность выработки анти А1 антител (принадлежащих к иммуноглобулинам класса IgG, и имеющих клиническое значение) у реципиентов, в анамнезе которых были трансфузии крови, содержащих антиген А1.

Поэтому при выборе крови для трансфузии необходимо избегать переливания эритроцитов, содержащих А1 антиген, реципиентам, имеющим антиген А2.

Пациентам групп крови А2(II) показаны трансфузии отмытых эритроцитов группы крови А2(II) или О(I). Пациентам с группой крови А2В(IV), показаны трансфузии отмытых эритроцитов группы крови О(I),В(III) или А2В(IV). Проведение при этом индивидуального подбора крови донора и реципиента обязательно.

Характерной особенностью, отличающей систему антигенов эритроцитов АВО от других систем антигенов, является постоянное присутствие в сыворотках людей (кроме лиц с группой крови АВ) антител, направленных к антигенам А и В.

Естественные антитела анти-А и анти-В принадлежат к иммуноглобулинам класса М. В следствие структурных особенностей иммуноглобулинов класса М (пентамерное образование с десятью активными центрами), естественные анти-А и Анти-В антитела способны связывать большое количество эритроцитов и вызывать прямую агглютинацию в солевой среде. Высокая активность анти-А и анти-В антител определяет клиническую значимость указанных антител в развитии посттрансфузионных реакций при трансфузиях несовместимых по антигенам АВО крови.

Определение группы крови.

Правильность определения групповой принадлежности крови донора и реципиента имеет большое значение в предотвращении посттрансфузионных осложнений гемолитического типа.

Определение групп крови по антигенам эритроцитов системы АВО в крови доноров и реципиентов может осуществляться изогемагглютинирующими сыворотками, цоликлонами, а так же лектинами (реактивами, приготовленными из экстрактов растений, содержащих белки, подобные антителам анти-А, анти-В, содержащиеся в крови человека).

Существует два метода определения групп крови АВО:

- по антигенам, содержащимся в исследуемых эритроцитах. В этом случае для исследования используют стандартные изогемагглютинирующие сыворотки или моноклональные антитела.

- по антигенам эритроцитов, содержащимся в исследованных эритроцитах и антителам сыворотки крови. В этом случае для исследования используют стандартные изогемагглютинирущие сыворотки или моноклональные антитела, а так же стандартные эритроциты групп крови А, В и О.

Первичное определение группы крови по системе АВО проводит дежурный или лечащий врач стандартными гемагглютинирующими сыворотками анти А+В, анти-В и Анти-А, анти-АВ или цоликлонами анти-А, анти-В, анти-АВ.

Повторное исследование антигенов эритроцитов системы АВО проводят в лаборатории перекрестным методом с применением стандартных изогемагглютинирующих сывороток или цоликлонов анти-А, анти-В, анти-АВ и стандартных эритроцитов О, А1 и В. Любые расхождения результатов определения группы крови, проведенные лечащим врачом в отделении и результатов, полученных в лаборатории, должны быть выяснены и разрешены до гемотрансфузии. Расхождения при определении группы крови должны быть зафиксированы, представлены трансфузиологу (врачу, ответственному за организацию трансфузионной терапии), проведен разбор причин, приведших к расхождению в сроки, определенные трансфузиологом ЛПУ.

Заключение о групповой принадлежности крови делается на основании первичного и повторного исследований.

Больные имеющие экстраагглютинины анти-А, не должны получать эритроциты доноров с антигеном А1.