Бактериологический метод диагностики. Достоинства и недостатки.

Бактериологический метод диагностики. Достоинства и недостатки.

Преимуществом культурального метода является относительно высокая специфичность исследования и возможность лабораторного моделирования терапевтического воздействия на микроорганизмы и учет его эффективности.

Недостатками являются длительность исследования, высокие требования к забору материала, повышенные требования к квалификации персонала лабораторий.

 

Биохимические свойства бактерий. Методы изучения.

Биохимические свойства - способность микроорганизмов к ферментации и ассимиляции тех или иных химических веществ.

Ферменты (конститутивные, адаптивные, экзо- эндо-)

Определение ферментативной активност:

· по накоплению кислых продуктов метаболизма – углеводы.

· по образованию конечных продуктов (аммиак - дезаминазы, уреаза; индол – триптофаназа сероводород – цистиназа).

· по ассимиляции субстратов - наличие или отсутствие роста.

Методы изучения:

1. Среды пестрого ряда (среды Гисс).

Состав:

Пептонная вода;

Углевод (сахар или многоатомный спирт);

Индикатор рН.

В пробирку с глюкозой помещают "поплавок" для определения продукции газа

(изначально все желтое, а потом окрашивается в розовый)

2. Система индикаторных бумаг.

Диски фильтровальной бумаги пропитывают индикаторными (дифференциальными) средами. В высушенном состоянии диски можно длительно хранить. Перед использованием диски раскладывают пинцетом в стерильные пробирки и добавляют суспензию идентифицируемой культуры в физрастворе.

 

Влияние химических факторов на жизнедеятельность микроорганизмов.

Химические факторы

Некоторые химические вещества способны оказывать на микроорганизмы губительное действие. Химические вещества, обладающие бактерицидным действием, называют антисептиками. К ним относятся дезинфицирующие средства (хлорная известь, гипохлориты и др.), используемые в медицине, на предприятиях пищевой промышленности и общественного питания.

Некоторые антисептики применяются в качестве пищевых добавок (сорбиновая и бензойная кислоты и др.) при изготовлении соков, икры, кремов, салатов и других продуктов.

 

Классификация питательных сред. Особенности состава и области применения. Примеры.

Классификация питательных сред

По составу

◦ Простые - содержат основные компоненты белкового питания. Используются в качестве питательной основы для приготовления сложных питательных сред

Например: пептонная вода, мясо-пептонный бульон, питательный агар

Сложные - содержат питательную основу и различные добавки: ростовые, дифференцирующие, селективные, хромогенные

Например: кровяной агар, солевой агар, селенитовый бульон

По консистенции

◦ Жидкие (бульоны) - не содержат гелеобразующих веществ

Например: солевой бульон, пептонная вода

◦ Полужидкие - содержат 0,1 - 0,7% агар-агара

Например: тиогликолевая среда (среда для контроля стерильности)

◦ Плотные (агары) - содержат 1,0 - 2,0% агар-агара

Например: мясо-пептонный агар, среда Эндо.

По назначению

Дифференциальные - выделение чистой культуры микроорганизмов и одновременной дифференцировке по биохимическим (как правило) свойствам (диф фактор, индикатор, пит основа(МПА, лактоза, осн фуксин)

Например: среда Эндо, кровяной агар

Элективные - предназначены для подавления роста сопутствующей микрофлоры с целью облегчения выделения целевого микроорганизма в чистой культуре.

Например: солевой агар

Элективно-дифференциальные - предназначены для выделения чистой культуры микроорганизмов и одновременного подавления роста сопутствующей микрофлоры. Вырастающая сопутствующая микрофлора дифференцируется от целевых микроорганизмов по биохимическим свойствам. (МПА, элективный фактор, диф фактор и индикатор)

Например: желточно-солевой агар, агар Плоскирева

Обогатительные - увеличение концентрации микроорганизмов в исследуемом материале, с последующем выделением чистой культуры путем высева на плотную среду. В зависимости от характеристики исследуемой пробы обогатительные среды могут обладать селективностью или быть неселективными (МПБ, обогат фактор)

Например: сахарный бульон, солевой бульон

Синтетические - состоят из химически чистых компонентов, что позволяет создавать строго контролируемые условия роста. Предназначены для изучения метаболизма (ауксотрофы и прототрофы), генетических экспериментов и т.п. (вода, глюкоза и мин соли/орг молек)

Например: агар М9.

Среды для анаэробов - выделение и культивирование строгих анаэробов (глюкоза + ред фактор)

Например: анаэробный кровяной агар, тиогликолевая среда, среда Вильсона-Блер

 

Достоинства

• Высокая эффективность

• Широкий перечень стерилизуемых объектов

• Минимальное повреждение стерилизуемых объектов

• Возможность стерилизации упакованных изделий

Недостатки

◦ Аппаратура работает под повышенным давлением

◦ Возможна коррозия металлических объектов

Воздушная стерилизация

В воздушных стерилизаторах осуществляют стерилизацию сухим нагретым воздухом. Поскольку стерилизующий эффект сухого воздуха значительно слабее, чем у насыщенного пара. испольхуются волее высокие температуры (160 - 180 ⁰С) и длительные экспозиции (60 - 120 мин). Для равномерного прогрева воздушные стерилизаторы имеют встроенный вентилятор.

Использование:

Стерилизация стеклянной посуды, термостабильных порошков, металлических инструментов.

Достоинства

◦ Простота управления

◦ Низкие эксплуатационные расходы

◦ Возможность упаковки стерилизуемых объектов

Недостатки

◦ Ограниченный перечень стерилизуемых объектов

◦ Большая продолжительность цикла стерилизации

Прокаливание в пламени

Газовые горелки и спиртовки используют для стерилизации открытым пламенем. В случаях, когда невозможно применить открытое пламя, возможно использование инфракрасных нагревателей.

Использование:

Стерилизация мелких металлических инструментов: бактериологические петли, препаравальные иглы, пинцет...

Достоинства

◦ Практически мгновенная стерилизация

Недостатки

◦ Нельзя хранить простерилизованный инстумент

◦ Только для мелких инструментов

◦ Пожароопастность

Газовая стерилизация

Низкотемпературный метод стерилизации, с использованием окиси этилена. Данный газ обладает хорошими микробоцидными свойствами и проникающей способностью.

Достоинства

◦ Возможность стерилизации объектов, не выдерживающих высокие температуры

◦ Надежная упаковка стерилизуемых изделий

◦ Высокая надежность стерилизации

Недостатки

◦ Очень высокая токсичность газа

◦ Необходимость длительного проветривания простерилизованных объектов

Плазменная стерилизация

Стерилизация проводится парами 60% раствора Н₂О₂ и низкотемпературной плазмы. Это делает данный метод универсальным, поскольку позволяет обрабатывать любые изделия, в том числе и волоконную оптику. Перед стерилизацией изделия должны быть упакованы в специальную упаковку.

Достоинства

◦ Универсальность

◦ Низкая температура стерилизации

◦ Высокая эффективность стерилизации

◦ Экологически безопасный метод (конечные продукты - Н₂О и О₂)

Недостатки

◦ Высокая стоимость оборудования

Необходимость специальной упаковки (обычные упаковочные материлы не годятся)

 

Бактериологический метод диагностики. Достоинства и недостатки.

Преимуществом культурального метода является относительно высокая специфичность исследования и возможность лабораторного моделирования терапевтического воздействия на микроорганизмы и учет его эффективности.

Недостатками являются длительность исследования, высокие требования к забору материала, повышенные требования к квалификации персонала лабораторий.