Основные правила работы с микроскопом

ЗАДАНИЯ К ПРАКТИЧЕСКИМ

ЗАНЯТИЯМ

ПО ОБЩЕЙ МИКРОБИОЛОГИИ

(издание второе, переработанное)

 

Методическая разработка

для студентов факультета ветеринарной медицины

 

Новосибирск 2009

 

 

ЗАДАНИЕ

К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ

ПО ОБЩЕЙ МИКРОБИОЛОГИИ

 

 

СТУДЕНТ_____________________________________________

 

ГРУППА______________УЧЕБНЫЙ ГОД__________________

 

Новосибирск, 2009

Программа. 1

Новосибирский государственный аграрный университет. 1

ЗАДАНИЯ К ПРАКТИЧЕСКИМ... 1

ЗАНЯТИЯМ... 1

ПО ОБЩЕЙ МИКРОБИОЛОГИИ.. 1

(издание второе, переработанное) 1

Методическая разработка. 1

Новосибирск 2006. 2

ЗАДАНИЕ.. 2

СТУДЕНТ_____________________________________________. 2

ГРУППА______________УЧЕБНЫЙ ГОД__________________. 2

Новосибирск, 2006. 3

Тема I. Общая бактериологическая техника.. 3

Контрольные вопросы.. 3

Оборудование и материалы.. 3

Методические указания. 3

Основные части микроскопа: 3

Основные правила работы с микроскопом.. 4

Техника работы с бактериологической петлей, бактериологической пробиркой, спиртовкой 4

Техника приготовления мазка-препарата, фиксирования, окрашивания. 5

Окраска фиксированного мазка-препарата по Граму. 5

Окраска спор по Ожешко. 6

Тема 2. МОРФОЛОГИЯ СОВЕРШЕННЫХ И НЕСОВЕРШЕННЫХ ГРИБОВ И АКТИНОМИЦЕТОВ 7

Контрольные вопросы.. 7

Оборудование и материалы.. 7

Методические указания. 7

Признаки плесневых грибов. 7

Грибы делятся на классы. 8

Краткий ключ для определения плесневых грибов. 8

Тема 3. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ.. 12

Контрольные вопросы.. 12

Оборудование. 12

Методические указания. 12

Тема 4. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ УЧЕТ БАКТЕРИЙ В РАЗЛИЧНЫХ СУБСТРАТАХ. 16

Контрольные вопросы.. 16

Оборудование и материалы (на одно место) 16

Посев бактерий почвы. 16

Посев бактерий воды. 17

Посев бактерий воздуха. 17

3 х 100 = 300 бактерий. 18

Тема 5. КУЛЬТИВИРОВШЕ АЭРОБОВ И АНАЭРОБОВ.. 18

Контрольные вопросы.. 18

Оборудование и материалы (на I рабочее место) 18

Методические указания. 18

Ход работы.. 19

Тема 6. ВЛИЯНИЕ УЛЬТРАФИОЛЕТОВЫХ ЛУЧЕЙ НА МИКРООРГАНИЗМЫ... 19

Контрольные вопросы.. 19

Оборудование. 19

Методические указания. 19

Ход работы.. 20

Тема 7. ВЛИЯНИЕ ТЕМПЕРАТУРЫ НА МИКРООРГАНИЗМЫ... 21

Контрольные вопросы.. 21

Оборудование. 21

методические указания. 21

Ход работы.. 21

Тема 8. ВЛИЯНИЕ АНТИБИОТИКОВ И ФИТОНЦИДОВ НА МИКРООРГАНИЗМЫ... 22

Контрольные вопросы.. 22

Оборудование. 22

Методические указания. 22

Ход работы.. 22

Тема 9. ВЫДЕЛЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР МИКРООРГАНИЗМОВ.. 23

Контрольные вопросы.. 23

Занятие 1. Выращивание изолированных колоний. 23

Оборудование. 23

Методические указания. 23

Ход работы.. 23

Занятие 2. Изучение колоний и получение чистых культур. 24

Оборудование. 24

Методические указания. 24

Ход работы.. 25

Занятие 3. Определение чистоты выделенных культур и изучение их биохимических свойств. 25

Оборудование. 25

Методические указания. 25

Ход работы.. 26

Задание 4. Определение биохимических свойств и вида выделенных культур. 26

Оборудование. 26

Методические указания. 26

Ход работы.. 27

Тема 10. МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ МОЛОКА.. 28

Контрольные вопросы.. 28

Оборудование и материалы (на одно рабочее место) 28

Методические указания. 28

Метод посева молока на МПА в чашках Петри. 28

Проба на редуктазу. 29

Определение кислотности молока титрометрическим методом. 29

Тема 11. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИ-ТИТРА ВОДЫ И МОЛОКА.. 30

Контрольные вопросы.. 30

Оборудование и материалы.. 30

Методические указания. 30

Порядок исследования воды: 31

Порядок исследования молока. 31

Терминологический диктант.. 31

Вопросы для текущего контроля знаний. 33

ТЕМА: МОРФОЛОГИЯ ГРИБОВ.. 34

ТЕМА: КУЛЬТИВИРОВАНИЕ.. 34

ТЕМА: МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ.. 35

ТЕМА: ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПАТОГЕННОСТИ МИКРОБОВ. 37

ТЕМА: РЕАКЦИЯ ИММУНИТЕТА.. 37

ЗАДАНИЯ.. 39

 

Вопросы к зачету по общей микробиологии. 42

 

 

Тема I. Общая бактериологическая техника

 

 

Контрольные вопросы

1.Микроскоп, его устройство, иммерсионная система.

2.Основные правила работы с микроскопом.

3.Техника работы с бактериологической петлей, бактериологической пробиркой, спиртовкой.

4.Техника приготовления мазка-препарата, фиксирование, простой метод окраски.

5.Сложный метод окраски по Граму.

6.Окраска спор по Ожешко и другими методами.

 

Оборудование и материалы

Микроскопы, кедровое масло, готовые окрашенные препараты (мазки), набор красок, спирт 96⁰, дистиллированная вода, фильтровальная бумага, предметные стекла, бактериологическая петля, спиртовка, физиологический раствор, салфетки, чистые культуры.

 

Методические указания

Микроскоп (“микрос” – малый, “скопо” – смотрю) предназначается для рассмотрения объектов, невидимых простым глазом. увеличение светового микроскопа достигает до2000 раз.

Основные части микроскопа:

1. Механическая часть, куда входит штатив (башмак, колонка), предметный столик, тубус с револьвером и система винтов.

2. Оптическая часть включает в себя осветительный аппарат (конденсор, диафрагма), собственно оптическую часть (объектив, окуляр). Объективы делятся на воздушно-сухие и иммерсионные (масляные). Иммерсионные объективы – между фронтальной линзой и рассматриваемым препаратом помещается капля масла. В этом случае изображение получается наиболее четко, так как стекло, масло и линза имеют одинаковый показатель преломления света и исключается рассеивание лучей.

 

Чтобы определить общее увеличение микроскопа, надо умножить увеличение объектива на увеличение окуляра.

Наибольшее увеличение светового микроскопа, используемого в нашей лаборатории, равно 1350 (15 ^х 90).

разрешающая способность микроскопа - минимальное расстояние между двумя точками или штрихами, которые изображаются раздельно, равна 0,2 мкм.

Посев бактерий почвы.

В почве огромное количество бактерий, и для облегчения подсчета почву разводят в стерильной водопроводной воде. Для этого в штатив поставить пять пробирок по 9 мл стерильной водопроводной воды. Отвесить 1 г исследуемой почвы, ссыпать в первую пробирку, которую сразу закрыть и взболтать (не подмачивая пробку) в течении 5 минут. Получим разведение почвы 1:10. После этого стерильной пипеткой взять из первой пробирки почвенной болтушки и перелить во вторую, также закрыв пробкой, взболтать в течении 2 минут. Получим разделение почвы 1:100. Таким же образом перенести 1мл из второй пробирки в третью, из третьей в четвертую, из четвертой в пятую пробирку, каждую взбалтывая по 2 минуты. Получим разведений соответственно 1:1000, 1:10000, 1:100000. Из последней пробирки 1 мл почвенной болтушки перенести в стерильную чашку Петри, чуть приоткрыв крышку, чтобы не занести постороннюю микрофлору. Залить расплавленным и остуженным МПА. Крышку закрыть и, осторожно покачивая на столе, равномерно перемешать исследуемую жидкость с агаром. После застывания агара чашку опрокинуть вверх дном и поставить в термостат при температуре 37°С. По истечении 48 часов чашки вынуть из термостата и провести подсчет колоний, образованных из одной клетки. Каждую подсчитанную колонию отметить на нижней стороне чаш­ки Петри восковым карандашом или чернилами. Если колоний очень много, чашку делят на секторы, прочертив их на дне чашки Петри восковым карандашом, или же пользуются простым приспособлением - счетной камерой Вольфгюгеля, в этом случае опрокинутую чашку кладут под стеклянную пластинку камеры, разделенную на квадратные сантиметры, считают ко­лонии в определенном количестве квадратов (10-20) и нахо­дят среднее количество на I см². Затем определяют площадь чашки по формуле Ѕ=5πR² и умножают на среднее количество колоний в 1cм².Умножив это число на степень разведения, получают количество бактерий в I г почвы.

Посев бактерий воды.

Пипеткой выливают I мл водопровод­ной воды стерильной в стерильную чашку Петри, заливают рас­плавленным МПА, осторожно покачивают. Когда агар затверде­ет, перевертывают чашки вверх дном и ставят в термостат на 48 часов при 37°С. После образования колоний в чашках Пет­ри подсчитывают их число. Это и будет количество бактерий в I мл воды.

Если в I мл от 0 до 100 бактерий - вода считается чис­той, от 100 до 1000 - сомнительная, больше 1000 бактерий - загрязненная.

Посев бактерий воздуха.

Чашки Петри со стерильным МПА открывают в помещении на 5, 10, 15, 20, 30 мин, закрывают крышку и перевертывают, подписывают, ставят в термостат при температуре 30-40°С на 24 часа. По истечении указанного времени открывают чашки и подсчитывают колонки. По правилу Омелянского определяют количество бактерий в I м³ воздуха.

Правило Омелянского. На 100 см² в течение 5 мин оседа­ет столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха.

Пример. На поверхности МПА в чашке образовалось 2 колонии, чашка была открыта на 10 мин. Определить, сколь­ко бактерий содержится в I м³? определяем площадь чашки Петри по формуле

S = 5πR²(78 см²)

Находим количество бактерий воздуха. Так как колония образуется из одной бактерии путем многократного деления, находим:

 

78 см² - 2 колонии

100 см2 - х

X = 3 бактерии

Определяем содержание бактерий в 1000 л (I м³)

3 х 100 = 300 бактерий

По правилу Омелянского пересчитываем на 5 мин: 300:2 = 150 бактерий, таким образом, в I м³ воздуха 150 бактерий.

Содержание бактерий в I м воздуха для закрытых помещений

зимой: чистый - 4,5 тыс., загрязненный - 7,5 тыс.;

летом: чистый - 1,5-2,5 тыс., загрязненный - 2,5 тыс.

Задание 4. Определение биохимических свойств и вида выделенных культур.

 

Оборудование

Посевы предыдущего занятия.

 

Методические указания

При учете результатов посева необходимо иметь в виду возможность следующих изменений в питательных средах и представить протекающие при этом процессы с участием конкретных ферментов. Если «сахара» ферментируются, то накапливается кислота или кислота и газ (обозначается К+, Г+), что приводит к изменению цвета среды до сине-зеленого и разрыву столбика. Образование кислоты и газа в пробирке с лактозой указывает на наличие соответствующего углеводу фермента (лактозы). Расщепление глюкозы происходит под действием набора оксидоредуктаз (оксидаза, дегидраза, пероксидаза, каталаза). Отсутствие каких-либо изменений говорит о неспособности данного фермента расщеплять углевод.

Образование сгустка в молоке указывает на накопление кислоты в результате сбраживания углеводов молока. Сгусток в молоке – это свернувшийся белок молока (казеин). Он растворяется под действием фермента казеиназы, что сопровождается просветлением молочной сыворотки и выпадением осадка (пептонизация).

В МПБ при росте культуры образуется пленка, помутнение или природный осадок. В присутствии аммиака красная лакмусовая бумажка синеет. При образовании сероводорода индикаторная бумажка чернеет за счет перехода уксусно-кислого свинца в сернистый свинец, имеющий черный цвет. Бумажка с щавелевой кислотой краснеет при наличии индола. Образование конечных продуктов свидетельствует о расщеплении белка, полипептидов, аминокислот.

Белок расщепляется микроорганизмами по схеме:

 

аммиак

(амидаза)

 

белок полипептиды аминокислоты сероводород

(цистиназа)

протеазы пептидазы дезаминазы индол (триптофаназа)

 

В молоке с метиленовой синькой при проявлении редуцирующих свойств микроба наблюдается изменение цвета на кремовый или обесцвечивание.

 

Ход работы

Визуально исследовать каждую засеянную среду. Подробные результаты исследований занести в таблицу и определить вид выделенных культур с указанием их ферментативного состава.

По мере просмотра посевов четко определить биохимические свойства изучаемых культур: какие «сахара» они расщепляют, конечные продукты распада, действующие ферменты.

 

 

Проба на редуктазу

является косвенным методом определения бактериальной обсемененности молока. Находящиеся в молоке бактерии выделяют окислительно-восстановительный фермент редуктазу, которая обесцвечивает метиленовую синьку. Причем чем больше бактерий в молоке, тем больше выделяется редуктзы и тем быстрее обесцвечивается метиленовая синька.

Для выполнения работы в пробирку налить 5 мл исследуемого молока, добавить 1 каплю 1% раствора метиленовой синьки. Пробирку хорошо взболтать, поставить в водяную баню при температуре 38-40⁰С. Моментом окончания испытания на редуктазу считают полное обесцвечивание молока. Наличие синего кольца в верхней части пробирки не принимают во внимание. По времени обесцвечивания молоко делится на классы.

Проба с резазурином сходна с предыдущей, но преимущество ее в том, что анализ проводится быстрее, чем редуктазная проба. В стерильные пробирки наливают 1 мл рабочего раствора резазурина и 10 мл исследуемого молока, хорошо перемешивают и помещают в редуктазник с температурой воды 38⁰С. Время погружения пробирок в воду считать началом анализа. Показания снимают через 20 мин и через час.

После 20 мин пробирки с обесцвеченным молоком удаляют из редуктазника. Оставшиеся пробирки оставляют до конца анализа. В зависимости от времени обесцвечивания и изменения окраски молоко относят к одному из четырех классов.

Тема 11. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИ-ТИТРА ВОДЫ И МОЛОКА

 

Контрольные вопросы

1. Источники микрофлоры молока.

2. Нормальная микрофлора молока.

3. Бактерицидная фаза молока.

4. Динамика микрофлоры молока при его хранении.

5. Качественная оценка молока (микробное число, кислотность, коли-титр).

 

Оборудование и материалы

Индикаторные среды Андрадэ, среды Козера, Эндо, Кесслера, Левина; мембранные фильтры, вода, молоко, пипетки.

 

Методические указания

Вода и молоко при благоприятном температурном режиме являются хорошими субстратами для размножения болезнетворных бактерий. Эти субстраты могут стать источником возбудителя заболевания, который попадает в воду нередко вместе с экскрементами животных. Поэтому важным санитарным показателем является их фекальное загрязнение (коли-титр и коли-индекс), указывающее на возможное обсеменение патогенными микроорганизмами.

Коли-титром субстрата называется его количество в миллилитрах, в котором содержится одна кишечная палочка.

Для определения коли-титра используют бродильную пробу и метод мембранных фильтров. Сущность бродильного метода заключается в том, что пробу исследуемой жидкости в определенных количествах высевают на среду накопления, затем при наличии роста, характерного для кишечной палочки, пересевают на дифференциально-диагностические среды.

Порядок исследования воды:

водопроводной воды берут три объема по 100 мл (каждый в отдельности): три - по 10 мл и три по 1 мл, сточной воды - четыре объема: 1,0; 0,1; 0,01; 0,001 мл. Воду высевают в колбы и пробирки с глюкозопептонной или лактозопептонной средой с индикатором и поплавками. Все посевы помещают в термостат на 24 часа при 37⁰С. При помутнении изменении цвета среды из нее делают посев штрихом на среды Эндо или Левина и ставят в термостат при 37⁰С на 16-18 часов. В зависимости от роста кишечной палочки в том или ином объеме пробы определяют коли-титр и коли-индекс по специальным таблицам

Для исследования воды методом мембранных фильтров используют изготовленные из нитроклетчатки или нитрохлорнинила фильтры №2 и №3.

Исследуемую воду (водопроводной 333 мл, из открытых водоемов 0,1; 0,1; 10,0 мл) под давлением пропускают через фильтр. Затем фильтры с соблюдением правил асептики переносят на плотные среды Эндо и помещают в термостат при 37⁰С. Через 18-24 часа подсчитывают колонии кишечной палочки, т.е. определяют коли-титр и коли-индекс.

Терминологический диктант

1. Эукариот, прокариот, бактерия, бацилла, спора, стрептококк, диплококк, стафилококк, тетракокк, капсула, цитоплазматическая мембрана, нуклеоид, муреин, сарцины, коринебактерии.

 

2. Спириллы, спирохеты, жгутик, монотрихи, амфитрихи, лофотрихи, перитрихи, атрихия, пили, фагоцитоз, пиноцитоз, колония, плектридия, грамположительные и грамотрицательные бактерии.

 

3. Грибы, актиномицеты, микоплазмы, реккетсии, лептоспиры, фотосинтез, хемосинтез, голозои, голофиты, гликолиз, автотрофы, гетеротрофы, волютиновые гранулы, стерилизация, хламидии, бактериофаги, эписома, рибосома.

 

4. Идентификация, вид, штамм, клон, чистая культура, смешанная культура, условно - патогенная микрофлора, аэробы (облигатные, факультативные), рекомбинация, генотип, фенотип, мутация, род, семейство.

 

5. Резистентность, трансформация, трансдукция, конъюгация, коагуляция, денатурация, конверсия, диссоциация, антибиотики, колититр, коли - индекс, делеция, пастеризация, автоклавирование, тиндализация.

 

6. Ферменты, перфрингенс - титр, микробное число, бактерицидная фаза молока, гетероферментативное брожение, смешанное брожение, масляно - кислое брожение.

 

7. Антиген, антитело, агглютинины, агглютиноген, агглютинат, преципитат, преципитиноген, преципитины, гемолизин, нейтрализующие, антитела, опсонический индекс, фагоцитарное число.

 

8. Симбиоз, паразитизм, инфекция, патогенность, вирулентность, токсичность, инвазионность, продромальный период, инкубационный период, ворота инфекции, агрессины, эпизоотия, панзоотия, бактеримия, пиемия, токсемия, носительство, реинфекция, рецидив, суперинфекция, энтеротоксины, корд - фактор.

 

9. Иммунитет, комплемент, пропердин, лейкины, спермидины, лактенины, плакины, лизоцим, гиалуроновая кислота, воспаление, гистиамин, пирогенные вещества, В - лизины, фагоцитоз (формы).

 

10. Толерантность, вакцина, сыворотка, абортин, бруцеллин, малеин, туберкулин, аллергическая реакция (специфическая, неспецифическая, псевдоаллергическая), хелперы, супрессоры, аллергия, сенсибилизация, анафилоксия.

 

11. Детерминанты, гаптен, корпускулярный антиген, антидетерминанты, легкие и тяжелые цепи, классы антител (5), тимус, пейеровы бляшки, сумка фабрициуса, тучные клетки, ретикулярные клетки, макрофаги, лимфоциты, основные положения клонально - селекционной теории Бернета, медиаторы, тимолизин, феномен Коха.

 

Вопросы для текущего контроля знаний

1. Основные правила техники безопасности при работе в микробиологической лаборатории.

2. Основные задачи бактериологической лаборатории.

3. Какой материал используется для микробиологических исследований?

4. Устройство светового микроскопа.

5. Системы объективов, назначение фронтальной линзы. Разрешающая способность микроскопа.

6. Окуляр и другие оптические части микроскопа, определение степени увеличения микроскопа.

7.Группы шаровидных бактерий.

8. На чем основано деление бактерий на собственно бактерий, бациллы, клостридии?

9. Морфологические группы извитых форм микроорганизмов.

10. Особенности строения прокариотной клетки.

11. Морфологические формы бактерий.

12. Особенности строения актиномицет.

13. Особенности риккетсий и микоплазм.

14. Люминесцентная и электронная микроскопия.

15. Устройство и принцип работы с люминесцентным микроскопом.

16. Первичная и вторичная люминесценция.

17. Методика приготовления мазка - препарата.

18. Отличие сложных и простых методов окраски.

19. Сущность простого метода окрашивания.

20. Сущность метода окрашивания по Граму и его практическое значение.

21. Чем объяснить различное окрашивание гр+ и гр- микроорганизмов?

22. Методы окраски спор.

23. Сущность окрашивания кисло-устойчивых бактерий.

24. Сущность окрашивания капсул.

25. Сущность явления метохромазии.

26. Чем обусловлена большая устойчивость спор к воздействию физических и химических факторов по сравнению с вегетативными клетками?

27. Сущность метода окрашивания спор.

28. Методы определения подвижности бактерий, чем обусловлено самостоятельное движение микроорганизмов?

29. Метод "висячая капля".

30. Метод "раздавленная капля".

31. Метод Шукевича.

32. Типы жгутикования микроорганизмов.

 

ТЕМА: МОРФОЛОГИЯ ГРИБОВ

1. Общая характеристика грибов.

2. Что является вегетативным телом гриба?

3. Какие виды мицелия существуют.

4. Из чего образуется мицелий?

5. В чем различия высших и низших грибов?

6. Характеристика строения клеточной стенки гриба.

7. Содержит ли клеточная стенка крахмал?

8. Что является продуктом метаболизма грибов?

9. Типы размножения грибов?

10. В чем различия совершенных и несовершенных грибов?

11. Что является органами полового спороношения грибов?

12. Какие вы знаете видоизменения мицелия?

13. Характеристика эндо- и экзоспор гриба.

14. Характеристика зооспор гриба.

15. Характеристика классов грибов.

16. Представители совершенных и несовершенных грибов, их морфологические особенности.

17. Современная классификация грибов.

18. Строение грибов рода Mucor.

19. Строение грибов рода Penicillum.

20. Строение грибов рода Aspergillus.

21. Что такое стеригмы гриба?

22. Какими методами проводят исследование грибов?

23. Особенности микроскопического исследования морфологии грибов.

24. Характеристика представителей аксомицетов.

25. Характеристика представителей оомицетов.

26. Характеристика зигомицетов.

27. Характеристика базидиомицетов.

28. Характеристика дейтеромицетов.

29. Роль грибов в сельском хозяйстве.

 

ТЕМА: КУЛЬТИВИРОВАНИЕ

ТЕМА: МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ

ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ

1. На чем основан метод получения чистой культуры по методу Коха, Дригальского?

2. Принцип химического метода выделения чистой культуры.

3. В чем сущность биологического метода выделения чистой культуры?

4. Использование метода Шукевича для выделения чистой культуры.

5. Методы получения чистой культуры анаэробов.

6. Что такое культуральные свойства микробов?

7. На чем основан принцип идентификации?

8. В каком периоде роста колонии идентифицируют?

9. Особенности роста бактерий в жидких средах.

10. Характерные особенности роста подвижных и неподвижных микроорганизмов в полужидкой среде.

11. Характер роста бактерий на плотных питательных средах.

12. Что такое колония?

13. Основные признаки характера роста у однотипных колоний.

14. От чего зависит цвет колонии?

15. Каким образом определяют консистенцию колонии?

16. Каким образом изучают колонии под микроскопом?

17. Ферментативные свойства микроорганизмов.

18. Методы определения сахаролитических свойств.

19. Что означает термин "пестрый ряд"?

20. Почему происходит изменение цвета сред "пестрого ряда"?

21. Какие углеводы используют для набора сред "пестрого ряда"?

22. Методы определения протеолитических свойств бактерий.

23. Сущность термина "протеолитическая" способность микроорганизмов.

24. Промежуточные продукты расщепления белка.

25. Конечные продукты распада белка.

26. Методы определения степени протеолиза белка (индола, сероводорода, аммиака).

27. Как определяют редуцирующие свойства микроорганизмов?

28. Каким образом можно использовать кислото- и щелочеобразование микроорганизмов?

29. Определение гемолитических свойств микроорганизмов.

 

ТЕМА: РЕАКЦИЯ ИММУНИТЕТА

1. Что такое реакции иммунитета?

2. Дайте определение понятия "антиген".

3. Дайте определение понятия "антитело".

4. Каковы основные свойства антигенов?

5. Каковы основные свойства антител?

6. Каким образом протекают осадочные серологические реакции?

7. С какой целью применяются серологические реакции в ветеринарной практике?

8. Каким образом получают сыворотку крови для серологических реакций?

9. Какие консерванты используют для сохранения сыворотки крови?

10. Сущность реакции агглютинации.

11. Для определения каких заболеваний используется реакция агглютинации?

12. Перечислите разновидности реакции агглютинации.

13. Сущность и техника постановки пробирочной РА, ее учет.

14. Сущность и техника постановки комплексной РА.

15. Сущность и техника постановки кольцевой реакции с молоком.

16. Сущность реакции Кумбса.

17. Отличия прямой и непрямой реакции Кумбса.

18. Сущность реакции связывания комплемента (РСК).

19. Дайте определение понятия комплемент, его назначение в РСК.

20. Дайте характеристику двух систем РСК.

21. Каково назначение бактериологической системы РСК?

22. Каково назначение гемолитической системы РСК?

23. Гемолизин, принцип его получения.

24. Чем объясняется необходимость инактивации сывороток для исследования РСК?

25. Методика постановки РСК.

26. Учет реакции связывания комплемента.

27. Для определения каких заболеваний используют РСК?

28. Сущность реакции преципитации (РП), ее практическое применение.

29. Отличие антигенов двух моносистемных прямых (осадочных) реакций - РП и РА.

30. Реакция кольцепреципитации (метод Асколи), методика постановки и учета реакции.

31. Способы получения антигенов для реакции кольцепреципитации.

32. Методы постановки диффузной преципитации (метод Удена, метод Аухтерлоки, метод двойной диффузии в агаровом геле).

33. Сущность и постановка реакции нейтрализации по методу Эрлиха.

34. Сущность метода Флюоресцирующих антител (МФА).

35. Условия постановки МФА, учет и оценка результатов.

36. Методика определения опсонофагоцитарной реакции (ОФР).

37. Опсонический индекс как иммунологический показатель (его назначение).

38. Сущность и методика постановки иммуноферментного анализа (ИФА).

39. Дайте характеристику понятия "коньюгат".

 

ЗАДАНИЯ

МИКРОБИОЛОГИИ

Редактор Крупина Н.К.

 

 

Лицензия N 020426 от 1992 г.

 

Подписано к печати 12 февраля 2003г.

 

Объем 1,9 уч. - изд. л.

Тираж 350 экз. Заказ N 56

Цена договорная

Ротапринт НГАУ

630089,Новосибирск, ул. Добролюбова, 160

 

 

Вопросы к зачету по общей микробиологии

 

1. Устройство светового микроскопа.

2. Системы объективов, назначение фронтальной линзы. Разрешающая способность микроскопа.

3. Окуляр и другие оптические части микроскопа, определение степени увеличения микроскопа.

4.Группы шаровидных бактерий.

5. Морфологические группы извитых форм микроорганизмов.

6. Особенности строения актиномицет.

7. Методика приготовления мазка - препарата.

8.Сущность метода окрашивания по Граму и его практическое значение.

9.Методы окраски спор.

10.Сущность окрашивания кисло-устойчивых бактерий.

11.Сущность окрашивания капсул.

12.Сущность метода окрашивания спор.

13.Методы определения подвижности бактерий, чем обусловлено самостоятельное движение микроорганизмов?

14.Типы жгутикования микроорганизмов.

15.Общая характеристика грибов.

16.Типы размножения грибов?

17.В чем различия совершенных и несовершенных грибов?

18.Характеристика эндо- и экзоспор гриба.

19Характеристика классов грибов.

28. Методы стерилизации.

29. Методы дробной стерилизации (чем обусловлено их применение).

30. Пастеризация.

31. Стерилизация с помощью химических веществ.

32. Основные условия и методы культивирования бактерий.

33. Классификация питательных сред по происхождению.

34. Классификация питательных сред по консистенции.

35. Требования, предъявляемые к питательным средам.

36. Классификация питательных сред по назначению.

37. Рост культуры, выращенной на жидких питательных средах.

30. На чем основан метод получения чистой культуры по методу Коха, Дригальского?

31. Методы получения чистой культуры анаэробов.

32. Особенности роста бактерий в жидких средах.

33. Характер роста бактерий на плотных питательных средах.

34. Методы определения сахаролитических свойств.

35. Что означает термин "пестрый ряд"?

36. Почему происходит изменение цвета сред "пестрого ряда"?

37. Какие углеводы используют для набора сред "пестрого ряда"?

38. Методы определения протеолитических свойств бактерий.

39. Методы определения степени протеолиза белка (индола, сероводорода, аммиака).

40. Как определяют редуцирующие свойства микроорганизмов?

41. Определение гемолитических свойств микроорганизмов.

9. Что такое антибиотики?

10. Классификация антибиотиков по происхождению, механизму и спектру.

11. Методы определения активности антибиотиков.

12. Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам.

23. Методика определения перфрингенс-титра, санитарная оценка почвы по этому показателю.

24. Определение коли-титра в воде.

25. Порядок определения коли-индекса воды.

26. Оценка воды по санитарно-биологическим показателям.

27. Методика определения кислотности молока.

28. Проба на редуктазу.

 

ЗАДАНИЯ К ПРАКТИЧЕСКИМ

ЗАНЯТИЯМ

ПО ОБЩЕЙ МИКРОБИОЛОГИИ

(издание второе, переработанное)

 

Методическая разработка

для студентов факультета ветеринарной медицины

 

Новосибирск 2009

 

 

ЗАДАНИЕ

К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ

ПО ОБЩЕЙ МИКРОБИОЛОГИИ

 

 

СТУДЕНТ_____________________________________________

 

ГРУППА______________УЧЕБНЫЙ ГОД__________________

 

Новосибирск, 2009

Программа. 1

Новосибирский государственный аграрный университет. 1

ЗАДАНИЯ К ПРАКТИЧЕСКИМ... 1

ЗАНЯТИЯМ... 1

ПО ОБЩЕЙ МИКРОБИОЛОГИИ.. 1

(издание второе, переработанное) 1

Методическая разработка. 1

Новосибирск 2006. 2

ЗАДАНИЕ.. 2

СТУДЕНТ_____________________________________________. 2

ГРУППА______________УЧЕБНЫЙ ГОД__________________. 2

Новосибирск, 2006. 3

Тема I. Общая бактериологическая техника.. 3

Контрольные вопросы.. 3

Оборудование и материалы.. 3

Методические указания. 3

Основные части микроскопа: 3

Основные правила работы с микроскопом.. 4

Техника работы с бактериологической петлей, бактериологической пробиркой, спиртовкой 4

Техника приготовления мазка-препарата, фиксирования, окрашивания. 5

Окраска фиксированного мазка-препарата по Граму. 5

Окраска спор по Ожешко. 6

Тема 2. МОРФОЛОГИЯ СОВЕРШЕННЫХ И НЕСОВЕРШЕННЫХ ГРИБОВ И АКТИНОМИЦЕТОВ 7

Контрольные вопросы.. 7

Оборудование и материалы.. 7

Методические указания. 7

Признаки плесневых грибов. 7

Грибы делятся на классы. 8

Краткий ключ для определения плесневых грибов. 8

Тема 3. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ.. 12

Контрольные вопросы.. 12

Оборудование. 12

Методические указания. 12

Тема 4. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ УЧЕТ БАКТЕРИЙ В РАЗЛИЧНЫХ СУБСТРАТАХ. 16

Контрольные вопросы.. 16

Оборудование и материалы (на одно место) 16

Посев бактерий почвы. 16

Посев бактерий воды. 17

Посев бактерий воздуха. 17

3 х 100 = 300 бактерий. 18

Тема 5. КУЛЬТИВИРОВШЕ АЭРОБОВ И АНАЭРОБОВ.. 18

Контрольные вопросы.. 18

Оборудование и материалы (на I рабочее место) 18

Методические указания. 18

Ход работы.. 19

Тема 6. ВЛИЯНИЕ УЛЬТРАФИОЛЕТОВЫХ ЛУЧЕЙ НА МИКРООРГАНИЗМЫ... 19

Контрольные вопросы.. 19

Оборудование. 19

Методические указания. 19

Ход работы.. 20

Тема 7. ВЛИЯНИЕ ТЕМПЕРАТУРЫ НА МИКРООРГАНИЗМЫ... 21

Контрольные вопросы.. 21

Оборудование. 21

методические указания. 21

Ход работы.. 21

Тема 8. ВЛИЯНИЕ АНТИБИОТИКОВ И ФИТОНЦИДОВ НА МИКРООРГАНИЗМЫ... 22

Контрольные вопросы.. 22

Оборудование. 22

Методические указания. 22

Ход работы.. 22

Тема 9. ВЫДЕЛЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР МИКРООРГАНИЗМОВ.. 23

Контрольные вопросы.. 23

Занятие 1. Выращивание изолированных колоний. 23

Оборудование. 23

Методические указания. 23

Ход работы.. 23

Занятие 2. Изучение колоний и получение чистых культур. 24

Оборудование. 24

Методические указания. 24

Ход работы.. 25

Занятие 3. Определение чистоты выделенных культур и изучение их биохимических свойств. 25

Оборудование. 25

Методические указания. 25

Ход работы.. 26

Задание 4. Определение биохимических свойств и вида выделенных культур. 26

Оборудование. 26

Методические указания. 26

Ход работы.. 27

Тема 10. МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ МОЛОКА.. 28

Контрольные вопросы.. 28

Оборудование и материалы (на одно рабочее место) 28

Методические указания. 28

Метод посева молока на МПА в чашках Петри. 28

Проба на редуктазу. 29

Определение кислотности молока титрометрическим методом. 29

Тема 11. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИ-ТИТРА ВОДЫ И МОЛОКА.. 30

Контрольные вопросы.. 30

Оборудование и материалы.. 30

Методические указания. 30

Порядок исследования воды: 31

Порядок исследования молока. 31

Терминологический диктант.. 31

Вопросы для текущего контроля знаний. 33

ТЕМА: МОРФОЛОГИЯ ГРИБОВ.. 34

ТЕМА: КУЛЬТИВИРОВАНИЕ.. 34

ТЕМА: МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ.. 35

ТЕМА: ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПАТОГЕННОСТИ МИКРОБОВ. 37

ТЕМА: РЕАКЦИЯ ИММУНИТЕТА.. 37

ЗАДАНИЯ.. 39

 

Вопросы к зачету по общей микробиологии. 42

 

 

Тема I. Общая бактериологическая техника

 

 

Контрольные вопросы

1.Микроскоп, его устройство, иммерсионная система.

2.Основные правила работы с микроскопом.

3.Техника работы с бактериологической петлей, бактериологической пробиркой, спиртовкой.

4.Техника приготовления мазка-препарата, фиксирование, простой метод окраски.

5.Сложный метод окраски по Граму.

6.Окраска спор по Ожешко и другими методами.

 

Оборудование и материалы

Микроскопы, кедровое масло, готовые окрашенные препараты (мазки), набор красок, спирт 96⁰, дистиллированная вода, фильтровальная бумага, предметные стекла, бактериологическая петля, спиртовка, физиологический раствор, салфетки, чистые культуры.

 

Методические указания

Микроскоп (“микрос” – малый, “скопо” – смотрю) предназначается для рассмотрения объектов, невидимых простым глазом. увеличение светового микроскопа достигает до2000 раз.

Основные части микроскопа:

1. Механическая часть, куда входит штатив (башмак, колонка), предметный столик, тубус с револьвером и система винтов.

2. Оптическая часть включает в себя осветительный аппарат (конденсор, диафрагма), собственно оптическую часть (объектив, окуляр). Объективы делятся на воздушно-сухие и иммерсионные (масляные). Иммерсионные объективы – между фронтальной линзой и рассматриваемым препаратом помещается капля масла. В этом случае изображение получается наиболее четко, так как стекло, масло и линза имеют одинаковый показатель преломления света и исключается рассеивание лучей.