Архитектура электронного правительства: Единая архитектура – это методологический подход при создании системы управления государства, который строится...
Своеобразие русской архитектуры: Основной материал – дерево – быстрота постройки, но недолговечность и необходимость деления...
Топ:
Техника безопасности при работе на пароконвектомате: К обслуживанию пароконвектомата допускаются лица, прошедшие технический минимум по эксплуатации оборудования...
Процедура выполнения команд. Рабочий цикл процессора: Функционирование процессора в основном состоит из повторяющихся рабочих циклов, каждый из которых соответствует...
Особенности труда и отдыха в условиях низких температур: К работам при низких температурах на открытом воздухе и в не отапливаемых помещениях допускаются лица не моложе 18 лет, прошедшие...
Интересное:
Инженерная защита территорий, зданий и сооружений от опасных геологических процессов: Изучение оползневых явлений, оценка устойчивости склонов и проектирование противооползневых сооружений — актуальнейшие задачи, стоящие перед отечественными...
Национальное богатство страны и его составляющие: для оценки элементов национального богатства используются...
Средства для ингаляционного наркоза: Наркоз наступает в результате вдыхания (ингаляции) средств, которое осуществляют или с помощью маски...
Дисциплины:
2020-06-02 | 139 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
Каталаза – это фермент, превращающий пероксид водорода (Н2О2) в воду и кислород. Химически каталаза является гемопротеином, сходным по структуре с гемоглобином, за исключением того, что содержит трехвалентное железо, а не двухвалентное.
Реагенты и материалы
А. 3% раствор перекиси водорода (хранить во флаконе из темного стекла в холодильнике)
Б. Суточная культура тестируемого микроорганизма.
Контроль качества: положительный контроль – агаровая культура Staphylococcus aureus (ATCC 25923), отрицательный контроль – агаровая культура Streptococcus pyogenes (ATCC 12344).
Методика
На предметном стекле суточная агаровая культура микроорганизма суспендируется в капле 3% раствора перекиси водорода. Пузырьки различной интенсивности появляются сразу или через 3–5 c.
Примечание
Не следует использовать для тестирования культуры старше 24 ч, так как фермент присутствует только в живых микроорганизмах, и может быть получен ложноотрицательный результат. Некоторые микроорганизмы имеют другие ферменты, разрушающие перекись водорода. Поэтому маленькие пузырьки в небольшом количестве, появляющиеся через 20–30 с, не рассматриваются как положительный тест.
Кроме того, каталаза присутствует в эритроцитах, поэтому может наблюдаться ложноположительный результат при заборе колоний со среды, содержащей кровь.
2.3. Идентификация H.influenzae с использованием X и V факторов
Потребность гемофил в Х и/или V факторах может быть определена при использовании полосок или дисков, импрегнированных Х, V и ХV факторами. При помещении на поверхность среды дисков с соответствующими факторами они легко диффундируют в питательную среду вокруг дисков. После инкубации потребность оценивается в зависимости от характера роста исследуемого микроорганизма вокруг дисков.
|
Материалы:
1) полоски или диски из фильтровальной бумаги, импрегнированные Х и V факторами (BBL, Oxoid);
2) питательная среда, не содержащая Х и V факторы (триптиказосоевый агар, сердечно-мозговой агар – brain-heart infusion agar);
3) питательный бульон (brain-heart infusion broth).
Контроль качества: Haemophilus parainfluenzae – требует V фактор, Haemophilus influenzae – требует Х и V факторы.
Методика
Приготовить легкую суспензию чистой суточной культуры исследуемого микроорганизма в питательном бульоне. Необходимо избегать переноса вместе с колониями геминсодержащей среды, что может привести к ложным результатам. С помощью стерильного тампона инокулировать поверхность питательной среды приготовленной суспензией. Поместить на поверхность агара диски или полоски, содержащие X, V и XV факторы, на расстояние 2 см друг от друга. Инкубировать 18–24 ч при температуре 35–37оС в атмосфере с 5–10% СО2.
Учет характера роста производится визуально. Наличие роста микроорганизма только вокруг дисков с Х и XV или V и XV факторами указывает на потребность соответственно в Х или V факторе. Рост только вокруг диска с XV факторами характерен для гемофил, нуждающихся в обоих факторах (например, H.influenzae).
2.4. Тест на определение O-нитрофенил- β -D-галактопиранозидазы (ONPG, β -галактозидазы)
Для демонстрации ферментации лактозы в обычных тестах требуется наличие двух ферментов. Пермеаза обеспечивает проникновение молекул лактозы в бактериальную клетку, а b-галактозидаза непосредственно гидролизует лактозу до галактозы и глюкозы.
У микроорганизмов, которые истинно не ферментируют лактозу, отсутствуют оба фермента. Однако некоторые бактерии могут не иметь пермеаз, но сохранять β-галактозидазу. ONPG (O-нитрофенил-β-D-галактопиранозидаза) – бесцветное вещество, сходное по структуре с лактозой. В присутствии β-галактозидазы ONPG разрушается на галактозу и О-нитрофенол, имеющий желтый цвет. H.influenzae в отличие от всех остальных видов рода не имеет β-галактозидазы.
|
Реактивы и материалы
В связи с большими техническими трудностями при изготовлении реактивов рекомендуется использовать готовые коммерческие диски, пропитанные ONPG (СИБ, Н.-Новгород; биоМерье, BBL, Oxoid, Difco).
Контроль качества: положительный контроль – агаровая культура Escherichia coli (ATCC 25922), отрицательный контроль – агаровая культура Proteus mirabilis (ATCC 29245).
Контроль качества следует проводить перед использованием каждого нового лота реактивов и перед тестированием каждого микроорганизма.
Методика
Приготовить густую суспензию исследуемого микроорганизма (эквивалентную стандарту мутности 2 по МакФарланду) в 0,5–1 мл 0,9% раствора хлорида натрия. Внести в пробирку таблетку или диск, содержащий ONPG, и инкубировать при температуре 35–37оС. Предварительный учет реакции возможен через 1 ч.
Положительная реакция – появление желтого окрашивания в результате образования О-нитрофенола. Отрицательный результат может быть сообщен только после 24 ч инкубации.
Приложение 3
Определение мочевины
Используются 2 реактива.
Реактив А: стерильная дистиллированная вода – 4 мл, этиловый спирт 96% – 2 мл, мочевина – 2 г.
Реактив В: 0,2% раствор фенол-рот – 1 мл, KH2PO4 – 0,1 г, K2HPO4 – 0,1 г, NaCl – 0,5 г, дистиллированная вода – 100 мл.
Приготовление. Реактив А хранится при температуре 4–10оС (не автоклавировать!). Реактив В стерилизуют при 1,5 атм. 30 мин. Перед употреблением ex tempore смешать 1 часть реактива А и 19 частей реактива В.
|
|
История развития пистолетов-пулеметов: Предпосылкой для возникновения пистолетов-пулеметов послужила давняя тенденция тяготения винтовок...
Историки об Елизавете Петровне: Елизавета попала между двумя встречными культурными течениями, воспитывалась среди новых европейских веяний и преданий...
Двойное оплодотворение у цветковых растений: Оплодотворение - это процесс слияния мужской и женской половых клеток с образованием зиготы...
Биохимия спиртового брожения: Основу технологии получения пива составляет спиртовое брожение, - при котором сахар превращается...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!