Методика обнаружения радиорезистентных микроорганизмов на предприятиях медицинской промышленности, выпускающих радиационно стерилизуемую продукцию

Методика включает три этапа работы: выделение на производстве с помощью обычных методов смешанной микрофлоры, облучение смешанной популяции суббактерицидными дозами ионизирующих излучений с целью селекции радиорезистентных микроорганизмов и качественное определение радиорезистентности у микроорганизмов после радиоселекции.

1. Выделение производственной микрофлоры проводится в цехе окончательной сборки и упаковки продукции ватными тампонами, а также из оптовой продукции путем смыва. Одним тампоном, увлажненным физиологическим раствором, в который рекомендуется добавить 1 % твина-80, протирают поверхность оборудования и рабочих мест площадью 0,2 м². Смывы с изделий производят так же, как и при определении их инициальной контаминации. Одновременно используют 5 тампонов и выборку изделий, равную удвоенной выборке, используемой для определения инициальной контаминации.

Тампоны встряхивают в течение 10 мин в пробирках с 5 до 0,9 % раствора хлорида натрия. Смывную жидкость смешивают и фильтруют через мембранный фильтр (размер пор 0,3 мкм; диаметр диска предпочтительно 60 мм). 0,1 мл неотфильтрованной смывной жидкости высевают в разведениях 1:100 - 1:10 на плотную питательную среду (МПА, агар Хоттингера, 75 % аминного азота, РН 7,0 - 7,2) методом заливки для подсчета числа жизнеспособных клеток в испытуемой жидкости. Учет результатов высева проводят через 18 - 24 ч после инкубации при 39 °С.

Смыв с изделий смешивают и обрабатывают так же, как и смывную жидкость с тампонов.

Фильтры по окончании фильтрации высушивают в боксе на открытом воздухе при комнатной температуре и отключенных бактерицидных лампах в течение 12 - 18 часов.

Пригодными для дальнейшей работы считаются фильтры, через которые профильтрована испытуемая жидкость, содержащая в целом не менее 10³ микроорганизмов (данные о содержании микроорганизмов находят путем пересчета результатов высева, с учетом общего объема профильтрованной жидкости, разведения и объема инокулянта).

2. Выделение радиорезистентных микроорганизмов из смешанной популяции. Сухие фильтры с микроэлементами облучают в дозе 1 Мрад и помещают на плотную питательную среду (агар Хоттингера, 75 % аминного азота, РН 7,0 - 7,2; МПА). Инкубацию проводят при 32 °С в течение 7 дней. Если на фильтре не вырастают колонии микроорганизмов, то делается вывод о практическом отсутствии в составе производственной микрофлоры высокорадиорезистентных микроорганизмов.

3. Качественное определение радиорезистентности микроорганизмов, выделяемых из смешанной популяции после облучения.

Выросшие на фильтре после облучения колонии пересеивают в пробирки со скошенным агаром (пункт 2), инкубируют при 32 °С в течение 18 - 24 час, а для спорообразующих микроорганизмов после инкубации в термостате дополнительно выдерживают в затемненном помещении при комнатной температуре 7 дней, и готовят по оптическому стандарту мутности на 10 ед. взвеси путем смыва физиологическим раствором микробной массы. 0,1 мл этой взвеси переносят в пробирку с 0,9 мл стерильного 0,9 % раствора хлорида натрия и облучают в дозе 3,5 Мрад. После облучения в пробирку с соблюдением правил асептики добавляют 9 мл бульона Хоттингера или МПБ, посевы инкубируют в течение 7 дней. Наличие роста свидетельствует о высокой радиорезистентности данного микроорганизма. Количественно определить радиорезистентность можно по показателям Д₁₀ (дозы облучения, при которых численность популяции микроорганизмов уменьшается в 10 раз). Высокорезистентными считаются микроорганизмы, для которых показатели Д₁₀ равны или превышают 500 крад. Такие микроорганизмы встречаются в окружающей среде весьма редко (10^-4). При обнаружении с помощью описанной методики следует улучшить соблюдение на производстве санитарно-гигиенического режима, а также при необходимости провести дополнительные санитарно-гигиенические мероприятия.

Контроль радиорезистентности производственной микрофлоры по изложенной методике рекомендуется проводить один раз в квартал.

Все выделенные штаммы микроорганизмов с положительным результатом качественного теста на радиорезистентность направляются для количественного определения радиорезистентности этих микроорганизмов в учреждении, в котором проводятся радиобиологические исследования (Институт биофизики Министерства здравоохранения СССР, Институт эпидемиологии и микробиологии им Н.Ф. Гамалеи АМН СССР, ВНИИ дезинфекции и стерилизации Минздрава СССР).

Приложение 6

Порядок обработки и дезинфекции помещений
(объем работ ежемесячного санитарного дня)

Влажную уборку с дезинфекцией в чистых производственных помещениях проводят после остановки производства для проведения ремонтных работ, в случае обнаружения в воздухе, на строительных элементах и оборудовании спорообразующей микрофлоры и грибов свыше допустимых величин, но не реже 1 раза в месяц.

Должен соблюдаться следующий порядок проведения и объем выполняемых работ:

- из помещения удаляют отходы производства и неиспользованные материалы, а продукцию и полуфабрикаты накрывают пленкой;

- выключают вытяжную и приточную вентиляции, обеспечивают лампы освещения и оборудования;

- удаляют пыль с инженерных коммуникаций, ламп освещения и т.д.;

- потолок, стены, окна, двери, стеллажи, оборудование, нетоковедущие части осветительных и бактерицидных ламп, столы, стулья и т.д., моют дезраствором при помощи перкалевых салфеток или безворсовых тряпок. Наиболее загрязненные места моют наиболее тщательно;

- двери, окна, стены и перегородки, стеллажи обильно смачивают дезрастворами или орошают из гидропульта с помощью турбулирующей аэрозольной насадки;

- после этого помещение закрывают на 35 - 45 мин. Затем удаляют с обработанных поверхностей остатки жидкости безворсовой тканью и моют пол;

- работы производить согласно рабочим инструкциям; операции, связанные с обильным применением резиновых перчаток, сапог, фартуков, а при необходимости защищать рот и нос 4-слойной марлевой повязкой.

Приложение 7