Бледная трепонема — возбудитель сифилиса

Сифилис — циклически протекающее венерическое заболевание человека, вызываемое бледной спирохетой; I стадия проявляется твердым шанкром (от фр. chancre — язва), II стадия — поражением стенки сосудов и различными сыпями, III — гуммами в различных органах с поражением нервной системы. Гумма (от лат. gummi — камедь) — хронический инфильтрат в виде узла, склонный к распадуи изъязвлению. Сифилитическая гумма (син.: сифилитическая гранулема, сифилид гуммозный, сифилома третичная) — безболезненная полушаровидная гумма, являющаяся проявлением третичного активного сифилиса. Возбудитель — Treponema pallidum — был открыт в 1905г. Ф. Шаудиноми Э. Гофманом.

Т.pallidum — микроорганизм спиралевидной формы, размерами 0,09-0,18х6-20мкм. Число завитков спирали от 8 до 12, завитки равномерны, расположены друг от друга на одинаковом расстоянии около 1мкм, высота по направлению к концам уменьшается. В электронном микроскопе вид змеи или дождевого червя. На обоих концах трепонемы расположены блефаропласты скрепленными к ним жгутиками, число которых варьирует от 2 до нескольких, они образуют осевую нить, закрученную вокруг протоплазматического цилиндра спирохеты. При неблагоприятных условиях может образовывать цисты. В организме животных может возникать мукополисахаридной природы капсулоподобный чехол.

Трепонема плохо окрашивается анилиновыми красителями, в связи с чем возбудитель сифилиса и получил название бледной спирохеты. Восстанавливает нитрат серебра в металлическое серебро, которое откладывается на поверхности микроба и делает его видимым в тканях: при окраске по Морозову трепонемы выглядят коричневыми или почти черными. При окраске по Романовскому-Гимзе приобретают бледно-розовый цвет.

Трепонемы обычно размножаются поперечным делением, при этом разделившиеся клетки могут в течение некоторого времени прилегать друг к другу. Время деления — около 30 ч.

Живые трепонемы очень подвижны, совершают движения вокруг собственной продольной оси, а также сгибательное, волнообразное и поступательное движение.

До настоящего времени пока нет такого метода, при котором бы удавалось стабильно получать культуры трепонем. Патогенные для человека бледные трепонемы никогда не удавалось культивиро­вать на искусственных питательных средах, в куриных эмбрионах или культурах клеток. Те разновид­ности их штаммов, которые растут в анаэробных условиях, являются, вероятно, сапрофитными спирохетами, близкими возбудителю сифилиса. Физиология их остается мало изученной. Трепонемы относятся к хемоорганотрофам, не имеют каталазы и оксидазы, могут сбраживать углеводы. Они растут на очень богатых средах, содержащих до 11 аминокислот, витамины, соли, сывороточный альбумин. Наилучшим способом выращивания патогенных спирохет является заражение кролика в яичко (экспериментальный орхит).

Высказано предположение о существовании у T.pallidum жизненного цикла, включающего, помимо спиралевидной формы, зернистую стадию и стадию кистоподобных сферических тел. Именно зернис­тые формы этих микроорганизмов способны проходить через бактериальные фильтры.

Антигены трепонем плохо изучены. Установлено, что в составе трепонем имеются белковые, полисахаридные и липидные комплексы. Антигенный состав культуральных и тканевых трепонем настолько близок, что антигены, приготовленные из культуральных трепонем, можно использовать для РСК при диагностике сифилиса. В организме человека трепонемы стимулируют выработку антител, которые вызывают иммобилизацию и гибель живых подвижных трепонем, связывают комплемент в присутствии суспензии T.pallidum или родственных спирохет, а также выявляются в непрямой РИФ.

Возбудитель сифилиса не образует экзотоксинов. К внешним воздействиям бледные трепонемы относительно мало устойчивы. Быстро погибают при высушивании и при повышенных температурах (при 55 °С в течение 15 мин). В 0,3-0,5%-ном растворе НС1 моментально утрачивают свою подвижность; так же быстро утрачивают ее и погибают в присутствии препаратов мышьяка, висму­та, ртути. В цельной крови или в сыворотке при 4 °С сохраняют жизнеспособность в течение 24 ч. что следует учитывать при переливании крови.

Эпидемиология. Сифилис — типичное венерическое заболевание. Источник инфекции — боль­ной человек, обычно заразен в течение 3-5 лет; больные с поздними формами сифилиса не заразны. Заражение в подавляющем большинстве случаев происходит при различных видах половых и бытовых контактов, редко — трансплацентарным путем от больной матери — ребенку (врожденный сифилис) или как профессиональное заражение контактным путем у медицинского персонала. В естественных условиях сифилисом болеет только человек, в эксперименте возможно заражение обезьян, хомяков и кроликов. У обезьян в месте введения трепонем развивается твердый шанкр, у кроликов и хомяков инфекция протекает бессимптомно.

Патогенез и клиника. Инкубационный период при приобретенном сифилисе варьирует от 2 до 10 нед, обычно — 20-28 дней. Входными воротами инфекции чаще всего являются слизистые оболочки половых органов, реже — полости рта, а также поврежденная кожа. В месте внедрения возбудитель размножается, формируется первичная сифилома (твердый шанкр) — эрозия или язва с уплотненным основанием. Далее возбудитель попадает в лимфатическую систему, развивается лимфангоит и регио­нарный лимфаденит. Это типичная клиника первичного сифилиса, который продолжается 1,5-2 мес. Потом эти признаки исчезают. Вторичный период сифилиса связан с генерализацией процесса, когда увеличиваются многие лимфатические узлы, а на коже и слизистых оболочках появляются высыпа­ния; могут наблюдаться поражения внутренних органов и нервной системы. Различают вторичный свежий и вторичный рецидивирующий сифилис. При каждом последующем рецидиве интенсивность сыпи становится все менее выраженной, а периоды между рецидивами увеличиваются. В элементах сыпи содержится большое количество живых трепонем, в этот период больной наиболее заразен. Продолжительность вторичного сифилиса — до 4 лет и более. Далее болезнь вступает в длительный бессимптомный период, по прошествии которого, через несколько лет, развивается третичный сифи­лис. При этом наблюдаются грубые органические поражения внутренних органов, сердечно-сосудис­той системы, ЦНС, костей, формируются гуммы, сопровождающиеся распадом ткани и дегенеративны­ми изменениями. Характерной клинической особенностью сифилиса является отсутствие каких-либо субъективных жалоб со стороны больного (боль, зуд, жжение и т. д.).

Иммунитет. Против сифилиса ни естественного, ни искусственного иммунитета не возникает; есть только инфекционный иммунитет, и пока он существует, человек практически не восприимчив к новому заражению. Инфекционный иммунитет развивается через 10—11 дней после появления твердо­го шанкра (шанкерный иммунитет), в этот период повторное заражение или не наблюдается, или новый образовавшийся шанкр протекает абортивно (суперинфекция). В дальнейшем при суперинфици­ровании характер возникающих поражений соответствует стадии болезни в момент повторного зара­жения. Суперинфекция объясняется временным ослаблением или «срывом» инфекционного иммуните­та. От суперинфекции необходимо отличать реинфекцию, т. е. новое, повторное заражение человека, ранее болевшего сифилисом (излечившегося) и, следовательно, утратившего инфекционный иммуни­тет. Описаны случаи даже трехкратного заболевания сифилисом. Инкубационный период у таких больных короче, чаще развиваются множественные язвенные шанкры с лимфаденитом, серологиче­ские реакции становятся положительными раньше. Во вторичном периоде папулы на коже нередко эрозируются. Это объясняется тем, что при сифилисе развивается реакция гиперчувствительности замедленного типа, после излечения в организме длительно сохраняются сенсибилизированные лим­фоциты. Инфекционный иммунитет носит нестерильный характер и обусловлен гуморальными факто­рами: в сыворотке больного обнаруживаются иммуноглобулины классов G, А и М.

Лабораторная диагностика. Существующие методы дигностики сифилиса можно разделить на две группы: 1) направленные на обнаружение возбудителя в исследуемом материале с помощью тех или иных способов микроскопии и 2) выявляющие в серологических реакциях специфические антите­ла. Исследуемым материалом для обнаружения трепонем является отделяемое твердого шанкра или его пунктат, пунктат лимфатического узла, соскоб из розеолы, ликвор. Лучше всего возбудитель выявляется в нативном материале с помощью микроскопии в темном поле или с использованием фазового контраста, что позволяет наблюдать разные типы движения живого возбуди­теля. Если уже начато лечение антибиотиками, возбудителя в патологическом материале обнаружить невозможно. Иногда пользуются непрямой РИФ или окраской препарата по Романовскому-Гимзе. Эти методы используют только для ранней диагностики сифилиса. Основным методом диагностики является серологический, так как его можно использовать на различных стадиях заболевания, кроме первичного серонегативного сифилиса. Обычно применяют комплекс серологических реакций: реакция связывания комплемента (реакция Вассермана), реакции преципитации (осадочные) — Кана, цитохолевая Закса-Витебского в различных их модификациях. В этих реакциях используют как специфиче­ский трепонемный антиген, так и кардиолипидный антиген (дифосфатидилглицерин) из бычьего серд­ца, являющиеся перекрестно реагирующими антигенами. Для взаимодействия кардиолипидного антигена с сифилитическим реагином сыворотки требуется присутствие лецитина и холестерина или какого-ли­бо другого «сенсибилизатора». Реагин представляет собой смесь IgM и IgA против некоторых антиге­нов, широко распространенных в нормальных тканях. Он обнаруживается в сыворотке нелеченных больных через 2-3 нед после заражения сифилисом, в ликворе — через 4-8 нед.

Наиболее специфической реакцией в диагностике сифилиса, особенно латентного, является реак­ция иммобилизации трепонем, особо эффективная в более поздних сроках заболевания. Сущность реакции заключается в потере подвижности тканевой культуры бледной трепонемы в присутствии сыворотки крови больного сифилисом.

Микробиологическая диагностика сифилиса основывается на лабораторном обследовании пациента. Без обнаружения бледных трепонем в элементах поражения и результатов серологического обследования нельзя поставить диагноз сифилиса.

I. МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД С помощью микроскопического метода можно обнаружить бледных трепонем в отделяемом твердого шанкра (первичный сифилис) и элементов высыпания на коже и слизистых оболочках (вторичный сифилис). Из-за низкого содержания нуклеопротеидов бледные трепонемы плохо воспринимают анилиновые красители. Поэтому наиболее успешно изучение и обнаружение возбудителя в нативных препаратах в темном поле зрения. Однако можно окрашивать мазки по методу Романовского-Гимзы (длительно) или проводить импрегнацию серебром.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Начиная с 4-й недели от момента появления твердого шанкра, наступает серо-позитивный период, когда с целью диагностики сифилиса можно ставить различные серологические реакции. Особенность серологического метода заключается в том, что могут быть использованы неспецифический и специфический антигены (соответственно неспецифические и специфические реакции).

1. НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ИЛИ РЕАГИНОВЫЕ ТЕСТЫ - в качестве антигена используют кардиолипиновый антиген (холестеринизированыий спиртовой экстракт из мышц бычьего сердца). Сюда относятся реакция связывания комплемента Вассермана, осадочные реакции, реакции микропреципитации.

2. СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ИЛИ ТРЕПОНЕМАЛЬНЫЕ ТЕСТЫ основаны на выявлении в сыворотке крови больных антител к трепонемальному антигену (живые и убитые трепонемы, экстракты из трепонем). В качестве антигена могут быть использованы:

а) ТРЕПОНЕМЫ РЕЙТЕРА - культуральные спирохеты, выращенные на искусственной питательной среде и не обладающие вирулентностью;

б) ТРЕПОНЕМЫ НИКОЛЬСА ИЛИ ТКАНЕВЫЕ ТРЕПОНЕМЫ - патогенные трепонемы, полученные при заражении кролика в яички бледной трепонемой.

Из трепонемальных тестов в настоящее время чаще всего используют иммунофлюоресцентный адсорбционный тест (ИФАТ) и трепонемальную микрогемагглютинацию. В обоих случая сыворотку больного предварительно адсорбируют трепонемами Рейтера для удаления антител к общим для всех видов спирохет антигенам. В качестве антигена в ИФАТ используют трепонемы Никольса, а в микрогемагглютинации -эритроциты с сорбированными на них антигенами трепонемы Никольса.

К трепонемальным тестам относятся также РСК (в качестве антигена используют взвесь убитых трепонем - трепонемы-Никольса) и реакция иммобилизации трепонем.