Определение мочевины в сыворотке крови диацетилмонооксимным методом

 

Для проведения анализа используют 3 пробирки, соответственно опытная, стандартная и контрольная пробы.

В опытную пробирку вносят 0,1 мл сыворотки крови, в стандартную – 0,1 мл стандартного раствора мочевины, в контрольную – 0,1 мл дистиллированной воды. В каждую пробирку добавляют по 2,0 мл рабочего раствора и нагревают 5 мин в кипящей водяной бане. Затем пробы быстро охлаждают в токе холодной воды и фотометрируют. Измерение оптической плотности пробы проводят при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете толщиной 0,5 см против контрольной пробы.

Ввиду нестабильности окрашенного комплекса следует фотометрировать раствор не позже, чем через 15 мин после охлаждения пробы.

 

Расчет производят по формуле:

А₁

Х = ------- × 16,65

А₂

где Х - концентрация мочевины, ммоль/л;

А₁ - оптическая плотность опытной пробы;

А₂ - оптическая плотность стандартной пробы.

 

Содержание мочевины в норме:

В сывортке крови __________________ 2,50 – 8,33 ммоль/л

В моче ____________________________ 333 – 583 ммоль/сут.

ТЕОРЕТИЧЕСКИЙ РАЗДЕЛ

 

1. Декарбоксилирование аминокислот, типы, биологическое значение. Биогенные амины, синтез, их функции, реакции окисления.

2. Пути образования и обезвреживания аммиака в организме.

3. Тканевое обезвреживание аммиака (синтез глутамина и аспарагина). Роль глутаминазы в поддержании кислотно-основного равновесия в организме.

4. Биосинтез мочевины. Нарушения синтеза и выведения мочевины.

5. Пути катаболизма аминокислот в организме. Гликогенные и кетогенные аминокислоты.

6. Метаболизм метионина: образование S-аденозилметионина, его участие в реакциях трансметилирования, реакции синтеза креатина. Липотропное действие метионина.

7. Пути обмена фенилаланина и тирозина в норме и патологии. Наследственные нарушения обмена фенилаланина и тирозина (фенилкетонурия, алкаптонурия, альбинизм).

 

Л И Т Е Р А Т У Р А:

 

1. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. – 3-е изд. – М.: Медицина, 1998. – С. 439-451, 454-457, 467-468.

2. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. – 2-е изд. – М.: Медицина, 1990. – С. 344-354, 357-360, 367-368.

3. Николаев А. Я. Биологическая химия. – М.: Высш. шк., 1989. – С. 313-323, 325-327, 331-339.

5. Конспект лекций.

 

 

З А Н Я Т И Е № 31

 

 

ТЕМА: ОБМЕН И ФУНКЦИИ АМИНОКИСЛОТ – III.

ОБМЕН НУКЛЕОТИДОВ

 

ЦЕЛЬ: Сформировать знания об обмене нуклеотидов. Составить метаболическую карту обмена аминокислот.

 

СЕМИНАРСКОЕ ЗАНЯТИЕ

 

СОДЕРЖАНИЕ ЗАНЯТИЯ:

 

1. Разбор вопросов теоретического раздела.

2. Письменная работа по теоретическому разделу.

3. Самостоятельная аудиторная работа в соответствии с предложенными заданиями.

4. Решение и обсуждение ситуационных задач.

5. Контроль выполнения самостоятельной работы.

 

 

ТЕОРЕТИЧЕСКИЙ РАЗДЕЛ

 

1. Биосинтез пуриновых нуклеотидов: реакции биосинтеза фосфорибозиламина, происхождение атомов пуринового ядра.

2. Инозиновая кислота как предшественник адениловой и гуаниловой кислот. Регуляция биосинтеза пуриновых нуклеотидов.

3. Биосинтез пиримидиновых нуклеотидов. Регуляция биосинтеза пиримидиновых нуклеотидов.

4. Синтез дезоксирибонуклеотидов. Синтез тимидиловой кислоты.

5. Распад нуклеиновых кислот в желудочно-кишечном тракте и тканях.

6. Распад пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов.

7. Нарушения обмена нуклеотидов: ксантинурия, оротацидурия, подагра.

 

Л И Т Е Р А Т У Р А:

 

1. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. – 3-е изд. – М.: Медицина, 1998. – С. 469-477, 498-503.

2. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. – 2-е изд. – М.: Медицина, 1990. – С. 369-376, 390-394.

3. Николаев А. Я. Биологическая химия. – М.: Высш. шк., 1989. – С. 339-350.

4. Конспект лекций.

 

 

З А Н Я Т И Е № 32

 

 

ТЕМА: КОНТРОЛЬНОЕ ЗАНЯТИЕ «ОБМЕН И ФУНКЦИИ АМИНОКИСЛОТ. ОБМЕН НУКЛЕОТИДОВ»

 

1. Динамическое состояние белков организма. Азотистый баланс. Источники и пути расходования аминокислот в тканях.

2. Переваривание белков в желудочно-кишечном тракте.

3. Всасывание аминокислот. Наследственные нарушения транспорта аминокислот.

4. Превращение аминокислот микрофлорой кишечника.

5. Расщепление белков в тканях. Катепсины. Общие пути обмена аминокислот в организме.

6. Пути дезаминирования аминокислот. Окислительное дезаминирование и восстановительное аминирование. Биологическое значение.

7. Трансаминирование аминокислот, биологическое значение. Коферментная функция витамина В₆. Механизм трансаминирования аминокислот. Клинико-диагностическое значение определения активности трансаминаз.

8. Непрямое дезаминирование аминокислот (трансдезаминирование), трансреаминирование. Биологическое значение.

9. Типы декарбоксилирования аминокислот в животных тканях. Биологическое значение реакций декарбоксилирования.

10. Биогенные амины (триптамин, гистамин, серотонин, g-аминомаслянная кислота, катехоламины), их синтез и функции. Окисление биогенных аминов.

11. Пути образования и обезвреживания аммиака в организме. Тканевое обезвреживание NH₃ (синтез глутамина и аспарагина). Роль глутаминазы в поддержании кислотно-основного равновесия в организме.

12. Биосинтез мочевины. Нарушения синтеза и выведения мочевины.

13. Пути катаболизма аминокислот в организме. Гликогенные и кетогенные аминокислоты.

14. Схема метаболизма метионина. Реакция синтеза S-аденозилметионина, его биологическая роль. Липотропное действие метионина.

15. Участие метионина в реакциях трансметилирования (на примере реакций синтеза креатина, его биологическая роль).

16. Пути обмена фенилаланина и тирозина в норме и патологии. Врожденные нарушения их обмена (фенилкетонурия. алкаптонурия. альбинизм).

17. Биосинтез пуриновых нуклеотидов: реакции синтеза фосфорибозиламина, происхождение атомов пуринового ядра.

18. Инозиновая кислота как предшественник адениловой и гуаниловой кислот. Регуляция биосинтеза пуриновых нуклеотидов.

19. Биосинтез пиримидиновых нуклеотидов. Регуляция биосинтеза пиримидиновых нуклеотидов. Оротацидурия.

20. Синтез дезоксирибонуклеотидов. Синтез тимидиловой кислоты.

21. Распад нуклеиновых кислот в желудочно-кишечном тракте и тканях.

22. Распад пуриновых нуклеотидов. Ксантинурия. Подагра.

23. Распад пиримидиновых нуклеотидов.

З А Н Я Т И Е № 33

 

 

ТЕМА: БИОХИМИЯ ПЕЧЕНИ

 

ЦЕЛЬ: Сформировать знания о роли печени в обмене билирубина,

причинах гипербилирубинемии. Освоить количественный метод

определения билирубина в сыворотке крови.

 

ЛАБОРАТОРНЫЙ ПРАКТИКУМ

 

СОДЕРЖАНИЕ ЗАНЯТИЯ:

 

1. Разбор вопросов теоретического раздела.

2. Контрольные вопросы к лабораторной работе:

2.1. Превращение гемоглобина в тканях, образование непрямого билирубина, его обезвреживание в печени, экскреция.

2.2. Нарушения обмена билирубина. Гипербилирубинемия, ее причины. Виды желтух.

2.3. Принцип метода количественного определения прямого и непрямого билирубина в сыворотке крови.

2.4. Диагностическое значение определения билирубина и других желчных пигментов в крови и моче.

3. ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА:

3.1. Количественное определение билирубина в сыворотке крови.

4. Контроль выполнения лабораторной работы.

5. Письменная контрольная работа по теоретическому разделу.

 

Л И Т Е Р А Т У Р А:

 

1. Кушманова О. Д., Ивченко Г. М. Руководство к лабораторным занятиям по биохимии, М., Медицина, 1983. – С. 228-232. Работа 86 (количественное определение).

2. Лукашик Н. К., Климович В. В. Руководство к лабораторным занятиям

по биологической химии. – Гродно, 2000. – С. 66-67. Работа 29.

 

 

ТЕОРЕТИЧЕСКИЙ РАЗДЕЛ

 

1. Роль печени в обмене углеводов, липидов, аминокислот и белков.

2. Обезвреживающая функция печени: обезвреживание токсических веществ путем защитных синтезов, микросомальным окислением, ацетилированием, конъюгацией с глюкуроновой и серной кислотами.

3. Реакции синтеза гема, субстраты, ферменты.

4. Роль печени в пигментном обмене. Обмен билирубина в норме и патологии.

5. Желтухи, их виды. Биохимическая диагностика желтух по исследованию билирубина и других желчных пигментов в крови и моче.

6. Биохимические механизмы патогенеза печеночной недостаточности. Биохимические методы диагностики поражений печени.

 

Л И Т Е Р А Т У Р А:

 

1. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. – 3-е изд. – М.: Медицина, 1998. – С. 503-508, 551-565.

2. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. – 2-е изд. – М.: Медицина, 1990. – С. 394-398, 427-436.

3. Николаев А. Я. Биологическая химия. – М.: Высш. шк., 1989. – С.411-418, 423-424, 428-430.

4. Конспект лекций.

 

 

З А Н Я Т И Е № 34

 

 

ТЕМА: БИОХИМИЯ ПОЧЕК И МОЧИ

ЦЕЛЬ: Сформировать знания о водно-минеральном обмене. Освоить практические приемы качественного и количественного определения патологических компонентов в моче. Освоить использование экспресс-методов в биохимических исследованиях.

 

СОДЕРЖАНИЕ ЗАНЯТИЯ:

 

1. Разбор вопросов теоретического раздела.

2. Контрольные вопросы к лабораторной работе:

2.1. Общие свойства мочи, их изменение в норме и патологии.

Химический состав мочи.

2.2. Патологические компоненты мочи (белок, глюкоза, кровяные пигменты, кетоновые тела, желчные пигменты), причины их появления.

2.3. Принципы методов открытия патологических компонентов в моче.

2.4. Диагностическое значение биохимического анализа мочи (на примере: мочевины, мочевой кислоты, креатинина, пировиноградной кислоты, 17-кетостероидов, витамина С, диастазы).

3. ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА:

3.1. Качественная реакция на белок.

3.2. Количественное определение белка.

3.3. Количественное определение глюкозы.

3.4. Качественное определение ацетона.

3.5. Качественная реакция на кровяные пигменты.

3.6. Качественная реакция на желчные пигменты.

3.7. Определение веществ в биологическом материале с помощью экспресс-методов (демонстрация).

4. Контроль выполнения лабораторной работы.

5. Письменная контрольная работа по теоретическому разделу.

 

Л И Т Е Р А Т У Р А:

 

1. Кушманова О. Д., Ивченко Г. М. Руководство к лабораторным занятиям по биохимии, М., Медицина, 1983. – С. 240-249. Работы 91, 92, 93, 94, 95, 96 (пункт а).

2. Лукашик Н. К., Климович В. В. Руководство к лабораторным занятиям

по биологической химии. – Гродно, 2000. – С. 76-80. Работа 33.

 

 

ТЕОРЕТИЧЕСКИЙ РАЗДЕЛ

 

1. Компартментализация жидкости в организме. Сравнительный состав и основные характеристики жидкостей.

2. Вода, биологическая роль в организме. Обмен воды.

3. Регуляция объема и осмоляльности внеклеточной жидкости. Роль антидиуретического гормона, системы ренин-ангиотензин, альдостерона, предсердного натрийуретического фактора.

4. Механизмы регуляции рН жидкостей организма.

5. Нарушения водно-электролитного обмена и кислотно-основного равновесия. Представление об обезвоживании, отеках, ацидозе, алкалозе.

6. Минеральные компоненты тканей, классификация, представители, биологическая роль.

7. Натрий, калий, биологическая роль, обмен, регуляция баланса.

8. Кальций, фосфор, биологическая роль, обмен, регуляция баланса.

9. Эссенциальные микроэлементы, биологическая роль.

 

Л И Т Е Р А Т У Р А:

 

1. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. – 3-е изд. – М.: Медицина, 1998. – С. 582-585, 586-591, 608-624.

2. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. – 2-е изд. – М.: Медицина, 1990. – С. 449-457, 473-487.

3. Николаев А. Я. Биологическая химия. – М.: Высш. шк., 1989. – С. 358-367, 384-389, 437.

4. Конспект лекций.

З А Н Я Т И Е № 35

 

 

ТЕМА: БИОХИМИЯ КРОВИ. АНАЛИЗ ЖЕЛУДОЧНОГО СОКА

 

ЦЕЛЬ: Сформировать знания о биохимии крови. Освоить анализ желудочного сока.

 

ЛАБОРАТОРНЫЙ ПРАКТИКУМ

 

СОДЕРЖАНИЕ ЗАНЯТИЯ:

 

1. Разбор вопросов теоретического раздела.

2. Контрольные вопросы к лабораторной работе:

2.1. Химический состав желудочного сока, ферменты. Фактор Кастла и его биологическая роль.

2.2. Роль соляной кислоты в пищеварении. рН желудочного сока.

Базальная и стимулированная секреция.

2.3. Виды кислотности желудочного сока, единицы выражения, нормальные величины.

2.4. Патологические компоненты желудочного содержимого.

2.5. Принцип методов определения всех видов кислотности желудочного сока..

2.6. Принцип качественных реакций на молочную кислоту и кровь в желудочном соке.

2.7. Диагностическое значение биохимического анализа желудочного сока. Понятие о гиперхлоргидрии, ахлоргидрии, гипохлоргидрии, ахилии.

3. ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА:

3.1. Количественное определение кислотности желудочного сока:

3.1.1. Определение свободной соляной кислоты.

3.1.2. Определение общей кислотности.

3.1.3. Определение общей кислотности, общей соляной кислоты, свободной соляной кислоты и связанной соляной кислоты в одной порции желудочного сока.

3.2. Патологические составные части желудочного сока.

3.2.1. Обнаружение молочной кислоты по реакции Уффельмана.

3.2.2. Бензидиновая проба на кровь.

3.3. Контрольная лабораторная работа по пункту 3.1.3.

4. Контроль выполнения лабораторной работы.

5. Письменная контрольная работа по теоретическому разделу.

 

Л И Т Е Р А Т У Р А:

 

1. Кушманова О. Д., Ивченко Г. М. Руководство к лабораторным занятиям по биохимии, М., Медицина, 1983. – С. 143-144, 169-174. Работы 66, 67.

2. Лукашик Н. К., Климович В. В. Руководство к лабораторным занятиям

по биологической химии. – Гродно, 2000. – С. 70-75. Работы 31 и 32.

ТЕОРЕТИЧЕСКИЙ РАЗДЕЛ

 

1. Кровь, общая характеристика, функции крови.

2. Особенности метаболизма в форменных элементах крови.

3. Гемоглобин человека, строение, производные гемоглобина, варианты в онтогенезе. Гемоглобинопатии.

4. Участие гемоглобина в транспорте кислорода и углекислого газа кровью. Гипоксии.

5. Обмен железа. Нарушения обмена железа: железодефицитные анемии.

6. Белки сыворотки крови, их характеристика.

7. Кининовая система, биологическая роль.

8. Свертывание крови. Факторы свертывающей системы крови. Внутренняя и внешняя системы коагуляционного механизма.

9. Противосвертывающая и фибринолитическая системы крови. Патология (представление о тромбозах, гемофилии, ДВС – синдроме).

10. Биохимический анализ крови, основные показатели, значение в клинико-лабораторной диагностике.

 

Л И Т Е Р А Т У Р А:

 

1. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. – 3-е изд. – М.: Медицина, 1998. – С. 78-85, 503-504, 567-607.

2. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. – 2-е изд. – М.: Медицина, 1990. – С. 65-71, 394-395, 438-472.

3. Николаев А. Я. Биологическая химия. – М.: Высш. шк., 1989. – С. 397-398, 427-428, 430-444, 445-448.

4. Конспект лекций.

 

 

З А Н Я Т И Е № 36

 

 

ТЕМА: БИОХИМИЯ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ, МЫШЦ,

СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ

 

ЗАЧЕТНОЕ ЗАНЯТИЕ

 

ЦЕЛЬ: Сформировать знания об основных особенностях биохимических процессов в нервной, мышечной и соединительной тканях. Подвести итоги выполнения учебного плана по предмету.

 

СОДЕРЖАНИЕ ЗАНЯТИЯ:

 

1. Разбор вопросов теоретического раздела.

2. Провести компьютерный контроль знаний студентов по лабораторному практикуму.

3. Подведение итогов выполнения учебного плана по биологической химии.

 

ТЕОРЕТИЧЕСКИЙ РАЗДЕЛ

 

1. Морфохимический состав нервной ткани. Транспорт веществ в ткани мозга, роль гематоэнцефалического барьера. Аксональный транспорт.

2. Особенности метаболизма углеводов, липидов и аминокислот в нервной ткани. Энергетический обмен в головном мозге.

3. Биохимические механизмы возникновения и проведения нервного импульса. Молекулярные механизмы синаптической передачи.

4. Особенности строения и состава мышечной ткани. Миофибриллярные и саркоплазматические белки мышц, характеристика, функции.

5. Биохимические механизмы сокращения и расслабления мышц. Роль ионов в регуляции мышечного сокращения.

6. Химический состав межклеточного вещества соединительной ткани. Коллаген, эластин – особенности обмена.

7. Протеогликаны, гликопротеины – особенности синтеза и распада, роль в организме.

 

Л И Т Е Р А Т У Р А:

 

1. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. – 3-е изд. – М.: Медицина, 1998. – С. 625-671.

2. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. – 2-е изд. – М.: Медицина, 1990. – С. 488-526.

3. Николаев А. Я. Биологическая химия. – М.: Высш. шк., 1989. – С. 399-411, 448-481.

4. Конспект лекций.