Действие препаратов РНК на рыб

Работы, выполненные совместно с Сектором вирусологии ВНИИПРХа к.б.н. И.С.Щелкуновым, по противовирусной активности препарата вестин (ридостин) на представителе низших позвоночных - карпе позволили впервые показать, что дрожжевая дсРНК эффективна против рабдовирусной инфекции, весенней виремии карпа (ВВК). Эта инфекция вызывает одно из самых распространенных заболеваний в рыбоводных хозяйствах России и СНГ. Поэтому данное исследование имеет как теоретическую, так и практическую значимость. Рыбы способны продуцировать интерферон также, как и все позвоночные животные. На рис. 10 представлены данные о синтезе интерферона у карпа после введения ему дсРНК.

 

 

Рис. 10. Продукция сывороточного интерферона у карпа, индуцированного в/бр введением двуспиральной РНК.

На рис 11 представлены сравнительные данные профилактической эффективности препаратов на основе впРНК (полирибонат, в дозе 100 мг\кг), дсРНК (вестин, в дозе 10 мг\кг) после однократной инъекции годовикам карпа и последующего экспериментального заражения рабдовирусом. Эффективность дсРНК (вестина) составила 85%, а впРНК - 40-45%, при этом она в значительной степени зависит от возраста.

 

Рис. 11. Эффективность профилактического применения препаратов РНК у карпа против заражения их вирусом ВВК.

 

На рис. 12 представлены данные по продолжительности противовирусного эффекта препарата вестин у рыб.

 

 

Рис. 12.. Продолжительность профилактического эффекта однократного введения препарата вестин в дозе 10 мг/кг годовикам карпа.

 

Как показали результаты, после однократной инъекции препарата продолжительность эффекта против серии последующих экспериментальных заражений рабдовирусом составляет 21 день при 70%-ной защите, тогда как у млекопитающих такой период после применения дрожжевой дсРНК: у мышей 2-3 дня, у поросят - 6 дней. Эти сравнительные эффекты препарата вестин у высших и низших позвоночных описаны впервые.

Анализ литературных данных и результатов собственных исследований позволил рассмотреть положения об основных принципах функционирования системы резистентности с участием РНК и препаратов на её основе у организмов различных классов (см Рис. 8). На рисунке 8 представлены обобщенные данные противовирусных эффектов препарата вестин (ридостин) как у экспериментальных животных, так и организмов различных классов.

В основу концепции об универсальной роли РНК в формировании противоинфекционной устойчивости различных классов организмов вошли следующие факты и положения:

- специфические противоинфекционные эффекты препаратов на основе РНК (особенно противовирусные) наблюдаются у различных видов позвоночных: мышей, крыс, кроликов, собак, свиней, крупного рогатого скота, обезьян, человека, птиц, рыб и даже у растений;

- противоинфекционные эффекты однонитевых и двуспиральных РНК выяснены в отношении широкого круга микроорганизмов, хламидий и вирусов;

- противоинфекционные эффекты препаратов РНК развиваются в зависимости от величины молекулярной массы и конформационной структуры молекулы РНК. Антибактериальные эффекты в большей степени обусловлены действием на организм однонитевых РНК, противовирусные эффекты - действием двуспиральных РНК. Эти эффекты, по-видимому, связаны с тем, что в эволюции макроорганизм сталкивался (и сталкивается) с вирусами, содержащими одно- и двуспиральные РНК;

- часть противоинфекционных эффектов (особенно антибактериальных), обусловленных возникновением тахифилаксии (состояние быстрой устойчивости), прослеживается на уровне моно-, олигорибонуклеотидов и однонитевых РНК, часть (противовирусные эффекты) прослеживаются на уровне двуспиральных РНК;

- механизм осуществления противоинфекционных эффектов природных высокомолекулярных структур РНК реализуется, в основном, вероятно, через действие на сигнальные системы клеток с участием Toll-like рецепторов, а низкомолекулярных РНК - через систему обменных (анаболических и катаболических) процессов;

- в осуществлении противоинфекционной устойчивости организма под действием РНК важную роль играет система неспецифической резистентности, возникшая на более ранних этапах эволюции и основанная на механизмах стимуляции фагоцитоза и ген-индуцирующей активации цитокинов и лимфокинов.

 

Пробиотик -субалин

В НИКТИ БАВ ГНЦ ВБ "Вектор" совместно с ИМБ АН Ураины разработан новый лечебно-профилактический пробиотический препарат комплексного действия - субалин. В основу препарата положены антагонистически активные бактерии сапрофитного штамма Вacillus subtilis с введенным геном, продуцирующим антивирусный белок - интерферон. Субалин подавляет рост и размножение широкого спектра патогенных и условно-патогенных микроорганизмов и энтеропатогенных вирусов - возбудителей инфекционных заболеваний и процессов гниения кормов. При пероральном приеме субалина (с кормом или при индивидуальном вскармливании) увеличивается фагоцитарная активность лейкоцитов крови, повышается естественная резистентность организма к различным видам инфекционных (включая вирусные) и неинфекционных заболеваний, нормализуется обмен веществ, стимулируется гуморальный иммунный ответ, повышается эффективность вакцинации.

Субалин при добавлении в корм улучшает его качество и усвояемость за счет продукции бактериями В.subtilis целого ряда физиологически активных веществ (витаминов, незаменимых аминокислот, ферментов и т.п.), что позволяет рекомендовать субалин для здоровых животных с профилактической целью. Употребление субалина повышает привесы животных, снижает расходы кормов на единицу продукции на 10-15%.

Эффективность субалина при лечении телят испытана сотрудниками Украинского отделения УНИИВС на молочном комплексе Зборовского района Тернопольской области. Установлено, что в хозяйстве в 4-55 дневном возрасте заболевает до 72,7% поголовья, причем в 45% случаев заболевание протекает в тяжелой и в 27,3% - в слабовыраженной форме. При применении субалина заболеваемость снизилась до 10%. Диспепсии наблюдались в слабовыраженной форме, длительность болезни снизилась до 2-4 суток. У животных отмечалось хорошее или очень хорошее состояние, аппетит значительно улучшился. На основании полученных результатов совместно со специалистами хозяйства был разработан технологический процесс с применением субалина, направленный на увеличение жизнеспособности новорожденных телят.

 

Ферменты-нуклеазы

Использование ферментов-нуклеаз в качестве противовирусных средств основано на их способности расщеплять нуклеиновые кислоты. К списку нуклеаз, проявляющих противовирусные свойства на моделях in vitro, относят панкреатические РНКазы, ДНКазы, а также эндонуклеазу Serracia marcescens. Установлено, что рибонуклеазы обладают выраженной противовирусной активностью в отношении таких РНК-содержащих вирусов, как вирусы гриппа, полиомиелита, клещевого энцефалита. Дезоксирибонуклеазы тормозят синтез и размножение ДНК-содержащих вирусов, осповакцины, аденовируса, герпеса. Эндонуклеаза Serracia marcescens способна расщеплять НК как РНК-, так и ДНК-содержащих вирусов. Фермент тормозил размножение, соответственно, вирусов везикулярного стоматита и осповакцины в культуре клеток куриных фибробластов, а также герпес вирусную инфекцию у кроликов.

Инактивация ферментативных свойств нуклеаз приводит также к потере их противовирусной активности. Установлено, что нуклеазы не инактивируют нативный вирус вне клетки и действуют в основном на вирус, размножающийся в клетках. Наблюдается прямая зависимость противовирусной активности эндонуклеазы от концентрации фермента в среде.

Клинические применения ферментов показали высокую эффективность ДНКазы при заболеваниях человека, вызываемых вирусом герпеса и аденовирусами, а РНКазы - при клещевом энцефалите у людей и при чуме у собак. РНКаза и эндонуклеаза бактериальная оказались эффективными против вирусного паралича пчел в профилактической схеме. В то же время эндонуклеаза была мало эффективна in vivo против вирусных заболеваний млекопитающих и других насекомых. Пролонгированная форма эндонуклеазы бактериальной - эндоглюкин обладает более выраженными противовирусными свойствами у пчел. Одновременно повысилась эффективность препарата как стимулятора развития пчелосемей.

Респираторные заболевания у телят чаще всего имеют вирусную этиологию. С целью изучения эффективности противовирусного действия эндонуклеазы были проведены опыты на телятах против неидентифицированных респираторных заболеваний телят. Препарат применялся аэрозольно интраназально и интратрахеально на 550 головах двукратно через 3-5 дней. Контрольная группа животных - 1100 голов оставалась без обработки.

Доза препарата составляла 2000 ед.акт. на теленка весом до 50 кг и 4000 ед.акт. на теленка весом до 100 кг. Эффективность лечебно-профилактического применения препарата колебалась от 30 до 40% и носила не ярко выраженный характер.

Для повышения эффективности эндонуклеазы предлагается его новая форма - эндоглюкин, которая при применении на пчелах проявила лечебное и профилактическое действие против ряда вирусных заболеваний пчел. Это дает основание для изучения эффективности новой формы препарата против вирусных респираторных заболеваний телят, а также для снижения вирусной нагрузки на цыплят при наклеве.

 

 

Препараты, разработанные в НИКТИ БАВ (Приложение 1)

 

Э Н Д О Г Л Ю К И Н

ЭНДОГЛЮКИН - ферментный препарат на основе эндонуклеазы, обладает выраженным противовирусным действием - тормозит размножение различных вирусов путем гидролиза вирусных нуклеиновых кислот. Эндоглюкин оказывает стимулирующее воздействие на весенне-летнее развитие пчелосемей. Защищен патентом.

П Р И М Е Н Е Н И Е Эндоглюкин предназначен для ПРОФИЛАКТИКИ и ЛЕЧЕНИЯ вирусных заболеваний пчел (острый и хронический паралич, филаментовироз, мешотчатый расплод и др.) и стимуляции развития пчелиных семей.

Получены положительные результаты по использованию эндоглюкина на производ-ственной и домашней птице в целях профилактики и лечения вирусных заболеваний, а также при респираторных болезнях телят.

Эндоглюкин стимулирует развитие пчелиной семьи, что дает увеличение расплода на 15-30 % по сравнению с семьями без обработки. Это позволяет делать за сезон в Средней России два-четыре отводка от семьи, пакеты пчел после обработки эндоглюкином занимают осенью от 12 до 22 рамок. Медосбор увеличивается на 20-50 % по сравнению с семьями, которых не обработали эндоглюкином.

Мед, полученный от пчелосемей, которых обработали эндоглюкином, может быть использован в пищу без ограничений. Препарат безопасен для людей, производящих обработку пчел.

Ф О Р М А В Ы П У С К А и Х Р А Н Е Н И Е: Эндоглюкин выпускается в виде наборов для ОДНОКРАТНОЙ обработки ДВУХ и ДЕСЯТИ пчелосемей. Наборы рекомендуется хранить при температуре не выше +25 °С в течение 4-х лет.

 

 

Э Н Д О Г Л Ю К И Н

С Д О Б А В К О Й П Р О Т И В

А С К О С Ф Е Р О З А

ЭНДОГЛЮКИН - ферментный препарат на основе эндонуклеазы, обладает выраженным противовирусным действием - тормозит размножение различных вирусов путем гидролиза вирусных нуклеиновых кислот. Эндоглюкин оказывает стимулирующее воздействие на весенне-летнее развитие пчелосемей. Добавка дает дополнительное лечебное качество - против грибка Ascosphaera apis. Добавка - вытяжка из семян некоторых цитрусовых. Защищена патентом.

П Р И М Е Н Е Н И Е Эндоглюкин с добавкой используется для ПРОФИЛАКТИКИ и ЛЕЧЕНИЯ вирусных заболеваний пчел (острый и хронический паралич, филаментовироз, мешотчатый расплод и др.), стимуляции развития пчелинных семей, а также против АСКОСФЕРОЗА.

Обрабатывая эндоглюкином с добавкой незапечатанный расплод, Вы лечите зараженную пчелосемью от АСКОСФЕРОЗА, если она поражена, или производите профилактику от заражения аскосферозом, заносимым пчелами извне, к тому же, стимулируете развитие пчелиной семьи, что дает увеличение расплода по сравнению с семьями без обработки.

К концу сезона пораженная семья набирает силу и сможет увеличить медосбор по сравнению с семьями, которых НЕ обработали эндоглюкином. Вы экономите на лекарствах и не снижаете иммунитета пчел, как это бывает при использовании существующих противоаскосферозных препаратов.

Мед, полученный от пчелосемей, которых обработали эндоглюкином, может быть использован в пищу без ограничений. Препарат безопасен для людей, производящих обработку пчел.

Ф О Р М А В Ы П У С К А и Х Р А Н Е Н И Е: Эндоглюкин с добавкой также выпускается в виде наборов для ОДНОКРАТНОЙ об-работки ДВУХ и ДЕСЯТИ пчелосемей. Наборы рекомендуется хранить при температуре не выше +25 °С от 2 до 4-х лет.

 

П Р О Ф Е З И М

ПРОФЕЗИМ - пролонгированный ферментный препарат, который представляет собой комплекс протеаз, продуцируемый Bacillus subtillis, обладающий способностью быстро очищать гнойно-некротические раны за счет длительного гидролиза денатурированных белков без потери протеолитической активности, оказывая некролитический, противоотечный Аликин Ю.С., Кашперова Т.А., Юшков Ю.Г., Понюхов В.А. Комплексное применение пробиотиков и иммунномодуляторов для получения экологически чистых продуктов питания птицеводства:Методические рекомендации/ (НИКТИ БАВ) РАСХН, Сиб. отд-ние, ИЭВСиДВ., СХ ОАО «Белореченское». – Новосибирск, 2016. - 89с.

и противовосполительный эффекты в первой фазе раневого процесса, стимулирует регенерацию, ускоряет рост и созревание грануляционной ткани во второй фазе, снижает интоксикацию организма продуктами распада тканей и токсинами микрофлоры. Защищен патентом.

П Р И М Е Н Е Н И Е Профезим предназначен для лечения сельскохозяйственных животных, на зверофермах, у домашних и лабораторных животных:

- острых гнойно - некротических процессов различной этиологии: гнойных ран после вскрытия абсцессов и флегмон, инфицированных ран и послеоперационных осложнений и т.п.,

- некротических пододермитов,

- некробактериоза в стадии изъязвления, различных эрозий,

- кожный покров после ожогов,

- длительно незаживающих ран (например,в дистальной области у копытных, трофических и лучевых язв и т.п.).

Профезим достаточно дешевый из всех препаратов аналогичного действия, является нерастворимым соединением и не всасывается в кровь - значит не вызывает аллергических реакций. В сравнении с другими: процель (присыпка) - токсичен, иммозим (раствор) - требует частых смен повязок, быстро теряет протеолитическую активность при применении на раневой поверхности, хитогель (дорогой) - требует до 4 смен повязок. Повязка с профезимом ставится один раз на 3-4 суток. Достаточно 3-х перевязок. Фасовка профезима рассчитана на покрытие 10 кв.см. раневой поверхности.

Ф О Р М А В Ы П У С К А и Х Р А Н Е Н И Е: Профезим выпускается во флаконах по 10 мл. Профезим рекомендуется хранить при температуре от +4 до +8 °С в течение 2 лет.

 

М А З Ь П Р О Ф Е З И М А

МАЗЬ ПРОФЕЗИМА представляет собой мягкую лекарственную форму ПРОФЕЗИМА, полученную путем смешивания его с разрешенными к ветеринарному применению мазевыми основами. Обладает способностью быстро очищать гнойно-некротические раны за счет длительного гидролиза денатурированных белков без потери протеолитической активности, оказывая некролитический, противоотечный и противовосполительный эффекты в первой фазе раневого раневого процесса, ускоряет рост, стимулирует регенерацию и созревание грануляционной ткани во второй фазе, снижает интоксикацию организма продуктами распада тканей и токсинами микрофлоры. Защищена патентом.

П Р И М Е Н Е Н И Е Мазь профезима предназначена для лечения сельскохозяйственных животных, на зверофермах, домашних и лабораторных животных:

- острых гнойно - некротических процессов различной этиологии: после вскрытия абсцессов и флегмон, инфицированных ран и послеоперационных осложнений и т.п.,

- некротических пододермитов,

- некробактериоза в стадии изъязвления, различных эрозий,

- кожных покровов после ожогов,

- длительно незаживающих ран (например, в дистальной области у копытных, трофических и лучевых язв и др.).

Мазь профезима - достаточно дешевый из всех препаратов аналогичного действия, является нерастворимым соединением и не всасывается в кровь, тем самым в организме не вызывает аллергических реакций.

Использование профезима в виде мази имеет ряд преимуществ:

удобное пользование в полевых условиях,

приводит к более экономичному использованию профезима и таким образом удешевляет лечение,

может использоваться для комплектации индивидуальных аптечек на ветстанциях.

Ф О Р М А В Ы П У С К А и Х Р А Н Е Н И Е: Мазь профезима выпускается в тубах или баночках по 20, 40 г. Мазь рекомендуется хранить при температуре от +4 до +8 °С в течение 2-х лет.