Демонстрация мазков с микробным фагоцитозом нейтрофилов. Подсчет фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса. — КиберПедия 

Автоматическое растормаживание колес: Тормозные устройства колес предназначены для уменьше­ния длины пробега и улучшения маневрирования ВС при...

Своеобразие русской архитектуры: Основной материал – дерево – быстрота постройки, но недолговечность и необходимость деления...

Демонстрация мазков с микробным фагоцитозом нейтрофилов. Подсчет фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса.

2018-01-05 385
Демонстрация мазков с микробным фагоцитозом нейтрофилов. Подсчет фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса. 0.00 из 5.00 0 оценок
Заказать работу

Определение фагоцитарной способности лейкоцитов периферической крови производят по методике Кост и Стенко. В видалевскую пробирку берут 1 капилляр (от прибора Панченкова) раствор 0,5% лимоннокислого натрия и 2 капилляра крови из пальца. Этим же капилляром приливают 1 капилляр однодневной культуры штамма золотистого стафилококка в 2-миллиардном разведении, тщательно перемешивают и ставят в термостат на 30 минут при температуре 37 градусов Цельсия (за это время термостат не открывать!).

Взяв через 30 минут из термостата пробирку делают обычным способом мазок, быстро высушивают на воздухе, фиксируют и красят.

Подсчет микробов производят следующим способом: на 100 сегментоядерных нейтрофильных клеток подсчитывают отдельно в каждой клетке количество фагоцитированных микробов и распределение фагоцитирующих клеток. Записывается следующим образом:

 

  число микробов в клетке от 0 до 5 число клеток
  ... от 6 до 10  
  ... от 11 до 20  
  ... от 21 до 40  
  ... от 41 и выше  
  Фагоцитарный индекс (ФИ) - всего фагоцитирующих клеток на 100 нейтрофилов.
  Всего фагоцитировано микробов на 100 нейтрофилов
  Среднее число фагоцитированных микробов на 1 фагоцитирующую клетку (Фагоцитарное число)

Работа с картой оценки Т- и В-системы иммунитета у человека.

ОЦЕНКА Т-СИСТЕМЫ ИММУНИТЕТА (КЛЕТОЧНЫЙ ИММУНИТЕТ).

Т- лимфоциты — это клетки-регуляторы, которые действуют как рубильники: включают и выключают действие иммунной системы. Команды они отдают, выделяя сигнальные молекулы, которые называются цитакинами. Эти молекулы переносят сигналы от Т-лимфоцитов к другим клеткам. B-лимфоциты вырабатывают специальные белки — антитела.

Антитела — это специальные белки, которые с удивительной точностью — как ключ, подогнанный к замку, — узнают тот субстрат, против которого они направлены. Антигены — это белки или фрагменты белков, несущие признаки чужеродности и вызывающие иммунный ответ при введении в организм. Все клетки иммунной системы — и Т-лимфоциты, и В-лимфоциты, и макрофаги — обладают способностью очень быстро мигрировать по всему организму. Лучше всего передвигаются Т-лимфоциты и вспомогательные клетки, несколько хуже — В-лимфоциты.

Для оценки Т-системы иммунитета пользуются следующими методами:

1.Метод "спонтанных" розеток (розеткообразование с эритроцитами барана) - определяют количество Т-лимфоцитов в крови.

2. Реакция бласттрансформации лимфоцитов in vitro под влиянием ФГА или в микст культуре.

3. Определение динамики бласттрансформации.

4.Оценка продукции лимфоцитами периферической крови гуморальных медиаторов клеточного иммунитета.

Наиболее распространен тест подавления миграции макрофагов факторов; угнетающим их миграцию (MIF), выделяемым сенсибилизированными лимфоцитами под влиянием соответствующего антигена. С помощью этого метода in vitro можно установить сенсибилизацию организма к тому или иному антигену.

5. Постановка кожных реакций гиперчувствительности замедленного типа на широко распространенные антигены (туберкулезы, трихофитин). 6. Контактная аллергия к динитрохлорбензолу (ДНХБ). Этот гаптен при накожной аппликации вызывает развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа. Повторное нанесение препарата дает типичную кожную реакцию. Поскольку вероятность контакта индивидуума с данными редкими химическими соединениями ничтожна, проба ДНХБ служит весьма распространенным методом оценки способности организма развить гиперчувствительность замедленного типа, т.е. функциональной активности Т-системы иммунитета.

7. Отторжение аллогенного кожного лоскута. Эта реакция тоже относится к гиперчувствительности замедленного типа и осуществляется в основном Т-лимфоцитами. Однако трансплантация чужеродной ткани приводит к сенсибилизированному организму по отношению к трансплантационным агентам, что может оказаться нежелательным при последующем лечении больного такими методами, как пересадка костного мозга, вилочковой железы и др.

8. Биопсия лимфатических узлов и гистологическая оценка тимус-зависимых областей вилочковой железы. Эти тесты ставятся в сложных для диагностики случаях при подозрении на комбинированные иммунодефициты и злокачественные образования.

 

ОЦЕНКА В-СИСТЕМЫ ИММУНИТЕТА

(ГУМОРАЛЬНЫЙ ИММУНИТЕТ).

Гуморальный иммунный ответ обеспечивается антителами, или иммуноглобинами. У человека различают 5 основных классов иммуноглобинов: IgA, IgG, IgM, IgE, IgD. Все они имеют как общие, так и специфические детерминанты.

Иммуноглобины класса G. У человека являются наиболее важными. Концентрация их достигает 9-18 г/л. Иммуноглобины этого класса обеспечивают противоинфекционную защиту, связывают токсины, усиливают фагоцитарную активность, активируют систему комплемента, вызывают аглютинацию бактерий и вирусов, они способны переходить через плаценту, обеспечивая новорожденному так называемый пассивный иммунитет.

Иммуноглобины класса А. Делят на 2 разновидности: сывороточные и секреторные. Первые из них находятся в крови, вторые – в различных секретах. Соответственно этому сывороточный иммуноглобин А принимает участие в общем, иммунитете, а секреторный обеспечивает местный иммунитете, создавая барьер на пути проникновения инфекций и токсинов в организм.

Секреторный находится в наружных секретах – в слюне, слизи трахеобронхиального дерева, мочеполовых путей, молоке. Молекулы иммуноглобина А, присутствующие во внутренних секретах и жидкостях, существенно отличаются от молекул наружных секретов. Секреторный компонент, по всей видимости, образуется в эпителиальных клетках и в дальнейшем присоединяется к молекуле IgA.

IgA нейтрализует токсины и вызывает аглютинацию микроорганизмов и вирусов. Концентрация сывороточных IgA колеблется от 1,5 до 4 г/л.

Содержание IgA резко возрастает при заболеваниях верхних дыхательных путей, пневмониях, инфекционных заболеваниях желудочно-кишечного тракта и др.

Иммуноглобины класса Е. Принимают участие в нейтрализации токсинов, опсонизации, аглютинации и бактериолизисе, осуществляемом комплементом. К этому классу также относятся некоторые природные антитела, например к чужеродным эритроцитам. Содержание IgE повышается при инфекционных заболеваниях у взрослых и детей.

Иммуноглобины класса D. Представляют собой антитела, локализующиеся в мембране плазматических клеток, в сыворотке их концентрация невелика. Значение IgD пока не выяснено, предполагают, что они участвуют в аутоиммунных процессах.

Для оценки В-системы иммунитета применяется несколько методов.

1. Определение В-лимфоцитов в крови.

2. Определение в крови уровня иммуноглобулинов. Проводят определение суммарной концентрации иммуноглобулинов и количество иммуноглобулинов разных классов.

3. Определение наличия и уровня изогемагглютининов в сыворотке крови, а также естественных (нормальных) антител к широко распространенным бактериям и вирусам. В качестве антигенов можно использовать кишечную палочку, стафилококковые токсины, вирус герпеса и др. Следует отметить и иметь в виду, что альфа- и бета-изогемагглютинины относятся к Jg M.

4. Стимуляция биосинтеза иммуноглобулинов В-лимфоцитами in vitro.

5. Исследование антителогенеза (первичного и вторичного ответа) после активной иммунизации несколькими убитыми вакцинам.Применяют коклюшную и убитую полиомиелитную вакцины, дифтерийный и столбнячный анатоксин, полисахаридные антигены, выделенные из пневмококков, менингококков и бактерий кишечной группы.

6. Исследование катаболизма иммуноглобулинов в организме. В кровь вводят меченый препарат человеческого иммуноглобулина.

7. Биопсия лимфатических узлов, костного мозга, участков слизистой оболочки кишечника. Эту процедуру проводят с целью гистологического обнаружения плазматических клеток, наличие и структуры лимфоидных фолликулов.

8. Кожные реакции, выявляющие гиперчувствительность немедленного типа. К таким пробам относятся ШИК-реакция и другие.

Определение групп крови.

Для проведения определения групп крови требуются:

1. Стандартные сыворотки I, II, III, IV групп.

2. Кровь, групповую принадлежность которой мы будем определять.

3. Предметное стекло для размещения капель сывороток.

4. Стеклянные лопаточки для перемешивания.

5. Раствор NaCl 0,9% (физиологический раствор).

На предметное стекло помещают отдельно (не смешивая) по капле стандартной сыворотки I, II и III групп. Потом добавляют к каждой капле 2-3 капли крови, групповую принадлежность которой мы хотим определить. Внимание! Ни в коем случае нельзя допустить попадания одной сыворотки к другой, иначе результат будет недостоверен, поэтому перемешивание крови и сыворотки надо производить чистыми стеклянными лопаточками (новой для каждой капли).

Через 2-4 минуты добавляем к каждой капле 1-3 капли раствора NaCl 0,9% для лучшей оценки.

Агглютинация наступила, если заметны невооруженным глазом эритроциты, склеившиеся между собой в виде комочков.

Принцип определения группы крови.

Стандартная сыворотка Группа
I II III IV крови
1 группа
+ + 2 группа
+ + 3 группа
+ + + 4 группа

Примечание: “ + “ - видна агглютинация (склеившиеся эритроциты)

“ — “ - нет агглютинации.

В случае, если во всех трех каплях видна агглютинация, то добавляем каплю стандартной сыворотки IV группы, добавляем к ней 2-3 капли крови и через 2-3 минуты - 1-3 капли физиологического раствора. При отсутствии агглютинации можно предполагать, что кровь IV группы, если агглютинация есть - сменить набор сывороток - определение неверно.

В практике используют одновременно 2 набора стандартных сывороток одновременно, чтобы избежать случайных неправильных результатов при некачественных сыворотках.

Определение резус-фактора.

Для проведения требуются:

1. Стандартная антирезус сыворотка.

2. Контрольная сыворотка (не имеет резус-антител).

3. Кровь, наличие или отсутствие резус-фактора в которой мы хотим определить.

4. Физиологический раствор.

5. Предметное стекло.

6. Стеклянные палочки для размешивания.

На предметном стекле делаем пометку К (Контроль) и Rh (резус фактор). Рядом с К капаем 4-6 капель контрольной сыворотки, а рядом с Rh - 4-6 капель стандартной антирезус-сыворотки так, чтобы они не смешивались.

 

 

Контроль Антирезус-сыворотка Резус фактор
+ Положительный
Отрицательный
+ не имеет значения Не верно определено

 

Примечание: “ — “ - Отсутствие агглютинации

“ + “ - Наличие агглютинации.

 

Рядом с каждой каплей сывороток капаем 2-3 капли крови.

Смешиваем контрольную сыворотку с кровью (обязательно первой, чтобы контроль был чист!), затем - стандартную сыворотку с кровью. К каждой капле добавляем 1-2 капли физиологического раствора - для лучшего определения.

Покачивая предметное стекло, определяем наличие или отсутствие агглютинации.

По результатам исследования делаем вывод.


Поделиться с друзьями:

Эмиссия газов от очистных сооружений канализации: В последние годы внимание мирового сообщества сосредоточено на экологических проблемах...

Архитектура электронного правительства: Единая архитектура – это методологический подход при создании системы управления государства, который строится...

Папиллярные узоры пальцев рук - маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни...

Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ - конструкции, предназначен­ные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой...



© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!

0.026 с.