Унифицированная методика подсчета тромбоцитов в мазках крови по Фонио (A. Fonio)

Принцип. Подсчет количества тромбоцитов на 1000 эритроцитов в окрашенных мазках крови и перерасчет их числа на 1 мкл или 1 л, в соответствии с количеством эритроцитов в этом объеме крови.

Реактивы: 1) 14% раствор сульфата магния; 2) 2,6% раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА).

Ход определения. В пробирку вносят реактив 1 или 2, взятый капилляром Панченкова до отметки «75», затем добавляют кровь, взятую тем же капилляром до отметки «К (0)». Содержимое пробирки перемешивают и готовят тонкие мазки. Фиксируют и окрашивают по Романовскому—Гимзе (см. «Окраска мазков крови») в течение 2–3 ч (при использовании реактива 1) или 35–45 мин (при использовании реактива 2).

Высохшие мазки микроскопируют с иммерсионным объективом, подсчитывая тромбоциты в тонких местах препарата (эритроциты должны располагаться изолированно друг от друга). Тромбоциты окрашиваются в розовато-фиолетовый цвет, имеют округлую форму, размер 2–4 мкм, в центре клетки отчетливо определяется зернистость — грануломер, периферическая часть имеет более светлую окраску, незернистая — гиаломер.

Подсчет производят следующим образом. В каждом поле зрения микроскопа считают число эритроцитов и тромбоцитов, передвигая мазок до тех пор, пока не будут просчитаны 1000 эритроцитов. Для удобства и большей точности счета рекомендуется пользоваться окуляром с уменьшенным полем зрения. При его отсутствии можно уменьшить поле зрения приемом, описанным в «Подсчет ретикулоцитов». Параллельно берут кровь для подсчета числа эритроцитов в камере Горяева.

Расчет. Зная количество эритроцитов в 1 мкл (или 1 л) крови и количество тромбоцитов на 1000 эритроцитов, легко рассчитать и содержание тромбоцитов в крови:

где X — количество тромбоцитов в 1 мкл (1 л) крови; а — количество тромбоцитов, подсчитанных в мазке крови на 1000 эритроцитов; b — количество эритроцитов в 1 мкл (1 л) крови; 1000 — количество эритроцитов, подсчитанных в мазке крови.

Количественное содержание тромбоцитов

Норма: 180–320 × 109/л (200–400 × 109/л)

Увеличением количества тромбоцитов характеризуются:

· миелопролиферативные процессы (эритремия, миелофиброз);

· хронические воспалительные заболевания (ревматоидное поражение суставов, язвенный колит, туберкулез, остеомие лит, цирроз печени);

· злокачественные новообразования (рак, лимфома, лим фо гра нуле матоз);

· кровотечения, гемолитическая анемия;

· период выздоровления при мегалобластных анемиях;

· после операций;

· состояние после спленэктомии;

· лечение кортикостероидами.

Уменьшением количества тромбоцитов (тромбоцитопенией) характеризуются:

· наследственные тромбоцитопении, вызванные снижением образованиятромбоцитов(врожденнаятромбоцитопения, синдром Уискотта—Олдрича, синдром Бернара — Сулье, аномалия Чедиака — Хигаси, синдром Фанкони, краснуха новорожденных, гистиоцитоз);

· болезни крови (апластическая анемия, мегалобластные анемии, лейкозы);

· поражение костного мозга (метастазы новообразований, туберкулезное поражение, ионизирующее облучение);

· другие заболевания (циклическая тромбоцитопения, пароксизмальная ночная гемоглобинурия, гемолитико-уремический синдром, почечная недостаточность, заболевания печени, опухоли сосудов, селезенки, эклампсия, гипертиреоз, гипотиреоз);

· инфекции (вирусные, бактериальные, риккетсиозы, маля рия, токсоплазмоз, ВИЧ-инфекция);

· беременность, менструации;

· действие лекарственных препаратов (цитостатиков, анальгетиков, антигистаминных средств, антибиотиков, психотропных лекарств, диуретиков, противосудорожных средств, витамина К, резерпина, дигоксина, гепарина, нитроглицерина, преднизолона, эстрогенов и др.);

· действие алкоголя, тяжелых металлов;

· тромбоцитопении, вызванные повышенным потреблени ем тромбоцитов (тромбоцитопеническая пурпура, гиперспленизм, ДВС-синдром, кровотечения, гемодиализ).

Подсчет ретикулоцитов

Число ретикулоцитов составляет специфическое исследование для оценки работы костного мозга, полезное в целях определения механизма выработки и наблюдения за реакцией на проводимое лечение различных видов анемии.

Процедуры

§ Количество ретикулоцитов можно определять с использованием гематологических анализаторов или проводить микроскопическое исследование.

§ Забор крови производят в пробирку с ЭДТА, перемещать, но не встряхивать.

§ Одним из методов подсчета эритроцитов с последующей микроскопией является унифицированный метод подсчета при окраске с одним из красителей - окраска бриллиантовым крезоловым синим, азуром I или азуром II непосредствено на стекле или в пробирке.

Принцип подсчета ретикулоцитов.

Остаточные рибонуклеопротеины зрелых эритроцитов осаждаются и окрашиваются 1% бриллианткрезилблау, путем суправитальной окраски. Сетевидная ткань ретикулоцитов представляется зернистонитевидного аспекта, синего цвета. Среди многочисленных существующих методов наиболее практичным представляется тот, который использует капли сухого красителя на стекле. 2 капли крови и 1 капля сухого красителя размешиваются между двумя поверхностями стекла, получается влажная масса, выдерживаемая 5 мин. Затем пластинки разъединяются, из смеси делаются тонкие мазки, которые быстро высыхают, помахиванием. Исследование проводить крепким окуляром, погружаемым в участок наиболее однородного распределения эритроцитов.

Исследовать 10—15 полей и отметить число эритроцитов и ретикулоцитов; прекратить исследование при достижении числа 1000 эритроцитов. Результат отметить в ретикулоцитах на % и в абсолютной цифре на мм3. Норма ретикулоцитов колеблется от 0,5 до 1,5% или от 25 000 до 75 000/мм3.

Показатель выработки ретикулоцитов расчитывать по формуле: (Рт х гематокрит/45)/время созревания (норма =1). Число ретикулоцитов составляет один из наиболее точных показателей крови в отношении костномозговой продукции, потому он должен находиться на любой справке, касающейся анемии.