Питательные среды для микроорганизмов

При выборе среды для осуществления посева в первую очередь следует ориентироваться на характер содержания, присущего бактериям, которые являются главным объектом исследования.

 

Питательные среды должны

· содержать все макро и микроэлементы.

· иметь достаточную влажность - не менее 20 % воды.

· концентрация солей должна соответствовать концентрации солей в микробной клетке.

· концентрация водородных ионов (ph среды) должна быть оптимальной – 4,5 – 8,5

· окислительно - восстановительный потенциал (Еh) среды должен соответствовать потребностям микроорганизма – для анаэробов – 0,120-0,060 В; для аэробов – более 0, 080 В.

· питательная среда должна быть стерильной.

 

Для приготовления питательных сред используют мясо, рыбную муку, молоко, яйца, кровь, картофель, дрожжи, сухие консервированные порошки.

Стерилизуют при t 120 гр. С.

Готовые стерильные среды подвергают контролю на стерильность путем выдерживания в термостате при температуре 37 гр. в течение 1 – 3 суток.

В том случае, если необходимо получить изолированные колонии бактерий, а также определить чистую культуру, следует выполнять посев на плотные питательные среды.

Но если материал, подверженный исследованию, содержит в себе не очень большое количество микроорганизмов, можно в этих целях использовать жидкую питательную среду.

Существует несколько разновидностей питательных сред, в которых осуществляется бактериальный посев.

Различают среды:

I.

1. простые

2. специальные

II.

3. элективные

4. дифференциально-диагностические.

Каждая категория питательных сред отличается своими индивидуальными особенностями и характеристиками.

 

I. Простые и специальные питательные среды бывают:

 

· плотными,

· жидкими.

 

Плотные - это мясопептонный агар,

Жидкие - мясопептонный бульон.

 

Главной особенностью специальныхсред является абсолютная замена основы либо смешивание ее с другим компонентом, обладающим специфическими свойствами и характеристиками.

В результате такого процесса можно выделить следующие виды питательных сред:

· агар на основе сыворотки;

· агар на основе казеина и активированного угля;

· яичная среда, открытая бактериологами Леванштейном и Йенсеном;

· бульон на основе агара и стерильной дефибринированной крови кролика, лошади или барана.

II. Элективные и дифференциально-диагностические питательные среды

Отличительной чертой является получение роста только того из микроорганизмов, который на данный момент представляет интерес для исследования.

К элективным средам относят:

· пептонную воду; (для исследования холерного вибриона)

· щелочной агар; (для исследования холерного вибриона)

· среду Мюллера; (для исследования сальмонелл)

· среду Леффлера; (для исследования коринебактерий дифтерии)

· желточно-солевой агар; (для исследования стафилококка)

· селенитовую среду. (для исследования сальмонелл)

 

При помощи дифференциально-диагностических питательных сред проводится максимально точная идентификация отдельно взятых категорий, групп и типов бактерий.

 

Выделяют два основных типа ДДПС:

· среда Сабуро, для которой характерно добавление антибиотика;

· среды Гисса, известные под названием «пестрый ряд».

Способы и техники посева

 

Принято различать несколько техник и методов посева.

В основном данный процесс осуществляется при помощи специальных микробиологических петель.

При посеве на специальные чашки Петри применяются особые иглы или шпатели, изготовленные из стекла или металла.

Для жидких материалов применяют специальную петлю в сочетании с пипетками – пастеровскими или градуированными.

Чашка Петри предназначена специально для осуществления посева на плотные питательные среды. Изобретена в 1877 году знаменитым немецким бактериологом ЮлиусомРизардом Петри, который являлся ассистентом микробиолога Роберта Коха(первооткрыватель плотных питательных сред. Разработанные Кохом методы выделения и культивирования микроорганизмов в лабораторных условиях позволили открыть ряд возбудителей инфекционных заболеваний).

 

Для изготовления чашки Петри, как правило, используют стекло либо полистирол с прозрачной текстурой.

Самый широко используемый размер чашки Петри – высота до 15 миллиметров и диаметр от 50 до 100 миллиметров.

 

Для посева немного приоткрывают крышку чашки Петри, а затем наносят на поверхность плотной питательной среды – агара – требуемое количество посевного материала.

 

После инкубациибакпосева, бактерии начнут расти густо и равномерно, превращаясь в полноценную культуру и подразделяясь на отдельные колонии.

В данном процессе можно использоваться как стеклянные, так и пластмассовые чашки Петри.

Стеклянные предназначается для многоразового, пластиковые – для одноразового применения. Пластиковые чашки Петри являются стерильными, а поставляют их в специальных надежных герметических упаковках. Стеклянные сосуды требуют тщательной стерилизации перед осуществлением каждого нового посева.

Если при бакпосеве на плотные среды применяются чашки Петри, то в случае с жидкими средами можно использовать пробирки.