Подсчет эритроцитов с использованием пробирочного

Метода разведения крови

Цель работы: ознакомиться с методом подсчета эритроцитов.

Объект исследования – кровь человека.

Для работы необходимо: Донорская кровь, химические или серологические пробирки с пробками, капиллярная пипетка от гемометра Сали, градуированная пипетка для отмеривания разводящей жидкости, камера с сеткой Горяева, 3% раствор хлористого натрия (желательно подкрасить красителем типа метиленового синего), микроскоп, вата.

Проведение работы. В чистую пробирку точно отмеривают 4 мл разводящей жидкости и закрывают ее резиновой пробкой. Кровь в количестве 20 мкл набирают до метки в капилляр от гемометра Сали. Осторожно выдувают кровь из капилляра в пробирку и тщательно перемешивают и промывают капилляр разводящей жидкостью; полученное разведение можно приравнять к 1:200. Капиллярную пипетку промывают несколько раз дистиллированной водой.

Заполнение камеры, подсчет эритроцитов, анализ результатов и оформление протокола осуществляют, как указано в работе 3.1.1. в пунктах 2 и 3. Источники ошибок и точность метода такие же, как и в работе 3.1.1.

Подсчет лейкоцитов в счетной камере

С использованием меланжеров для разведения крови

Цель работы: ознакомиться с техникой подсчета лейкоцитов.

Объект исследования – кровь человека.

Для работы необходимо: Донорская кровь. Смеситель (меланжер) для лейкоцитов, камера с сеткой Горяева, 5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим, микроскоп, вата.

Проведение работы. Взятие и разведение крови осуществляется с помощью смесителя для лейкоцитов (рис.1.). Смеситель имеет меньший объем ампулы по сравнению со смесителем для эритроцитов и содержит белую бусинку. Набирают кровь до метки «0,5», а затем - уксусную кислоту до метки «11», чем достигают разведения в 20 раз. Для разрушения оболочки эритроцитов и подкрашивания ядер лейкоцитов после перемешивания содержимого ждут 5 минут.

Заполнение камеры проводят так же, как описано в работе 3.1.1. Подсчет лейкоцитов осуществляется в 25 больших квадратах, что соответствует 25 ´ 16 = 400 малым квадратам. Количество лейкоцитов в 1мкл крови вычисляют по формуле:

Х = (А ´ 4000 ´ 20) / 400,

где А - найденное количество лейкоцитов в 400 малых квадратах;

20 - степень разведения крови;

1/4000 мм³ - объем разведенной крови над малым квадратом.

Для определения числа лейкоцитов в 1 л крови, полученный результат умножают на 10⁶.

Ошибка метода составляет в среднем ±7%.

 

Источники ошибок при подсчете лейкоцитов те же, что и при подсчете эритроцитов. Кроме того, в число лейкоцитов могут войти и эритробласты, если они имеются в крови. Их наличие у испытуемого выясняют при изучении морфологии клеток в фиксированных и окрашенных препаратах.

Оформление протокола. Коротко описать метод, указать, чем разводят кровь для подсчета лейкоцитов; записать формулу расчета количества лейкоцитов - провести ее анализ. Выписать нормальные значения количества лейкоцитов у мужчин, женщин и новорожденных.

Подсчет лейкоцитов с использованием пробирочного

Метода разведения крови

Цель работы: ознакомиться с пробирочным методом разведения крови.

Объект исследования – кровь человека.

Для работы необходимы: донорская кровь, химические или серологические пробирки с пробками, капиллярная пипетка от гемометра Сали, градуированная пипетка для отмеривания разводящей жидкости на 1 мл, камера с сеткой Горяева, 4-5% раствор уксусной кислоты (подкрашенный метиленовым синим), дистиллированная вода, микроскоп, вата.

Проведение работы. В чистую пробирку точно отмеривают 4мл 5% раствора уксусной кислоты. Капиллярной пипеткой от гемометра Сали набирают кровь до метки (20 мкл) и осторожно выдувают ее в разводящую жидкость; промывают этой жидкостью капилляр, пробирку закрывают пробкой и тщательно перемешивают. Таким образом, достигается разведение крови в 20 раз. После взятия крови капиллярная пипетка должна быть промыта несколько раз дистиллированной водой.

Заполнение камеры, подсчет лейкоцитов, анализ результатов и оформление протокола осуществляют, как указано в работе 3.1.1. Источник ошибок и точность метода такие же, как и в работе 3.1.1.

 

Определение количества гемоглобина в крови

По методу Сали

Цель работы: ознакомиться с методикойопределения содержания гемоглобина крови по методу Сали, определить содержание гемоглобина в донорской крови

Объект исследования – кровь человека.

Гемоглобин (Hb) – основной дыхательный пигмент эритроцитов, относящийся к хромопротеидам и обеспечивающий ткани кислородом, состоит из белка – глобина и гема – соединения протопорфирина IX с железом. Последний придает гемоглобину характерную окраску. Присоединение к гему различных химических групп сопровождается изменением окраски. На этом основано определение концентрации гемоглобина крови.

Для определения содержания Hb в крови предложено много различных методов. Наибольшее распространение получили колориметрические методы, основанные на колориметрии производных гемоглобина. В настоящее время принят унифицированный гемиглобинцианидный метод определения количества гемоглобина. Гемоглобин окисляют в метгемоглобин (гемиглобин) железосинеродистым калием; образующийся с ацетонциангидрином окрашенный цианметгемоглобин (гемиглобинцианид) определяют колориметрически с помощью фотоэлектроколориметра, счетчика и гематологического автомата.

Наиболее распространенным в прошлом было определение количества гемоглобина по методу Сали. Этот метод чрезвычайно прост и быстро выполним, но недостаточно точен. Он основан на колориметрии солянокислого гематина. При смешивании крови с соляной кислотой Hb превращается в солянокислый гематин, имеющий коричневый цвет. Полученную смесь разбавляют дистиллированной водой до цвета раствора в стандартных пробирках, находящихся в крайних гнездах гемометра. Этот раствор имеет интенсивность окраски, соответствующую содержанию гемоглобина, равному 166,7 г/л.

В норме в крови содержится около 140 г/л гемоглобина (у женщин 120-140 г/л, у мужчин 130-160 г/л, у новорожденных – 217 г/л).

 

Рис. 3. Гемометр Сали