Методы оценки функциональной активности фагоцитирующих клеток

Одной из основных функций гранулоцитов (полиморфноядерных лейкоцитов) и моноцитов крови является эндоцитоз - захват различных объектов: инертных частиц (латекс, уголь), живых или убитых микроорганизмов (бактерии, дрожжеподобные грибы). Количественную оценку фагоцитарной активности гранулоцитов и моноцитов проводят в цельной крови, в лейкоцитарной взвеси или в обогащенных фракциях фагоцитирующих клеток. В качестве стандартных объектов фагоцитоза используют монодисперсные частицы латекса диаметром от 1,0 до 2,0 мкм, суспензию убитых нагреванием клеток бактерий или дрожжеподобных грибов.

Показателями клеточных факторов неспецифической защиты организма являются: активность фагоцитоза (АФ) и фагоцитарный показатель (ФП).

Определение:

- обнаруживают под микроскопом 10-20 лейкоцитов, передвигая предметное стекло так, чтобы под объективом находился край препарата из исследуемой крови;

- подсчитывают число микробов, захваченных каждым обнаруженным лейкоцитом.

ФП - среднее число микробов в одном лейкоците. Норма 4,2.

АФ - процент лейкоцитов, участвующих в фагоцитозе. Норма 60%.

Дано: препараты-мазки, таблицы

 

Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Вывод:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Теоретическая справка

Работа № 3

Бактерицидная функция кожи

 

Важным фактором неспецифической резистентности является функция кожи как механического барьера для внедрения паразита. Отторжение верхних слоев эпидермиса, секреты сальных и потовых желез способствуют их удалению с поверхности кожи. Существенную роль в элиминации микробов с поверхности кожи играют различные микробоцидные субстанции (молочные и жирные кислоты и др.), обеспечивающие ее «самоочищение». Поэтому различные микроорганизмы, не являющиеся ее постоянными обитателями, не могут в течение продолжительного времени сохраняться на коже. Бактерицидность кожных секретов зависит от их кислотности.

Работа № 4

Бактерицидная активность лизоцима слюны

Лизоцим – фактор неспецифической защиты, фермент. Специфичность его заключается в разрушении связи между N-ацетилмурамовой кислотой и N-ацетилглюкозамином в мукополисахариде, образовывающем оболочку многочисленных микробов. Бактериологическая функция – высокая концентрация в слезах, слюне, бронхиальном секрете, нейтрофильных гранулоцитах и моноцитах, также богата лизоцимом слизь носа, низкий уровень в грудном молоке, сыворотке крови, кожи. Лизоцим попадает в кровь из распадающихся нейтрофилов.

Работа № 5

 

Бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК)

Бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК) является показателем естественной способности крови к самоочищению. В 1886 г. Высокович обнаружил, что различные бактерии, введенные в кровь кроликов и собак, не удаляются из организма выделительными органами, если эти микробы не повреждены. Исчезновение их из организма связано с наличием в сыворотке особых веществ, убивающих и растворяющих микробные клетки. Бактерицидное действие сыворотки крови распространяется как на грамположительные, так и на грамотрицательные бактерии.

Работа № 6

Фагоцитоз

Фагоцитоз (от греч. phagos - пожираю, cytos - клетка), открытый и изученный И.И. Мечниковым, является одним из основных мощных факторов, обеспечивающих резистентность организма, защиту от инородных веществ, в том числе микробов. Это наиболее древняя форма иммунной защиты. Механизм фагоцитоза состоит в поглощении, переваривании, инактивации инородных для организма веществ специализированными клетками - фагоцитами.

Фагоцитарная реакция осуществляется поэтапно. При завершенном фагоцитозе, заканчивающемся разрушением микроба, различают 4 стадии:

1) приближение фагоцита к объекту (положительный хемотаксис) обусловлено наличием специфических рецепторов на мембране фагоцита;

2) прилипание (адгезия) также осуществляется за счет соответствующих рецепторов;

3) поглощение (эндоцитоз, захват) - основная физиологическая функция фагоцитов. Захват крупных частиц происходит за счет обтекания их псевдоподиями без участия специфических рецепторов (фагоцитоз). Бактерии, дрожжеподобные грибы и др. микроорганизмы захватываются посредством рецепторов фагоцитов, распознающих углеводные компоненты поверхностной структуры микроорганизмов (пиноцитоз). В результате захвата образуется фагоцитарная вакуоль - фагосома;

4) переваривание - слияние фагосомы с лизосомой и разрушение микроорганизмов лизосомальными ферментами. Если микробные антигены разрушаются частично, вслед за фагоцитозом начинается антителообразование.

Незавершенный фагоцитоз отличается отсутствием последней стадии - переваривания. Многие вирулентные бактерии часто не погибают и могут длительно находиться внутри фагоцита и даже размножаться внутри них, вызывая их гибель. Выживание микроорганизмов внутри фагоцитов обеспечивают следующие механизмы:

1) одни патогенные агенты способны препятствовать слиянию лизосом с фагосомами (токсоплазмы, микобактерии туберкулеза);

2) другие обладают устойчивостью к действию лизосомальных ферментов за счет наличия микрокапсул (гонококки, стрептококк А);

3) третьи после эндоцитоза покидают фагосому, избегая действия микробоцидных факторов и могут длительно находиться в цитоплазме фагоцитов (риккетсии).

 

Иммуномодуляторы (ИМ)

 

n Иммуномодулирующая терапия - важный метод неспецифической коррекции дисфункций иммунной системы

n ИМ – лекарственные препараты, которые в терапевтических дозах восстанавливают нарушенные функции иммунной системы

n Цель при выборе ИМ – воздействие на те звенья иммунитета, которые нарушаются при внедрении конкретного возбудителя инфекции.