ISBN 5-7243-0283-7 Коллектив авторов, 2008

ISBN 5-7243-0283-7 Коллектив авторов, 2008

Определение активности амилазы мочи по методу Смита-Ро в модификации Уголева.

Принцип метода

Метод основан на определении количества крахмала, расщепляемого амилазой, которое определяется по изменению интенсивности синего окрашивания крахмала в присутствии йода..

Ход определения

Отмеривают 1 мл фосфатного буфера (рН=7,2) и 1 мл 0,15% раствора крахмала, перемешивают встряхиванием и добавляют 0,5 мл мочи, разведенной в «R» раз. Параллельно исследуют контрольную пробу, содержащую 0,5 мл воды вместо мочи (остальные реактивы те же).

Опытные и контрольные пробы инкубируют в термостате при температуре 38⁰ в течение 20 минут. После извлечения из термостата быстро для прекращения реакции добавляют в опытную и контрольную пробы 1 мл 1н соляной кислоты, по 1 мл дистиллированной воды и по 0,2 мл 0,25% раствора йода. Пробирки встряхивают, образовавшуюся синюю окраску фотометрируют против воды при красном светофильтре (640 нм).

Расчет

Оптическую плотность контрольной пробы, содержащей нерасщепленный крахмал, принимают за 100%.

1. Рассчитывают процент нерасщепленного крахмала в опытной пробе по формуле

Х= Д₂ * 100

Д₁

Где Д₁ – оптическая плотность контрольной пробы,

Д ₂ – оптическая плотность опытной пробы.

2. Находят процент расщепленного крахмала

У=100% - Х

3. Рассчитывается амилазная активность, которая выражается в условных единицах по формуле:

А (усл.ед.) = У*Р

t

где У – количествао расщепленного крахмала в %

Р – степень разведения мочи (например, 40, т.е. разведение 1:40)

t - время – продолжительность инкубации в минутах (20 мин).

Примечание: при высокой амилазной активности производится разведение мочи в 100, 200 и более раз. Норма 15-50 условных единиц.

Вывод

 

Клинико-диагностическое значение метода определения активности амилазы в разных биологических субстратах

a - амилаза /КФ 3.2.1.1./ синтезируется слюнными железами и панкреатической железой. Небольшая активаность фермента, синтезирующегося в лизосомах отмечается также в других органах.

Разделение амилазы крови методом гель - фильтрации на ДЭАЭ – сефадексе выявило 2 изофермента a - амилазы: S -тип - слюнная и Р – тип - панкреатическая. Содержание изоферментов в сыворотке крови: 70% - -тип S и 30% - Р-тип

В моче содержится 70% Р типа, т.к. молекулярная масса Р – типа a - амилазы (48 000- достаточно мала и она фильтруется почками значительно легче.

1. Слюна. Выявление патологий, сопровождающихся поражением слюнных желез.

II. Сыворотка или плазма крови. Можно определить общую активность и соотношение S - и Р – типов. Гиперамилаземия может наблюдаться при остром панкреатите - значительное повышение активности фермента в плазме крови; вирусном гепатите, раке поджелудочной железы, поражении слюнных желез, почечной недостаточности, холецистите, перитоните, ожогах, остром аппендиците, применении некоторых фармакологических препаратов: кортикостероидов, салицилатов, тетрациклина, фуросемида, гистамина.

III. Панкреатический и кишечный сок Диагностика поли и дисахаридазной нелостаточности основана в первую очередь на клинических проявлениях, а также на определении активности ферментов дисахаридаз в биоптатах слизистой оболочки тонкой кишки, определении лактозы, сазарозы в кале, снижении рН кала, проведении нагрузочных тестов.

IU. Моча. Определяется преимущественно Р-тип a - амилазы.Гиперамилазурия имеет место при остром панкреатите, вирусном гепатите, раке поджелудочной железы, желчно-каменной болезни, некрозе панкреатической железы. При острой патологии поджелудочной железы нарастание амилазурии «запаздывает» по сравнению с амилаземией примерно на 6 часов. Имеются данные, что при тяжелом течении панкреатита у части больных активность амилазы мочи может оставаться нормальной, в то время как активность амилазы крови повышается.

Нагрузочные тесты.

Ферменты переваривания углеводов относятся к классу

а) оксидоредуктаз

б) гидролаз

в) лигаз

г) трансфераз

д) синтетаз

ОТВЕТЫ по теме: "Переваривание, всасывание углеводов. Особенности обмена гликогена"

Тест 1 – а. Тест 9 – б, в, г, д

Тест 2 – б. Тест 10 – а, в, д

Тест 3 – б. Тест 11 – 1 б, 1 в, 1 г, 2 а, 2 в, 2 д.

Тест 4 – в Тест 12 – б, в.

Тест 5 – 1 б, 2 б, 3 а. Тест 13 – а) б) в) (аб)

Тест 6 – а, б. Тест 14 – а, б, в.

Тест 7 – б, в Тест 15 - б

Тест 8 – а, в.

 

 

Пример билета проверочного контроля

Выберите номер правильного ответа:

1. Гликолиз — это ферментативный процесс расщепления глюкозы:

1) аэробного апотомического

2) анаэробного апотомического

3) аэробного дихотомического

4) анаэробного дихотомическог

2. Приведите пример реакции субстратного фосфорилирования

в процессе гликолиза.

Биологическая роль пировиноградной кислоты Пировиноградная кислота (ПВК) образуется в организме при метаболических превращениях углеводов, белков и липидов. Она образуется в тканях в процессе окисления глюкозы, распада гликогена, окисления глицерина, ряда аминокислот и молочной кислоты.

ПВК является ключевым метаболитом анаэробного и аэробного окисления глюкозы. В процессе гликолиза ПВК восстанавливается до молочной кислоты - конечного продукта анаэробного обмена; в аэробных условиях ПВК подвергается окислительному декарбоксилированию с образованием ацетил-коА, который подвергается дальнейшему окислению в цикле трикарбоновых кислот или используется для синтеза липидов и аминокислот. ПВК является основным субстратом глюконеогенеза.

Значение определения концентрации ПВК в крови и моче в санитарно-химических и клинических исследованиях.

Повышение концентрации ПВК в крови и моче наблюдается при гиповитаминозе В₁, при воздействии на организм промышленных ядов, блокирующих SH-группы тиоловых ферментов, паренхиматозных заболеваниях печени, тяжелой сердечной недостаточности, гипоксических состояниях, острых инфекционных заболеваниях, инсулинзависимом сахарном диабете, диабетическом кетоацидозе, гепато-церебральной дистрофии, акродинии, мышечной дистрофии и др. заболеваниях. Наиболее резкое повышение ПВК в крови отмечается при интенсивной мышечной работе и гиповитаминозе В₁.

Одной из причин накопления ПВК является торможение процесса ее окислительного декарбоксилирования в митохондриях клеток.

Витамин В₁ входит в состав кофермента тиаминдифосфата, который является простетической группой первого фермента пируватдегидрогеназной системы – пируватдегидрогеназы. При недостаточности этого витамина, а также при нарушении его обмена наблюдается снижение интенсивности окислительного декарбоксилирования ПВК. Введение пациенту препарата витамина В₁или тиаминдифосфата с фармакопейным названием кокарбокси-

лаза – наоборот, стимулирует процесс аэробного метаболизма пиру-

вата и повышает энергообеспечение клеток.

В состав пируватдегидрогеназной системы входят тиоловые ферменты – дегидрогеназы (пируватдегидрогеназа и дигидролипо-

илдегидрогеназа) и коферменты, содержащие SH-группы (липоевая кислота и HS-коА), поэтому пируватдегидрогеназная система блоки-

руется тиоловыми ядами: солями тяжелых металлов, окислителями, алкилирующими агентами.

Пируватдегидрогеназная система работает только в аэробных условиях, поэтому ПВК накапливается в тканях и при гипоксии.

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПВК

Существуют несколько методов количественного определения пировиноградной кислоты в тканях и биологических жидкостях.

1. Определение ПВК в крови колориметрическим методом.

Принцип метода см. в разделе «Лабораторная работа».

При анализе используют 0,2 мл крови из пальца.

Нормальные значения: 0,03 – 0,10 ммоль/л.

2. Энзиматический метод определения ПВК в крови (и в тканях экспериментальных животных).

Принцип метода. В присутствии фермента лактатдегидрогеназы пируват восстанавливается до лактата в реакции:

СOO^- COO^-

С=О + НАДН + Н^{+ 0} CH-ОН + HAД⁺

СН₃ CH₃

пируват лактат

Количество используемого в реакции пирувата эквивалентно количеству восстановленного кофермента НАДН + Н⁺ , убыль которого регистрируют спектрофотометрически при длине волны l=340 нм.

В клинике для анализа используют 1 мл венозной крови.

Нормальные значения: 0.05-0.114 ммоль/л

 

Лабораторная работа № 8

Вывод

О Т В Е Т Ы

№1. - г №2 - а №3 - д №4 - а,б,в,г

№5 - б,г,д №6 - а,в,г,д №7 - г №8 - в

№9 - а,в,г,д №10 - б,в,д №11 - 1а,2е,3в,4б,5г

№12 - 1б,2в,3г №13 - 1б,2а,3г,4в

№14 - 1б,2г,3в,4д №15 - 1в,2г,3а

№16 -пируват + НАДН+Н⁺ →→ лактат + НАД⁺

№17 - фруктозо-6-фосфат + АТФ →→ фруктозо-1,6-дифосфат +АДФ

№18 -глюкоза + АТФ → глюкозо-6-фосфат + АДФ

№19 - фруктозо-1,6-дифосфат →→ глицеральдегид-3фосфат + диоксиацетонфосфат

№20 -пируват + HS-КоА +НАД⁺ →→ацетил-КоА+ СО2 +НАДН+Н⁺

№21 - глицеральдегид-3фосфат + НАД⁺ + Н3РО4 →→ 1,3-дифосфоглицерат + НАДН+Н⁺

№22 - АТФ, макроэргической

№23 - глюкозы, неуглеводных

№24 - SH-групп

№25 - в г д №26 - а,в,г №27 - в

№28 – 2, 3 №29 – анаэробное, цитоплазме №30 - б

 

 

1. Тема: 11 " Аэробный дихотомический распад углеводов.

Биологическое окисление."

Место проведения кафедра биохимии.

Продолжительность 180 минут.

 

2. Цель занятия: Систематизировать знания по аэробному дихотомическому пути окисления глюкозы, полученные на предыдущих занятиях и рассмотреть следующие два этапа - цикл трикарбоновых кислот и цепь терминального окисления.

3. Конкретные задачи:

3.1. Студент должен знать:

3.1.1. Этапы аэробного дихотомического окисления глюкозы и

роль каждого этапа.

3.1.2. Биологическую роль и влияние ингибиторов ЦТК.

3.1.3. Компоненты и ферменты цепи терминального окисления.

3.1.4. Значение челночных механизмов.

3.2. Студент должен уметь:

3.2.1. Написать реакции ЦТК, и челночных механизмов

(глицеролфосфатный, малатаспартатный) и объяснить их биологическую роль.

3.2.2. Объяснить смысл работы цепи терминального окисления.

3.2.3. Провести расчет энергетического выхода аэробного дихотомического окисления глюкозы.

4. Мотивация: Знания и навыки, приобретенные на занятии, необходи

мы для понимания механизмов развития патологических состояний,

связанных с процессами нарушения образования энергии

(например, сахарный диабет, голодание и др.).

5. Задание для самоподготовки:

Студенты должны изучить рекомендуемую литературу, используя вопросы для самоподготовки.

Основная литература

5.1. повторить лекционный материал по теме: " Цикл трикарбоновых

кислот. Биологическое окисление."

5.2. использовать при подготовке учебник Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. "Биологическая химия" М., Медицина 1990 г. С. 305-315, 345- 352

5.3 Биохимия (учебник для ВУЗов под ред. чл.-.корр. РАН, проф. Е.С.Северина, М. 2003, С.264-294

Дополнительная литература

5.4. изучить раздел в учебнике Марри Р. "Биохимия человека" М., Мир.1993 г. С. 118-136, 172-177.

5.5. использовать книгу Мусил Я. "Современная биохимия в схемах" М., Мир. 1984 г. С. 88-94, 114-122.

5.6. подготовиться к тестовому контролю

6. Вопросы для самоподготовки:

6.1. Основные этапы аэробного дихотомического окисления углеводов.

6.2. В каком органоиде клетки локализованы ферменты ЦТК и

тканевого дыхания?

6.3. Какие реакции ЦТК являются энергопоставляющими и почему?

Приведите примеры.

6.4. Биологическая роль ЦТК.

6.5. Какие вещества являются ингибиторами ЦТК? Приведите при-

меры, укажите тип ингибирования.

6.6. Что такое цепь терминального окисления, каков смысл его

работы?

6.7. Строение НАД⁺, ФАД, цитохромов и их функциональная роль в

системе тканевого дыхания.

6.8. Укажите звенья в цепи терминального окисления, сопряженные с синтезом АТФ.

6.9. Хемиосмотическая теория Митчелла. Как называется процесс

образования АТФ в дыхательной цепи?

6.10. Коэффициент эффективности тканевого дыхания Р/О, чему он

может быть равен в интактной клетке?

6.11. Разобщение окисления и фосфорилирования, факторы его

вызывающие. Биологическая роль.

6.12. Ингибиторы тканевого дыхания. Механизм действия ингибиторов.

6.13. Пастеровский эффект. Челночные механизмы переноса НАДН из цитоплазмы в митохондрии (глицеролфосфатный, малатаспартат-

ный).

6.14. Энергетический выход окисления глюкозы в аэробных условиях.

7. Этапы занятия, контроль усвоения и распределения учебного времени.

 

N п\п	Этапы проведения занятия	Формы проведения	Время (мин.)
7.1	Постановка задачи.	Излагает преподаватель.
7.2	Контроль исходного уровня знаний.	Тестовый контроль
7.3	Разбор теоретического мате- риала. Приобретение практических навыков - умение написать соответствующие реакции и сформулировать биологическую роль процесса	Опрос студентов, дис- куссия.
7.5	Подведение итогов занятия.	Излагает преподаватель.

Пример билета проверочного контроля

1. Приведите пример энергиюпоставляющей реакции Ц.Т.К.

2. Что такое коэффициент Р/O, его значения в интактной клетке?

 

Тестовый контроль по теме: «Аэробное окисление глюкозы,

биологическое окисление»

 

Тест 1

Выберите правильный ответ:

Локализация ЦТК:

а) эндоплазматический ретикулум

б) ядро

в) цитоплазма

г) матрикс митохондрий

д) внутренняя митохондр. мембрана

 

Тест 2

Выберите правильный ответ:

Регуляторная реакция ЦТК:

а) сукцинат → фумарат

б) ацетил-КоА + оксалоацетат → цитрат

в) малат → оксалоацетат

г) цитрат → цисаконитат

д) сукцинилКоА → сукцинат

 

Тест 3

Выберите правильнЫЙ ответ:

Связь ЦТК и тканевого дыхания осуществляется за счет:

а) поступления из ЦТК в дыхательную цепь О₂

б) поступления из ЦТК в дыхательную цепь АТФ

в) поступления из ЦТК в дыхательную цепь восстановленных коферментов

(НАДН+Н и ФАДН₂)

г) поступление из ЦТК в дыхательную цепь ферментов

д) поступление из ЦТК в дыхательную цепь ацетил-КоА

 

Тест 4

Выберите правильнЫЙ ответ:

Реакция субстратного фосфорилирования:

а) сукцинил-КоА → сукцинат

б) изоцитрат → α-кетоглутарат

в) α-кетоглутарат → сукцинил-КоА

г) малат → оксалоацетат

д) цис-аконитат → изоцитрат

 

Тест 5

Выберите правильнЫЙ ответ:

Итог работы ЦТК:

а) 3НАДН+Н⁺, 1ФАД2Н, 2 АТФ

б) 2НАДН+Н⁺, 2ФАД2Н, 1 АТФ

в) 3НАДН+Н⁺, 1ФАД2Н, 1 АТФ

г) 1НАДН+Н⁺, 1ФАД2Н, 1 АТФ

д) 1НАДН+Н⁺, 3ФАД2Н, 1 АТФ

 

Тест 6

Выберите правильный ответ:

Компонент дыхательной цепи, на котором происходит разделение Н⁺ и электронов:

а) цит. с

б) цит. с₁

в) ФМН [Fе-S]

г) КоQ

д) цит. в

Тест 7

Выберите правильный ответ:

Первый участок сопряжения окисления и фосфорилирования в дыхательной цепи:

а) цит. в → цит. с₁

б) цит. аа₃ → 1/2 О₂

в) ФМН [Fe-S] → KoQ

г) НАДН → ФМН [Fe-S]

д) цит. с → цит. аа₃

Тест 8

Выберите правильный ответ:

Второй участок сопряжения окисления и фосфорилирования в дыхательной цепи:

а) цит. аа₃ → 1/2 О₂

б) ФМН [Fe-S] → KoQ

в) цит. с → цит. аа₃

г) цит. в → цит. с₁

д) НАДН → ФМН [Fe-S]

 

Тест 9

Выберите правильный ответ:

Третий участок сопряжения окисления и фосфорилирования в дыхательной цепи:

а) цит. аа₃ → 1/2 О₂

б) ФМН [Fe-S] → KoQ

в) цит. в → цит. с₁

г) НАДН → ФМН [Fe-S]

д) цит. с → цит. аа₃

 

Тест 10

Выберите все правильные ответы:

KoQ принимает электроны и Н⁺ от:

а) сукцинат

б) ацил-КоА

в) глицерол-3-фосфат

г) малат

д) α-кетоглутарат

Тест 11

Выберите все правильные ответы:

Субстраты, являющиеся поставщиками электронов и H⁺ для НАД⁺:

а) малат

б) изоцитрат

в) цитрат

г) аконитат

д) сукцинат

 

Тест 12

Выберите все правильные ответы:

Субстраты, являющиеся поставщиками электронов и H⁺ для ФАД:

а) ацил - КоА

б) сукцинат

в) сукцинил-КоА

г) изолимонная кислота

д) фосфоглицерат

Тест 13

Выберите все правильные ответы:

Метаболиты ЦТК, объединяющие три вида обмена:

а) оксалоацетат

б) α - кетоглутарат

в) изоцитрат

г) цис-акониат

д) ацетил-КоА

 

Тест 14

Выберите все правильные ответы:

Ферменты, катализирующие окислительное декарбоксилирование α-кетоглутарата:

а) изоцитратдегидрогеназа

б) липоилсукцинилтрасфераза

в) дегидролипоилдегидрогеназа

г) α-кетоглутаратдегидрогеназа

д) сукцинатдегидрогеназа

 

Тест 15

Выберите все правильные ответы:

Энергопоставляющие реакции ЦТК:

а) фумарат → малат

б) изоцитрат → α-кетоглутарат

в) α-кетоглутарат → сукцинил-КоА

г) ацетил-КоА + оксалоацетат → цитрат

д) малат → оксалоацетат

 

 

Тест 16

Установите соответствие:

«для каждого вопроса – один или несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз или несколько раз»

 

Процессы:	Продукты реакций:
1) окислительное декарбоксилирование ПВК 2) дыхательная цепь 3) гликолиз 4) цикл трикарбоновых кислот	а) НАДН+Н+ б) лактат в) АТФ г) ФАД2Н д) ацетил-КоА

 

Тест 17

Установите строгое соответствие:

Компоненты дыхательной цепи:	Строение компонентов дыхательной цепи:
1) цитохром в 2) коэнзим Q 3) ФМН (Fе-S) 4) цитохром аа3	а) содержит гемовое железо б) содержит негемовое железо в) содержит гемовое железо и медь г) убихинон д) содержит гемовое железо и медь

 

Тест 18

Установите соответствие:

«для каждого вопроса – несколько правильных ответов»

Характер действия на дыхательную цепь:	Вещество:
1) разобщители дыхательной цепи 2) ингибиторы дыхательной цепи	а) тироксин в высоких концентрациях б) цианид в) 2,4-динитрофенол г) СО д) Н2S е) ацетальдегид

Тест 19

Установите соответствие:

«для каждого вопроса – несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован несколько раз или не использован совсем»

Характер действия на дыхательную цепь	Механизм действия на дыхательную цепь
1) разобщители дыхательной цепи 2) ингибиторы дыхательной цепи	а) блокирует звенья дыхательной цепи б) изменяют трансмембранный потенциал в) увеличивают образование АТФ г) снижают выработку АТФ д) блокируют образование АТФ

 

 

Тест 20

Установите СТРОГОЕ соответствие:

Дыхательная цепь	Количество АТФ, образующиеся при работе дыхательной цепи
1) полная дыхательная цепь 2) укороченная дыхательная цепь	а) 4 АТФ б) 3 АТФ в) 2 АТФ г) 1 АТФ

 

Тест 21

установите правильную последовательность:

Компоненты дыхательной цепи:

а) цит. аа₃

б) цит. с

в) цит. в

г) цит. с₁

д) КоQ

Тест 22

Установите соответствие:

«для каждого вопроса – несколько правильных ответов»

 

Челночные механизмы переноса цитоплазматического НАДН+Н:	Локализация
1) глицеролфосфатный 2) малатаспартатный	а) сердце б) скелетные мышцы в) мозг г) соединительная ткань д) почки

 

Тест 23

ВЫБЕРИТЕ НОМЕР ПРАВИЛЬНОГО ОТВЕТА

Клетки человеческого тела, в которых нет ферментов ЦТК и дыхательной цепи:

а) гепатоциты

б) лейкоциты

в) β – клетки островков Лангерганса

г) эритроциты д) тиреоциты

 

 

Тест 24

Установите соответствие:

«для каждого вопроса – один или несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз или несколько раз»

Ингибиторы:	Действие на ферменты ЦТК:
1) малонат 2) фторацетат (по типу летального синтеза) 3) тиоловые яды	а) сукцинатдегидрогеназу б) малатдегидрогеназу в) аконитатгидратазу г) изоцитратдегидрогеназу д) цитратсинтетазу

 

 

Тест 25

Дополните:

Фермент ЦТК, активность которого ингибируется по типу летального синтеза ­__________

 

Тест 26

Дополните:

Вещества, которые останавливают дыхательную цепь и препятствуют передаче электронов называются __________

 

Тест 27

Дополните:

Вещества, которые изменяют трансмембранный потенциал и снижают выработку АТФ в дыхательной цепи называются ____________

 

 

Тест 28

Дополните:

Тип образования АТФ в ЦТК называется ­­_________ __________

 

Тест 29

Дополните:

Тип образования АТФ в дыхательной цепи называется­ ______ _______

 

 

Тест 30

Дополните:

Компоненты дыхательной цепи, содержащие гемовое железо ___________

 

 

Ответы: ЦТК. Тканевое дыхание

1 − г 2 − б 3 − в 4 − а 5 − в 6 − г 7 − в 8 − г 9 − а 10 − а, б, в 11 − а, б 12 − а, б,д 13 − а, б, д 14 − б, в, г 15 − б, в, д

16 − 1а, д, 2в, 3 б, в, 4а, в, г 17 − 1а, 2 г, 3 б, 4 в 18 − 1а, в, 2б, г, д, е 19 − 1б, г, 2 а, д 20 − 1б, 2в 21 − двгба (последовательность) 22 − 1б, в, 2 а, д 23 − г 24 − 1а, 2в, 3а, б,г 25 − аконитатгидротазва 26 − ингибиторы 27 − разобщители 28 − субстратное фосфорилирование 29 − окислительное фосфорилирование 30 − цитохромы

 

Конкретные задачи

3.1 Студент должен знать Роль и механизмы действия сигнальных молекул. Строение и механизм действия гормонов, как представителей одного из видов сигнальных молекул. Виды клеточных рецепторов и механизмы взаимодействия с ними гормонов. Химическую природу и биологическую роль гормонов гипофиза и щитовидной железы Принципы оценки гормонального статуса организма.

3.2 Студент должен уметь: С помощью качественных реакций определить химическую природу гормона.

4.Мотивация -врачу необходимо иметь глубокие знания о механизмах регуляции метаболизма на гормональном уровне для возможности коррекции его с помощью лекарственных препаратов.

5. Задание для самоподготовки:

Студенты должны изучить рекомендуемую литературу, используя вопросы для самоподготовки.

Основная литература

5.1. Повторить лекционный материал по теме: " Механизм действия сигнальных молекул, " " Гормоны гипофиза и щитовидной железы"

5.2. Использовать при подготовке учебник Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. "Биологическая химия" М., Медицина 1998, С. 248-283, 289-298.

5.4 Биохимия (учебник для ВУЗов под ред. чл.-.корр. РАН, проф. Е.С.Северина, М. 2003, С.545-587

5.5. Подготовиться к лабораторной работе по методическому пособию:

Учебно-методическое пособие к практическим занятиям по биологической химии, Санкт-Петербург., 2008

Дополнительная литература

5.6 изучить раздел в учебнике Марри Р,.Греннер Д,.Мейес П,.Родуэлл В. "Биохимия человека" М., Мир.1993, С. 158-192.

5.7. Элиот И., Элиот Д. Биохимия и молекулярная биология. Из-во НИИ Биомедицинской химии РАМН, М. 2000, С. 138-142, 291-311.

5.8. Лабораторные методы исследования в клинике (под ред. В.В.Меньшикова) М.:Медицина,1987-365 с.

5.9. В.С.Камышников Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. М. «МЕДпресс-информ», 2004

5.10. подготовиться к тестовому контролю

 

6. Вопросы для самоподготовки

6.1. Характеристика понятия «сигнальные молекулы»

6.2. Классификация гормонов по химической природе и месту образования

6.3. Механизмы действия гормонов. Характеристика клеточных рецепторов.

6.4. Механизм действия гормонов по прямому типу рецепции.

6.5. Механизм действия гормонов по опосредованному типу рецепции

6.6. Виды мембранных рецепторов

6.7. Виды опосредованной передачи сигнала через мембрану (аденилатциклазный, гуанилатциклазный, фосфатидилинозитольный, Са типы передачи сигнала в клетку

6.8. Виды вторичных посредников

6.9. Рецептор, представленный тирозиновыми протеинкиназами

(инсулиновый рецептор и рецепторы факторов роста)

6.10. Интернализация рецепторов, биологическая роль интернализации

6.11. Причины возникновения эндокринных нарушений,

характеристика заболеваний отдельных желез внутренней секреции а) гормонов гипофиза (механизм действия гормонов, клиника гипо и гиперфункции)

б) гормонов щитовидной железы (механизм действия гормонов, клиника гипо и гиперфункции, эндемический зоб).

 

7. Этапы занятия, контроль усвоения и распределения учебного времен

 

N п\п	Этапы проведения занятия	Формы проведения	Время (мин.)
7.1	Постановка задачи.	Излагает преподаватель.
7.2	Контроль исходного уровня знаний.	Тестовый контроль
7.3	Разбор теоретического материала в соответствии с вопросами для самоподготовки.	Опрос студентов дискуссия.
7.4	Приобретение практических навыков Выполнение практической части занятия - качественные реакции на гормоны, позволяющие охарактеризовать их химическую природу, оформление протоколов работы и подписание протоколов преподавателем.	Выполнение практической работы
7.5	Подведение итогов занятия.	Излагает преподаватель.

 

Пример билета проверочного контроля - см. Тестовый контроль по теме

 

Биуретовая реакция

Ход работы: к 5 каплям инсулина добавить 5 капель 10% раствора едкого натра и 1 каплю (избыток мешает чтению результатов реакции!!!) 1% раствора сернокислой меди. Жидкость окрашивается в фиолетовый цвет.

2. Ксантопротеиновая реакция

Ход работы: к 5 каплям инсулина добавить З капли концентрированной азотной кислоты; образуется осадок белка, который при осторожном нагревании на водяной бане окрашивается в желтый цвет. К охлажденной пробе (!!!) добавляют избыток аммиака - появляется оранжевое окрашивание вследствие образования хиноидного производного тирозина.

3. Реакция Фоля на слабосвязанную серу

Ход работы: вначале денатурируют белок, добавляя к 5 каплям раствора инсулина 1% раствор уксуснокислого свинца по каплям до выпадения осадка. Затем также по каплям добавляют 10% раствор NaOH до полного просветления жидкости (растворение осадка денатурированного белка). Пробирку нагревают в кипящей водяной бане, пока раствор не окрасится в темный (черный) цвет за счет образования осадка сульфида свинца.

Тест 5

 

Выберите все правильныЕ ответЫ:

 

Мембранный тип передачи сигнала в клетку характерен для:

а) гормонов передней доли гипофиза

б) гормонов задней доли гипофиза

в) гормонов коры надпочечников

г) гормонов мозгового вещества надпочечников

д) тироксина

 

Тест 6

 

Выберите все правильныЕ ответЫ:

 

Эндемический зоб

а) возникает в результате избытка йода в почве и воде

б) характеризуется гипофункцией щитовидной железы

в) возникает в результате недостатка йода в почве и воде

г) характеризуется гиперфункцией щитовидной железы

д) является наследственным заболеванием

 

Тест 7

 

Выберите все правильныЕ ответЫ:

 

 

Действие гормона при прямом внутриклеточном типе передачи сигнала реализуется за счет:

 

а) индукции синтеза белков

б) каскадного усиления сигнала

в) аллостерической регуляции активности ферментов

г) репрессии синтеза белков

д) активации ферментов путем ковалентной модификации.

 

 

Тест 8

 

Установите строгое соответствие

Один вопрос – один ответ

 

Проявление действия	Синтез гормона и состояние рецепторов
1) задержка роста у детей 2) карликовость Ларона 3) карликовость пигмеев 4) гигантизм 5) акромегалия	а) недостаточный синтез гормона роста (ГР) в детском возрасте б) избыточный синтез ГР в детском возрасте в) избыточный синтез ГР у взрослых г) дефект рецепторов для ГР в печени, синтез ГР в норме д) пострецепторный дефект передачи сигнала, синтнз ГР в норме

 

 

Тест 9

Выберите все правильныЕ ответЫ:

 

Действие гормона при опосредованном типе передачи сигнала реализуется за счет:

а) репрессии синтеза белков

б) каскадного усиления сигнала

в) аллостерической регуляции активности ферментов

г) индукции синтеза белков

д) активации ферментов путем ковалентной модификации (фос-форилирования)

 

Тест 10

Выберите правильнЫЙ ответ:

Клинические проявления: у женщин — аменорея, галакторея, гинекомастия, у мужчин — импотенция и гинекомастия характерны для

а) увеличения синтеза гормона роста

б) увеличения синтеза лютеинизирующего гормона

в) увеличения синтеза пролактина

г) увеличения синтеза фолликулостимулирующего гормона

д) увеличения синтеза половых гормонов

Тест 11

Выберите правильнЫЙ ответ:

Лютеинизирующий гормон

 

а) синтезируется половыми железами, необходим для нормального протекания беременности

б) синтезируется гипофизом, необходим для процесса овуляции

в) синтезируется желтым телом, необходим для нормального протекания беременности

г) синтезируется половыми железами, определяет вторичные половые признаки

д) синтезируется гипофизом, стимулирует синтез половых гормонов

 

Тест 17

Выберите правильнЫЙ ответ:

Гидрофильная сигнальная молекула:

а) проникает в клетку с помощью переносчика, взаимодействует с мембранным рецептором

б) в клетку, как правило, не проникает, взаимодействует с мембранным рецептором

в) проникает в клетку без переносчика, взаимодействует с цитоплазматическим или ядерным рецептором

г) проникает в клетку путем активного транспорта, взаимодействует с цитоплазматическим или ядерным рецептором

д) проникает в клетку путем облегченной диффузии, взаимодействует с цитоплазматическим или ядерным рецептором

 

 

Тест 18

Выберите правильнЫЙ ответ:

Адренокортикотропин:

 

а) синтезируется в надпочечниках, является гормоном белковой природы

б) синтезируется в надпочечниках, является производным аминокислоты тирозина

в) синтезируется в надпочечниках, является стероидом

г) синтезируется в гипофизе, является гормоном белковой природы

д) синтезируется в гипофизе, является стероидом

 

Тест 19

Выберите все правильныЕ ответЫ:

Сигнальными молекулами являются:

 

а) гормоны

б) биогенные амины

в) нейромедиаторы

г) простагландины

д) конечные продукты метаболических циклов

 

Тест 20

Установите соответствие:

одному вопросу соответствует несколько ответов или ни одного ответа

Гормон	Проявление действия
1) лютенизирующий 2) лактотропный 3) фолликулостимулирующий	а) продукция прогестерона желтым телом б) рост фолликулов яичников в) рост клеток семенников (кл. Сертоли г) продукция андрогенов клетками Лейдига семенников д) продукция эстрогенов фолликулами яичников

 

Тест 21

Выберите все правильныЕ ответЫ:

К гормонам белковой и пептидной природы принадлежат:

а) вазопрессин

б) тироксин

в) тиреокальцитонин

г) адреналин

д) инсулин

Тест 22

 

Установите соответствие:

Одному вопросу соответствует несколько ответов

 

Тип рецепции	Характеристика действия
1) прямой 2) мембранный	а) требует вторичных посредников б) не требует вторичных посредников в) гормон проникает внутрь клетки г) гормон не проникает внутрь клетки д) ответ развивается через 30 - 60 мин е) ответ развивается через 8- 12 час

Тест 23

Выберите все правильныЕ ответЫ:

Производными аминокислот являются следующие гормоны:

а) окситоцин

б) тироксин

в) тиреокальцитонин

г) адреналин

д) эстрадиол

Тест 24

 

Выберите правильнЫЙ ответ:

Конкретные цели

Студент должен знать:

1. Наличие разных уровней регуляции углеводного обмена.

2. Метаболическую регуляцию по принципу отрицательной обратной связи на примере регуляции аэробного окисления глюкозы концентрацией конечного продукта - АТФ.

3. Метаболическую регуляцию по типу фосфорилирования дефосфорилирования в зависимости от концентрации в клетке вторичного посредника (цАМФ) на примере распада и синтеза гликогена.

4. Гормональную регуляцию обмена глюкозы в зависимости от функционального состояния организма.

5. Норму содержания глюкозы в крови. Виды гипо- и гипергликемии, виды глюкозурии.

Студент должен уметь: Провести количественное определение глюкозы в крови.

4. Мотивация -врачу необходимо иметь знания о механизмах регуляции углеводного обмена, уметь использовать эти знания в лечебной практике и при проведении экспериментальных исследований при изучении механизмов воздействия различных факторов на организм.

5. Задание для самоподготовки:

Студенты должны изучить рекомендуемую литературу, используя вопросы для самоподготовки.

Основная литература

5.1. Повторить лекционный материал по теме: " Регуляция углеводного обмена."

5.2. Использовать при подготовке учебник Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. "Биологическая химия" М., Медицина 1998, с. 357-361, 267-280, 292-294.

5.3. Биохимия: Учебник/ Под ред. Е.С. Северина. –М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. -С. 545-549, 572-592.

5.4. Подготовиться к лабораторной работе по методическому пособию:

Учебно-методическое пособие к практическим занятиям по биологической химии, Санкт-Петербург., 2008

Дополнительная литература.

5.5. Мари Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. «Биохимия человека» М., Мир, 1993. –С. 212-224.

5.6 Медицинские лаборатоные технологии. Под ред. А.Н.Карпищенко, в двух томах. - СПб:"Интермедика". – 1999. – 656 с.

5.7. Trinder P. Determination of glucose in blood using glucose oxidase with an alternative oxygen acceptor // Ann. clin. Biochem. -1969, -Vol. 6. –P. 24.

5.8. Долгов В.В., Аметов А.С., Щетникович К.А., Ройтман А.П., Демидова Т.Ю. Лабораторная диагностика обмена углеводов, сахарный диабет. Лахема, 2000, 63с.

6. Вопросы для самоподготовки:

6.1. Уровни регуляции углеводного обмена.

6.2. Метаболическая регуляция по принципу отрицательной обратной связи на примере регуляции аэробного окисления глюкозы концентрацией АТФ.

6.3. Ключевые этапы и ферменты регуляции аэробного окисления глюкозы.

6.4. Метаболическая регуляция по типу фо<