Посев по методу Дригальского

Посев производится на трех занумерованных чашках Петри (I, II, III) с питательной средой. Для посева используются шпатели, завернутые в бумагу и простерилизованные.

1. На поверхность питательной среды в чашке I наносят петлей й каплю исследуе­мого материала и растирают ее стерильным шпателем по всей поверхности питательной среды.

2. Вынимают шпатель из чашки I, закрывают ее и быстро переносят шпатель в чашку II, не прожигая его. Расти­рают материал по всей поверхности среды. Чашку II закрывают.

3. Так же переносят шпатель в чашку III и растирают мате­риал по поверхности питательной среды. Закрывают чашку. Шпатель опускают в дезинфицирующую жидкость.

4. Чашки надписывают (название материала, фамилия больного, дата) и помещают в термостат.Чашки находятся в термостате 18—24 часа.

6. Определение биохимических свойств микробов:

Сахаролшпические свойства изучают на средах Гисса.

Среды Гисса - жидкие сложные питательные среды, по классификации сред относятся к дифференциальным

Состав: ПВ - питательная основа; углевод - дифференциальный фактор; индикатор Андреде - индикатор на РН. В пробирку, содержащую глюкозу, помещен "поплавок" - маленькая перевернутая пробирка. Среды до посева соломенно-желтого цвета.

Принцип работы среды - если засеянная в среду культура расщепляет соответствующий углевод, цвет среды меняется на красный, так как среда закисляется. Глубина расщепления углеводов оценивается по глюкозе, при расщеплении которой видно не только закисление по покраснению среды, но и газообразование, которое видно в виде пузырька газа в "поплавке".

Протеолитические свойства - на пептонной воде. Для определения глубины расщепления белка под пробки помещены: лакмусовая бумага (посинеет при образовании NH₃); фильтровальная бумага, смоченная уксуснокислым свинцом (почернеет при образовании H₂S); реактив Эрлиха добавляют для определения индола (среда, содержащая индол покраснеет).

7. Определение чувствительности к антибиотикам методом стандартных дисков:

Исследуемую культуру засевают газоном на чашку Петри с плотной питательной средой (чаще всего на МПА). На засеянную поверхность среды сразу же раскладывают (не более 6 на чашку) стандартные бумажные диски, содержащие антибиотики (30 мкг). Каждый диск маркирован тремя буквами от названия соответствующего антибиотика. Засеянные чашки помещают в термостат. Через 24 часа учитывают результат, измеряя диаметр зоны задержки роста. Чувствительность культуры к антибиотику определяют по таблице, но ориентировочно можно считать: до 12 мм - устойчив, до 20 – умеренно устойчив, более 20 - чувствителен.

8. Качественная проба на бактериофаг по Отто:

На чашку Петри с МПА газоном засевают известную культуру (например Е. coli), затем наносят каплю фильтрата, содержащую неизвестный бактериофаг, дают ей стечь по поверхности засеянного МПА. Чашку помещают в термостат. Через 24 часа учитывают результат. Если по ходу стекающей капли культура не выросла, образовалась "стерильная дорожка", значит в фильтате содержался бактериофаг, лизирующий данную культуру (в нашем случае - колифаг).

9. Фаготипирование стафилококков:

Дно чашки Петри с МПА делят на квадраты, каждый из которых подписывают цифрами, соответствующими номерам типовых стафилофагов. На подготовленную чашку газоном засевают исследуемый штамм S.aureus и в каждый квадрат капают соответствующий типовой стафилофаг. Засеянную чашку с культурой и бактериофагами помещают в термостат. На другой день учитывают результат фаготипирования, отмечая номера типовых стафилофагов, лизировавших культуру (в соответствующих квадратах будут видны "стерильные пятна"). Фаготип - перечень типовых бактериофагов, лизировавших данную культуру. Это - один из приемов внутривидового типирования, позволяющий установить источник инфекции и пути распространения.

10. Титрование вируса полиомиелита в цветной пробе Солка:

В пробирках находится вируссодержащий материал в соответствующих разведениях и культура клеток в виде взвеси в поддерживающей среде.

В контрольной пробирке содержится только культура клеток в виде взвеси в поддерживающей среде.

Штатив помещают в термостат. Просматривают ежедневно. После того как в контрольной пробирке цвет среды изменится с красного на желтый, что свидетельствует о том, что культура клеток жива, штатив извлекают из термостата и учитывают результат. Титром вируса является наибольшее разведение, в которой произошла гибель клеток и цвет среды поэтому не измененился, остался красным.

Серологические реакции