Определение содержания белковых веществ — КиберПедия 

Эмиссия газов от очистных сооружений канализации: В последние годы внимание мирового сообщества сосредоточено на экологических проблемах...

Своеобразие русской архитектуры: Основной материал – дерево – быстрота постройки, но недолговечность и необходимость деления...

Определение содержания белковых веществ

2017-11-17 814
Определение содержания белковых веществ 0.00 из 5.00 0 оценок
Заказать работу

Белки – высокомолекулярные азотсодержащие органические соединения. В природе существует примерно от 1010 до 1012 различных белков, содержание которых в биологических объектах зависит от ряда факторов: климатических условий, урожайности, биологических особенностей.

По своему строению белки являются высокомолекулярными соединениями, состоящими из аминокислот. Соединенные амидной (пептидной) связью аминокислоты образуют полипептиды простого (протеина) и сложного (протеида) строения. В состав протеидов дополнительно входят небелковые вещества (липиды, углеводыит. д.).

 

Всреднем белковые молекулы содержат: 50–54 % углерода; 15–18 % азота; 20–23 % кислорода; 6–8 % водорода и 0,3–2,5 % серы.

 

При проведении производственного анализа содержание белковых веществ подсчитывают не по белковому, а по общему азоту, входящему в состав всех органических и неорганических веществ. Такое отклонение в точности определения содержания белков вполне допустимо.

 

Обычно содержание общего азота в пищевых продуктах определяют с использованием метода Кьельдаля. В целях упрощенияи сокращения длительности анализа этот метод неоднократно подвергался модификации. В настоящее время разработаны высокопроизводительные автоматические анализаторы типа «Кьельфос».

 

Минерализацию (сжигание) производят нагреванием навески продукта с концентрированной серной кислотой в присутствии катализаторов (сернокислой меди или пероксида водорода), а также веществ, повышающих температуру кипения смеси (сульфата натрия или калия). Минерализация органических веществ протекает в четыре стадии по нижеприведенной схеме.

1. Гидролитический распад:

R'   CH2 CH         COOH H2SO4 COOH + R"   CH2   CH   COOH
             
                                     
      HN         C     CH   CH2 R" + H2O R'   CH2   CH        
                             
                       
               
                             
                         
                       
                       
                  O     NH         NH         NH    
                                   

 

2. Декарбоксилирование:

R   CH   CH   COOH R   CH   CH + CO  
         
                   
           
          NH2           NH2      

 

3. Окисление:

CH3CH2CH2NH2 + 9 H2SO4 NH3 + 3 CO2 + 9 SO2 + 12 H2O

4. Связываниекислотой:

 

 

2 NH3 + H2SO4 (NH4)2SO4

 

Из образовавшегося сернокислого аммония аммиак вытесняют концентрированной щелочью:

 

(NH4)2SO4 + 2 NaOH 2 NH4OH + Na2SO4.

 

 

Выделяющийся аммиак отгоняют и улавливают титрованным раствором серной кислоты, которую берут в избытке:

 

2 NH4OH 2 NH3 + H2O 2 NH3 + H2SO4 (NH4)2SO4

 

Содержание общего азота (в процентах) рассчитывают по формуле:

 

(V- V 1) K 0,0014 100
  m  

 

где V – объем 0,1 М раствора гидроксида натрия, израсходованного на титрование серной кислоты в контрольной пробе, см3; V1 – объем 0,1 М раствора гидроксида натрия, израсходованного на титрование избытка серной кислоты в рабочей пробе, см3; K – коэффициент пересчета на точный титр 0,1 М раствора гидроксида натрия, г; 0,0014 – количество азота, эквивалентное 1 см3 0,1 М раствора гидроксида натрия, г; m – масса навески образца, г.

За окончательный результат принимают среднее арифметическое значение двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,2 %. Вычисление проводят до второго знака после запятой.

 

Для определения азота истинных белков исследуемый образец смешивают с водой и прибавляют к смеси соответствующий реактив, осаждающий белок. Выпавший осадок белка отфильтровывают, затем проводят определение азота в осадке и фильтрате. Азот осадка соответствует белковому азоту, а азот фильтрата – небелковому. Зная содержание общего азота в образце, можно ограничиться определением азота только в осадке или в фильтрате. По разности между общим азотом и азотом, найденным в осадке или фильтрате, судят о количестве белкового и небелкового азота.

 

Колориметрический метод определения содержания белка (метод Лоури) основан на цветной реакции белков с реактивом Фолина.

 

Интенсивность окраски определяют на фотоэлектроколориметре с красным светофильтром или на спектрофотометре при длине волны 750 нм. Количество белка в растворе находят по калибровочной кривой. Метод применяют для определения содержания белка в растворах с концентрацией от 10 до 100 мкг.

 

В основе биуретового метода определения содержания белка лежит биуретовая реакция.

 

Имеются различные методы определения содержания азота, например метод Дюма. Метод заключается в разложении органического соединения в атмосфере оксида углерода до газообразного состояния с последующим измерением объема азота N2.

Широкое распространение получил метод инфракрасной спектроскопии, в основе которого лежит поглощение молекулами белков света с определенной длиной волны. Приборы калибруют по образцам с известным содержанием белка (эталонам), определяемым по методу Кьельдаля.

 

Известны методы количественного определения белка, основанные на различной степени помутнения (нефелометрический метод) и способности белков адсорбировать красители (кумасси синий R-250, амидочерный и др.). Данные методы характеризуются высокой точностью и простотой определения, хотя имеют ряд ограничений.

 

Массовую долю белка в пищевых продуктах определяют также колориметрическим методом, основанным на способности белков при рН ниже изоэлектрической точки связывать кислотные красители с образованием нерастворимых комплексов. При этом интенсивность окраски раствора уменьшается обратно пропорционально количеству белка. После удаления нерастворимого комплекса измеряют оптическую плотность раствора и по градуировочному графику определяют массовую долю белка.

 

Определение массовой доли белков методом формольного титрования применяют для контроля массовой доли белка в молоке кислотностью не более 22оС. Он основан на реакции щелочных аминогрупп белка с формалином, в результате которой высвобождаются карбоксильные группы белка. При этом повышается титруемая кислотность молока, по приросту которой и определяют массовую долю белка.

 

Для определения массовой доли белка в молоке применяют также рефрактометрический метод, основанный на изменении показателей преломления молока и безбелковой молочной сыворотки, полученной из того же образца молока, разность между которыми пропорциональна массовой доле белка в молоке.

 


Поделиться с друзьями:

Своеобразие русской архитектуры: Основной материал – дерево – быстрота постройки, но недолговечность и необходимость деления...

Адаптации растений и животных к жизни в горах: Большое значение для жизни организмов в горах имеют степень расчленения, крутизна и экспозиционные различия склонов...

Историки об Елизавете Петровне: Елизавета попала между двумя встречными культурными течениями, воспитывалась среди новых европейских веяний и преданий...

История развития хранилищ для нефти: Первые склады нефти появились в XVII веке. Они представляли собой землянные ямы-амбара глубиной 4…5 м...



© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!

0.025 с.