Лептоспиры (завитки с загнутыми крючкообразными концами) — КиберПедия 

Особенности сооружения опор в сложных условиях: Сооружение ВЛ в районах с суровыми климатическими и тяжелыми геологическими условиями...

Историки об Елизавете Петровне: Елизавета попала между двумя встречными культурными течениями, воспитывалась среди новых европейских веяний и преданий...

Лептоспиры (завитки с загнутыми крючкообразными концами)

2017-11-16 182
Лептоспиры (завитки с загнутыми крючкообразными концами) 0.00 из 5.00 0 оценок
Заказать работу

борреллии (от 4 до 12 непр завитков)

трепонемы (от 14 до 17 равномерных мелких завитков).

23)I этап – обогащение на среде Китт – Тароцци, предварительно прокипячен­ной в течение 30 минут. После посева среду прогревают 15 минут при 80°С для уничтожения вегетативных форм, споры анаэробов при этом сохраняются. II этап – получение изолированных колоний На средах Китт – Тароцци обнаружи­вается помутнение с пузырьками газа. Выделение чистой культуры проводится по одному из следующих методов:А) по Цейсслеру – каплю материала со среды Китт – Тароцци засевают в чашку с кровяным агаром и распределяют материал шпателем, этим же шпате­лем производят посев во второй и третьей чашках;Б) по Вейнбергу: каплю материала со среды Китт – Тароцци переносят в растопленный и слегка остуженный сахарный агар, затем набирают в трубки Виньял – Вейона и инкубируют в термостате. Ш этап – выделение чистой куль­туры на среде Китт – Тароцци. Метод Фортнера.Посевы проводят на чашку Петри с толстым слоем среды, разделённым пополам узкой канавкой, вырезанной в агаре. На одну половину засевают культуру аэробных бактерий, на другую — анаэробных. Края чашки заливают парафином и инкубируют в термостате. Первоначально наблюдают рост аэробов, а затем (после поглощения кислорода) — рост анаэробов.

24) Кроме обычных вирусов, известны и так называемые нека­нонические вирусы — прионы — белковые инфекционные ча­стицы, являющиеся агентами белковой природы, имеющие вид фибрилл размером 10—20x100—200 нм. Прионы, по-видимому, являются одновременно индукторами и продуктами автономно­го гена человека или животного и вызывают у них энцефалопа­тии в условиях медленной вирусной инфекции (болезни Крейтц- фельдта—Якоба, куру и др.).Другими необычными агентами, близкими к вирусам, явля­ются вироиды — небольшие молекулы кольцевой, суперспи- рализованной РНК, не содержащие белка, вызывающие забо­левания у растений.

25) Ферменты бактерий. Ферменты распознают соответствующие им метаболиты (субстраты), вступают с ними во взаимодействие и ускоряют химические реакции. Ферменты являются белками, уча­ствуют в процессах анаболизма (синтеза) и катаболизма (распа­да), т.е. метаболизма. Многие ферменты взаимосвязаны со струк­турами микробной клетки. Например, в цитоплазматической мем­бране имеются окислительно-восстановительные ферменты, уча­ствующие в дыхании и делении клетки; ферменты, обеспечива­ющие питание клетки, и др. Окислительно-восстановительные ферменты цитоплазматической мембраны и ее производных обес­печивают энергией интенсивные процессы биосинтеза различ­ных структур, в том числе клеточной стенки. Ферменты, свя­занные с делением и аутолизом клетки, обнаруживаются в кле­точной стенке. Так называемые эндоферменты катализируют ме­таболизм, проходящий внутри клетки. Экзоферменты выделяют­ся клеткой в окружающую среду, расщепляя макромолекулы питательных субстратов до простых соединений, усваиваемых клеткой в качестве источников энергии, углерода и др. Некото­рые экзоферменты (пенициллиназа и др.) инактивируют анти­биотики, выполняя защитную функцию.Различают конститутивные и индуцибельные ферменты. К конститутивным ферментам относят ферменты, кото­рые синтезируются клеткой непрерывно, вне зависимости от на­личия субстратов в питательной среде. Индуцибельные (адаптивные) ферменты синтезируются бактериальной клет­кой только при наличии в среде субстрата данного фермента. Например, р-галактозидаза кишечной палочкой на среде с глю­козой практически не образуется, но ее синтез резко увеличи­вается при выращивании на среде с лактозой или другим р-га- лактозидозом.Некоторые ферменты (так называемые ферменты агрессии) разрушают ткань и клетки, обусловливая широкое распростра­нение в инфицированной ткани микроорганизмов и их токси­нов. К таким ферментам относят гиалуронидазу, коллаге-назу,дезоксирибонуклеазу,нейраминидазу, леци- товителлазу и др. Так, гиалуронидаза стрептококков, расщеп­ляя гиалуроновую кислоту соединительной ткани, способствует распространению стрептококков и их токсинов.Известно более 2000 ферментов. Они объединены в шесть клас­сов: оксидоредуктазы — окислительно-восстановительные фер­менты (к ним относят дегидрогеназы, оксидазы и др.); транс- феразы, переносящие отдельные радикалы и атомы от одних соединений к другим; гидролазы, ускоряющие реакции гидро­лиза, т.е. расщепления веществ на более простые с присоедине­нием молекул воды (эстеразы, фосфатазы, глюкозидазы и др.); лиазы, отщепляющие от субстратов химические группы негид­ролитическим путем (карбоксилазы и др.); изомеразы, превра­щающие органические соединения в их изомеры (фосфогексои- зомераза и др.); лигазы, или синтетазы, ускоряющие синтез сложных соединений из более простых (аспарагинсинтетаза, глю- таминсинтетаза и др.).Различия в ферментном составе используются для идентифи­кации микроорганизмов, так как они определяют их различные биохимические свойства: сахаролитические (расщепление Саха­ ров), протеолитические (разложение белков) и другие, выявля­емые по конечным продуктам расщепления (образование щело­чей, кислот, сероводорода, аммиака и др.).Ферменты микроорганизмов используют в генетической ин­женерии (рестриктазы, лигазы и др.) для получения биологи­чески активных соединений, уксусной, молочной, лимонной и других кислот, молочнокислых продуктов, в виноделии и дру­гих отраслях. Ферменты применяют в качестве биодобавок в сти­ральные порошки («Ока» и др.) для уничтожения загрязнений белковой природы.

26) А) по Цейсслеру – каплю материала со среды Китт – Тароцци засевают в чашку с кровяным агаром и распределяют материал шпателем, этим же шпате­лем производят посев во второй и третьей чашках;Б) по Вейнбергу: каплю материала со среды Китт – Тароцци переносят в растопленный и слегка остуженный сахарный агар, затем набирают в трубки Виньял – Вейона и инкубируют в термостате. Ш этап – выделение чистой куль­туры на среде Китт – Тароцци. Метод Фортнера.Посевы проводят на чашку Петри с толстым слоем среды, разделённым пополам узкой канавкой, вырезанной в агаре. На одну половину засевают культуру аэробных бактерий, на другую — анаэробных. Края чашки заливают парафином и инкубируют в термостате. Первоначально наблюдают рост аэробов, а затем (после поглощения кислорода) — рост анаэробов.

27) Изготовление препаратов для световой микроскопии.Фиксация – это процесс быстрой консервации клеточных структур, при котором все физиолого-биохимические процессы останавливаются, а водорастворимые вещества переходят в нерастворимое состояние. Следовательно, фиксация позволяет сохранить внутриклеточные структуры в неизменном виде на длительное время. Однако при фиксации в клетках могут появляться артефакты – новые структуры, которые отсутствуют в живой клетке, например, разнообразные вакуоли. Для предотвращения появления артефактов необходимо использовать специально подобранные химические растворы – фиксаторы, а сама фиксация должна проводиться в определенных условиях. В частности, желательно использовать охлажденные фиксаторы (до 2...3 градусов); для фиксации нужно брать отдельные клетки или кусочки тканей не толще 5 мм; объем фиксатора должен превышать объем фиксируемого материала в 50...100 раз; фиксатор не должен использоваться для длительного хранения материала; фиксатор не должен использоваться повторно. Формалин (формальдегид, или муравьиный альдегид). Наиболее простой и широко распространенный фиксатор. Применяется в виде водных растворов с концентрацией 4...10%, при этом за 100% принимается концентрация продажного формалина. Продажный формалин содержит примесь муравьиной кислоты, которую нейтрализуют с помощью углекислого кальция в течение 24 часов. Время фиксации от 1 часа до 24 часов. Для длительного хранения материал переносят в свежий 10%-ный формалин. Чистый формалин используют в том случае, если планируется дальнейшее изучение локализации и активности ферментов. Чаще же формалин включается в рецептуру более сложных фиксаторов. Спиртовые фиксаторы. Содержат этиловый или метиловый спирт. Водные растворы спиртов в чистом виде (70%, 96% или 100%) используются относительно редко. Чаще применяют 100%-ные спирты, которые смешивают с другими веществами. В качестве универсальных фиксаторов используют различные композиции на основе формалина, спиртов, органических кислот и неорганических веществ. Уксусный алкоголь (ацеталкоголь). Это один из наиболее простых фиксаторов. Состоит из 3 частей абсолютного спирта (этилового, а лучше – метилового) и 1 части ледяной уксусной кислоты. Для приготовления 100%-ного (абсолютного) спирта исходные спирты обезвоживают. Для обезвоживания этилового спирта (этанола) используют безводный сульфат меди, а для обезвоживания метилового спирта (метанола) – используют оксид кальция. Хранят их в герметичной посуде. Для приготовления ледяной уксусной кислоты исходную концентрированную кислоту охлаждают в холодильнике; при этом кислота замерзает, раньше, чем вода. Жидкость сливают, а замерзшую кислоту оттаивают и используют для приготовления фиксатора. Фиксатор готов для употребления через 24 часа. Хранить фиксатор в темном холодном месте. Время фиксации – 2...24 часа. Затем материал переносят в свежий фиксатор, в котором он может храниться до 1 месяца в холодильнике. Для более длительного хранения материал переносят в 70%-ный спирт. Фиксатор Карнуа. Состав – 1 часть ледяной уксусной кислоты: 6 частей абсолютного спирта: 3 части хлороформа. Это универсальный фиксатор, который обеспечивает быструю фиксацию (в течение 1...2 часов).Фиксаторы, содержащие пикриновую кислоту, например, смесь Буэна – 15 мл насыщенного водного раствора пикриновой кислоты: 5 частей формалина: 1 часть ледяной уксусной кислоты. Этот фиксатор готовят непосредственно перед употреблением. Время фиксации от 1 до 24 часов (иногда несколько суток). Фиксированный материал хранят в 70%-ном спирте.Кроме перечисленных фиксаторов общего назначения, существуют и специальные фиксаторы. Например, фиксатор для митохондрий содержит 4 части 3%-ного р-ра дихромата калия и 1 часть 40%-ного формалина. Фиксатор для хлоропластов содержит 15 частей насыщенного р-ра медного купороса, 1 часть 40%-ного формалина и 5 частей воды.В ряде случаев вместо химической фиксации применяется быстрое замораживание образцов, например, при температуре жидкого азота (–1960) или при температуре сухого льда (–780). Замороженные объекты могут быть обезвожены путем возгонки воды в вакууме при температуре ниже –400 (этот процесс называется лиофилизация).Окрашивание позволяет выявлять внутриклеточные структуры, обладающие повышенным сродством к определенным красителям. Красители – это относительно низкомолекулярные органические вещества, обладающие повышенным сродством к определенным химическим компонентам клетки.Существует множество красителей, которые используются для различных целей. Нужно иметь в виду, что выбор красителя связан с характером фиксации и различными методами предварительной обработки клеток.Названия красителей могут соответствовать получаемой окраске (рубин, кармин, метиловый синий, метиленовый синий, генциановый фиолетовый, метиловый зеленый, оранжевый золотой). Иногда русские названия цветов заменяют на немецкие, например: метилблау, генцианвиолет. В других случаях названия носят отвлеченный, исторически сложившийся характер, например: пиронин, фуксин, сафранин, флороглюцин, судан III. Иногда название красителя не соответствует полученной окраске, например, синий тионин дает фиолетово-красное окрашивание. Довольно редко применяются химические номенклатурные названия красителей, например: диметиламинобензальдегид, 8-амино-1-нафтол-5-сульфокислота. Различают основные (щелочные), кислотные и нейтральные красители. Основные красители избирательно окрашивают базофильные клеточные структуры (то есть структуры с кислотными свойствами). Кислотные красители избирательно окрашивают ацидофильные, или оксифильные клеточные структуры (то есть структуры со щелочными свойствами). Нейтральные красители окрашивают и базофильные, и ацидофильные структуры.Наименее токсичные красители используются для прижизненной окраски клеток. Красители для фиксированных клеток могут использоваться в чистом виде (водные или спиртовые растворы, концентрация от 0,1% до 1%), например: эозин, фуксин. Часто используют смеси красителей, например, смесь Романовского–Гимза (содержит метилен–азур, метиленовый фиолетовый, метиленовый синий и эозин), окраска по Маллори (последовательное использование кислотного фуксина S, а затем смеси анилинового синего и оранжевого золотого G), азур–эозин, метилблау–эозин. Однако чаще краситель образуется в ходе его приготовления. Например, широко известное вещество растительного происхождения гематоксилин становится красителем только после его окисления до гематеина. Для окрашивания ядер и хромосом широко используются красители в сочетании с органическими кислотами. Рассмотрим методики приготовления некоторых наиболее простых красителей.Приготовление 2%-ного ацетофуксина. 1 грамм основного фуксина растворяют в 50 мл 40%-ной уксусной кислоты при подогревании на водяной бане.Приготовление 1%-ного ацеторсеина. К 1 грамму орсеина добавляют 50 мл ледяной уксусной кислоты и настаивают около 12 часов. Затем смесь нагревают до кипения и добавляют 50 мл дистиллированной воды. Затем нагревают до кипения и охлаждают, повторяя эту процедуру 10 раз. Через сутки краситель фильтруют. Перед окрашиванием на 9 частей красителя добавляют 1 часть 1 н. HCl.Приготовление 4%-ного ацетокармина. Раствор готовят в термостойкой колбе с водяным холодильником. 4 грамма ацетокармина смешивают с 100 мл 50%-ной уксусной кислоты и кипятят 1 час. Через сутки краситель фильтруют. Аналогичным образом приготавливается ацетолакмоид. Вместо уксусной кислоты часто используют другие органические кислоты, например, 40%-ную молочную кислоту.Все красители после приготовления фильтруют и хранят в темном прохладном месте. Время окрашивания препаратов зависит от температуры (обычно от 20 минут до 1 суток). При нагревании или кипячении время окрашивания сокращается.Кроме окрашивания органическими красителями отдельные структуры можно выделить, используя их импрегнацию серебром и другими металлами.

28) Иммерсионная микроскопия - это метод исследований,когда между объектом и объективом вводят специальную жидкость,которая, в свою очередь из-за коэффициента преломления света,большего,чем в воздухе позволяет повысить яркость и контрастность изображения,а также увеличить глубину резкости.Применяется очень широко,практически во всех лабораториях,где для исследований используют оптику,увеличивающую объект бодее,чем в 100 раз. Метод фазового контрастаи его разновидность — т. н. метод «аноптрального» контраста предназначены для получения изображений прозрачных и бесцветных объектов, невидимых при наблюдении по методу светлого поля. К таковым относятся, например, живые неокрашенные животные ткани. Суть метода в том, что даже при очень малых различиях в показателях преломления разных элементов препарата световая волна, проходящая через них, претерпевает разные изменения по фазе (приобретает т. н. фазовый рельеф). Не воспринимаемые непосредственно ни глазом, ни фотопластинкой, эти фазовые изменения с помощью специального оптического устройства преобразуются в изменения амплитуды световой волны, т. е. в изменения яркости («амплитудный рельеф»), которые уже различимы глазом или фиксируются на фоточувствительном слое. Иными словами, в получаемом видимом изображении распределение яркостей (амплитуд) воспроизводит фазовый рельеф. Получаемое таким образом изображение называется фазово-контрастным. Фазово-контрастное устройство может быть установлено на любом световом микроскопе и состоит из:Набора объективов со специальными фазовым пластинками; Конденсора с поворачивающимся диском. В нем установлены кольцевые диафрагмы, соответствующие фазовым пластинкам в каждом из объективов;Вспомогательного телескопа для настройки фазового контраста.Настройка фазового контраста заключается в следующем: 1)Заменяют объективы и конденсор микроскопа на фазовые (обозначенные буквами Ph); 2)Устанавливают объектив малого увеличения. Отверстие в диске конденсора должно быть без кольцевой диафрагмы (обозначенной цифрой "0");3)Настраивают свет по Келеру;4)Выбирают фазовый объектив соответствующего увеличения и фокусируют его на препарат;5)Поворачивают диск конденсора и устанавливают соответствующую объективу кольцевую диафрагму;6)Вынимают из тубуса окуляр и вставляют на его место вспомогательный телескоп. Настраивают его так, чтобы были резко видны фазовая пластинка (в виде темного кольца) и кольцевая диафрагма (в виде светлого кольца того же диаметра). С помощью регулировочных винтов на конденсоре совмещают эти кольца. Вынимают вспомогательный телескоп и вновь устанавливают окуляр.Благодаря применению этого способа микроскопии контраст живых неокрашенных микроорганизмов резко увеличивается и они выглядят темными на светлом фоне (позитивный фазовый контраст) или светлыми на темном фоне (негативный фазовый контраст). Фазово-контрастная микроскопия применяется также для изучения клеток культуры ткани, наблюдения действия различных вирусов на клетки и т. п. В этих случаях часто применяют биологические микроскопы с обратным расположением оптики - инвертированные микроскопы. У таких микроскопов объективы расположены снизу, а конденсор - сверху.Метод исследования в свете люминесценции (люминесцентная микроскопия, или флуоресцентная микроскопия) состоит в наблюдении под микроскопом зелено-оранжевого свечения микрообъектов, которое возникает при их освещении сине-фиолетовым светом или не видимыми глазом ультрафиолетовыми лучами. В оптическую схему микроскопа вводятся два светофильтра. Один из них помещают перед конденсором. Он пропускает от источника-осветителя излучение только тех длин волн, которые возбуждают люминесценцию либо самого объекта (собственная люминесценция), либо специальных красителей, введённых в препарат и поглощённых его частицами (вторичная люминесценция). Второй светофильтр, который установлен после объектива, пропускает к глазу наблюдателя (или на фоточувствительный слой) только свет люминесценции. В люминесцентной микроскопии используют освещение препаратов как сверху (через объектив, который в этом случае служит и конденсором), так и снизу, через обычный конденсор. Наблюдение при освещении сверху иногда называют «люминесцентной микроскопией в отражённом свете» (этот термин условен — возбуждение свечения препарата не является простым отражением света). Его часто используют совместно с наблюдением по фазово-контрастному методу в проходящем свете. Метод нашел широкое применение в микробиологии, вирусологии, гистологии, цитологии, в пищевой промышленности, при исследовании почв, в микрохимическом анализе, в дефектоскопии. Такое многообразие применений объясняется очень высокой цветовой чувствительностью глаза и высокой контрастностью изображения самосветящегося объекта на тёмном нелюминесцирующем фоне. Кроме того, информация о составе и свойствах исследуемых веществ, которую можно получить, зная интенсивность и спектральный состав их люминесцентного излучения, имеет огромную ценность.

Плазмиды – это внехромосомные ф-ры наследственности, генетические эл-ты, способствующие стабильно существовать кл-ке в автономном состоянии. Плазмиды, способные объединяться с хр-мой, называют эписомой. К плазмидам относят генетический аппарат клеточных органоидов (митохондрии, пластиды, а также группы сцепления не являющиеся жизненноважными для содержащих их кл-к).

Хорошо изучены F-плазмиды (фактор фертивности), бактериальные плазмиды и R-плазмиды (R-фактор). R-фактор – это фактор устойчивости к хим., лек. в-вам, н-р, антибиотикам, сульфамидным препаратам.Плазмиды часто придают содержащим их кл-кам новые св-ва, н-р, сообщают кл-м способность к передаче генов при конъюгации.

В цитоплазме бактерий содержатся рибосомы— белок-синтезирующие частицы диаметром 200А. В клетке их насчитывается больше тысячи. Состоят рибосомы из РНК и белка. У бактерий многие рибосомы расположены в цитоплазме свободно, некоторые из них могут быть связаны с мембранами.Рибосомыявляются центрами синтеза белка в клетке. При этом они часто соединяются между собой, образуя агрегаты, называемые полирибосомами или полисомами.В цитоплазме клеток бактерий часто содержатся гранулы различной формы и размеров. Однако их присутствие нельзя рассматривать как какой-то постоянный признак микроорганизма, обычно оно в значительной степени связано с физическими и химическими условиями среды. Многие цитоплазматические включения состоят из соединений, которые служат источником энергии и углерода. Эти запасные вещества образуются, когда организм снабжается достаточным количеством питательных веществ, и, наоборот, используются, когда организм попадает в условия, менее благоприятные в отношении питания.У многих бактерий гранулы состоят из крахмала или других полисахаридов — гликогена и гранулезы. У некоторых бактерий при выращивании на богатой сахарами среде внутри клетки встречаются капельки жира. Другим широко распространенным типом гранулярных включений является волютин (метахроматиновые гранулы). Эти гранулы состоят из полиметафосфата (запасное вещество, включающее остатки фосфорной кислоты). Полиметафосфат служит источником фосфатных групп и энергии для организма. Бактерии чаще накапливают волютин в необычных условиях питания, например на среде, не содержащей серы. В цитоплазме некоторых серных бактерий находятся капельки серы. Помимо различных структурных компонентов, цитоплазма состоит из жидкой части — растворимой фракции. В ней содержатся белки, различные ферменты, т-РНК, некоторые пигменты и низкомолекулярные соединения — сахара, аминокислоты.В результате наличияв цитоплазме низкомолекулярных соединений возникает разность в осмотическом давлении клеточного содержимого и наружной среды, причем у разных микроорганизмов это давление может быть различным. Наибольшее осмотическое давление отмечено у грамположительных бактерий — 30 атм, у грамотрицательных бактерий оно гораздо ниже — 4—8 атм. У многих бактерий обнаружены включения запасных веществ - полисахаридов, поли-р-гидроксибутирата, полифосфатов, серы и др. В цитоплазме присутствуют также рибосомы (от 5 до 50 тыс.). У некоторых бактерий (например, у многих цианобактерий) имеются карбоксисомы - тельца, в которые заключён фермент, участвующий в фиксации СО2. В т.н. параспоральных тельцах некоторых спорообразующих бактерий содержится токсин, убивающий личинок насекомых.


Поделиться с друзьями:

Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ - конструкции, предназначен­ные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой...

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций...

Кормораздатчик мобильный электрифицированный: схема и процесс работы устройства...

Таксономические единицы (категории) растений: Каждая система классификации состоит из определённых соподчиненных друг другу...



© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!

0.014 с.