Навигация:

Главная Случайная страница Обратная связь ТОП Интересно знать Избранные Новые материалы

Топ:

История развития методов оптимизации: теорема Куна-Таккера, метод Лагранжа, роль выпуклости в оптимизации...

Характеристика АТП и сварочно-жестяницкого участка: Транспорт в настоящее время является одной из важнейших отраслей народного...

Проблема типологии научных революций: Глобальные научные революции и типы научной рациональности...

Интересное:

Средства для ингаляционного наркоза: Наркоз наступает в результате вдыхания (ингаляции) средств, которое осуществляют или с помощью маски...

Берегоукрепление оползневых склонов: На прибрежных склонах основной причиной развития оползневых процессов является подмыв водами рек естественных склонов...

Инженерная защита территорий, зданий и сооружений от опасных геологических процессов: Изучение оползневых явлений, оценка устойчивости склонов и проектирование противооползневых сооружений — актуальнейшие задачи, стоящие перед отечественными...

Дисциплины:

Автоматизация Антропология Археология Архитектура Аудит Биология Бухгалтерия Военная наука Генетика География Геология Демография Журналистика Зоология Иностранные языки Информатика Искусство История Кинематография Компьютеризация Кораблестроение Кулинария Культура Лексикология Лингвистика Литература Логика Маркетинг Математика Машиностроение Медицина Менеджмент Металлургия Метрология Механика Музыкология Науковедение Образование Охрана Труда Педагогика Политология Правоотношение Предпринимательство Приборостроение Программирование Производство Промышленность Психология Радиосвязь Религия Риторика Социология Спорт Стандартизация Статистика Строительство Теология Технологии Торговля Транспорт Фармакология Физика Физиология Философия Финансы Химия Хозяйство Черчение Экология Экономика Электроника Энергетика Юриспруденция

Лабораторная диагностика спирохетозов

2017-10-09

521

0.00 из 5.00 0 оценок

Заказать работу

Стр 1 из 3Следующая ⇒

Занятие № 2.2.3

Спирохетозы. Лабораторная диагностика сифилиса, лептоспироза, боррелиозов

Цель: изучить биологические свойства спирохет и принципы лабораторной диагностики спирохетозов. Классифицировать препараты для идентификации, лечения и профилактики спирохетозов.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Возбудитель сифилиса. Таксономия, биологические свойства. Лабораторная диагностика.

2. Возбудитель лептоспироза. Таксономия, биологические свойства. Лабораторная диагностика.

3. Возбудители боррелиозов. Таксономия, биологические свойства. Лабораторная диагностика.

4. Патогенез, иммунитет сифилиса, лептоспироза, боррелиозов.

5. Методы специфической профилактики и терапии.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

дифференцировать возбудителей спирохетозов по морфологическим признакам;

· интерпретировать результаты серологических реакций по определению антител в

сыворотке больных спирохетозом;

классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ: алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей сифилиса, лептоспироза и боррелиозов.

Работа № 1.Клинические проявления сифилиса

Цель: ознакомиться с клиническими проявлениями первичного и вторичного сифилиса (учебный видеофильм «Сифилис»).

Самостоятельная работа: установить связь между клиникой заболевания, патогенезом, материалом для исследования и целенаправленностью микробиологических исследований. Сделать вывод.

Стадии	Клиника	Исследуемый материал
Первичный
Вторичный
Третичный

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА СПИРОХЕТОЗОВ

БАКТЕРИОСКОПИЯ

Работа № 2. Морфологические и тинкториальные свойства возбудителей сифилиса, боррелиоза, лептоспироза

Цель: изучить морфологические и тинкториальные свойствавозбудителей сифилиса, боррелиоза, лептоспироза.

Самостоятельная работа: микроскопировать готовые препараты - мазки. Зарисовать. Сделать вывод.

Treponema pallidum

__________________________________________________________

Borrelia reccurentis

___________________________________________________________

Leptospira interrhogans

___________________________________________________________

СЕРОДИАГНОСТИКА

Работа № 3. Экспресс-диагностика сифилиса

Методические указания

При массовом обследовании населения используют экспресс-метод обследования на сифилис. Этот метод дает значимый процент ошибки, поэтому все положительные результаты подтверждаются другими серологическими реакциями (р. Вассермана, осадочные реакции).

Цель: изучить экспресс-метод обследования на сифилис

Самостоятельная работа: поставить и учесть результат экспресс-метода серологического обследования на сифилис.

Сыворотки обследуемых
Ингредиенты
1. Инактивированная сыворотка больного	З к	З к	З к	З к	З к
2. Эмульсия кардиолипинового антигена	1 к	1 к	1 к	1 к	1 к
Ингредиенты перемешать (или встряхнуть, если реакция в планшете)
3. Физиологический раствор	1 к	1 к	1 к	1 к	1 к
После выпадения хлопьев, учесть результат

Примечание: для демонстрации дается эталон учета результатов.

Положительная реакция (крупные хлопья)	Слабоположительная (хлопья средней величины и мелкие)	Отрицательная (нет хлопьев)
++++ +++	++ +	-

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Работа № 4.Серологическая диагностика сифилиса

Цель: изучить современные серологические методы диагностики спирохетозов

Методические указания

а) Реакция Вассермана. Реакцию ставят по принципу реакции связывания комплемента. Отличием является то, что при постановке реакции Вассермана может быть использован неспецифический антиген - липидная вытяжка бычьего сердца. Возможность использования такого антигена объясняется тем, что в сыворотке крови больного повышается содержание глобулинов и изменяется степень их дисперсности. Глобулины, вступая в соединение с липидньми экстрактами, образуют комплекс, который связывает комплемент, и поэтому гемолиз не происходит (в гемолитической системе). Отсутствие гемолиза - положительная реакция - серологически подтверждает диагноз "сифилис". При постановке серологических реакций можно использовать специфические антигены из тканевых трепонем и культуральные.

Самостоятельная работа: учесть результат готовой реакции Вассермана, поставленной с целью выявления антител в сыворотке крови больного с подозрением на сифилис. Сделать вывод.

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Механизм:

Постановка:

Аг1 Аг2 Аг3 КС КА КГС

Результат:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

б) Реакция иммобилизации спирохет

Методические указания

К тканевым живым трепонемам прибавляют исследуемую сыворотку больного с подозрением на сифилис. Через несколько минут трепонемы теряют способность двигаться. Методика постановки реакции: все пробирки выдерживают в анаэростате при 35⁰С 20 часов, готовят препарат "раздавленная капля" и микроскопируют в темном поле зрения. Процент иммобилизованных трепонем определяют по формуле:

х= Тк - То х 100, где

Т_к

Тк - число подвижных трепонем в контроле (с инактивированным комплементом)

То - число подвижных трепонем в опыте

Учесть результат опыта при: Тк=30, То=12

Результат: положительный - процент иммобилизации выше 50, отрицательный - ниже 20, слабо положительный, сомнительный - 30-50, 20-30.

Самостоятельная работа: учесть результат реакции иммобилизации трепонем (РИТ) с целью выявления специфических антител в сыворотке крови больного сифилисом. Сделать вывод.

Ингредиенты	Пробирки
	"К"	"К"	"О"
Сыворотка здорового	+	-	-
Сыворотка больного	-	+	+
Физ. р-р	+	-	-
Комплемент инактивированный	-	+	-
Комплемент	-	-	+
Живые тканевые трепонемы	+	+	+

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 6. Принципиальная схема лабораторной диагностики сифилиса

Самостоятельная работа: разобрать особенности лабораторной диагностикисифилиса. Отметить наиболее информативные методы лабораторной диагностики.

Исследуемый материал:

____________________

____________________

____________________

Работа № 7.Серологическая диагностика лептоспироза

Задача. В клинику поступил больной с лихорадочным заболеванием на 8-й день болезни. Местность, где проживал больной, неблагополучна по лептоспирозу. У больного была дважды взята кровь - в момент поступления и через неделю - и направлена на исследование для определения специфических антител с диагностикумом L. interrogans в реакции связывания комплемента.

Самостоятельная работа: учесть готовый результат РСК с парными сыворотками обследуемого с подозрением на лептоспироз. Ответить на вопросы:

1) подтвержден ли диагноз лептоспироза?

2) обосновать диагностическую значимость проведенного исследования.

1-й ряд

(8-й день

заболевания)

2-й ряд

(15-й день

заболевания)

1/1001/200 1/400 1/800 1/1600 КС КА КГС

Результат: ___________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод: ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 8.Серологическая диагностика Лайм-боррелиоза

Задача. В клинику обратился пациент, который 2 недели назад снял с себя клеща. К врачу не обращался. Через неделю после присасывания клеща образовалась кожная эритема. Предварительный диагноз: «клещевой иксодовый боррелиоз». Для подтверждения диагноза была поставлена нРИФ с сывороткой обследуемого и диагностикумом

из боррелий (B.burgdorferi).

Самостоятельная работа: разобрать принцип постановки нРИФ и учесть результат реакции на обнаружение антител в сыворотке пациента с подозрением на Лайм-боррелиоз. Сделать вывод.

Механизм:

Результат: _____________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Вывод: _______________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Подпись преподавателя ________________________________________________________

Самостоятельная работа студента во внеурочное время:

1. Классифицировать предложенные антимикробные препараты в соответствии с их назначением (профилактические, диагностические, лечебные).

1.Вакцина лептоспирозная инактивированная жидкая

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

1.Лептоспирозная агглютинирующая сыворотка

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6.____________________________________________________________________________

ЛЕПТОСПИРОЗ

Таксономия возбудителя:

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид________________________________________________________________________

Морфологические и тинкториальные свойства ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культуральные и биохимические свойства ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Резистентность _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции_____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период_______________________________________________________________________

Основные факторы патогенности ________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Клинические симптомы_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Иммунитет___________________________________________________________________

Основные направления лабораторной диагностики _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты) _______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции_____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период_______________________________________________________________________

Основные факторы патогенности ________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Иммунитет___________________________________________________________________

Лечение (препараты) _______________________________________________________________________________________________________________________________________________

КЛЕЩЕВОЙ ЛАЙМ-БОРРЕЛИОЗ

Таксономия возбудителя:

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции_____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота _______________________________________________________________

Инкубационный период_______________________________________________________________________

Основные факторы патогенности ________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Иммунитет___________________________________________________________________

Лечение (препараты) _______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Подпись преподавателя _________________________________________________________

Теоретическая справка

Принципиальные схемы лабораторной диагностики спирохетозов

К работе № 6

s qN30nWZSVTwkFt1Qwn4amyRqPI5it0n/HrOC5ege3Xsm2422FVfT+8YxwnSiQBgunW64Qig+357W IHwg1tQ6Ngg342GX399llGo38Ie5HkMlYgn7lBDqELpUSl/WxpKfuM5wzL5dbynEs6+k7mmI5baV iVJLaanhuFBTZ55rU56PF4sQgt5Pb8Wr9e9f4+FlqFW5oALx8WHcb0EEM4Y/GH71ozrk0enkLqy9 aBFmy80mogjz1QpEBNZKzUGcEJLZIgGZZ/L/C/kPAAAA//8DAFBLAQItABQABgAIAAAAIQC2gziS /gAAAOEBAAATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAABbQ29udGVudF9UeXBlc10ueG1sUEsBAi0AFAAGAAgA AAAhADj9If/WAAAAlAEAAAsAAAAAAAAAAAAAAAAALwEAAF9yZWxzLy5yZWxzUEsBAi0AFAAGAAgA AAAhADkkvyyJAgAAWQUAAA4AAAAAAAAAAAAAAAAALgIAAGRycy9lMm9Eb2MueG1sUEsBAi0AFAAG AAgAAAAhAMOlxKLfAAAACgEAAA8AAAAAAAAAAAAAAAAA4wQAAGRycy9kb3ducmV2LnhtbFBLBQYA AAAABAAEAPMAAADvBQAAAAA= " filled="f" stroked="f">

Исследуемый материал: содержимое твердого шанкра, кожных высыпаний во все периоды заболевания, сыворотка крови, секционный материал пораженных органов, СМЖ.

Схема лабораторной диагностики сифилиса

Бактериоскопия 1. Окраска по Романовскому-Гимзе 2. Окраска по Бурри 3. Серебрение по Морозову 4. Темнопольная микроскопия (метод висячей и раздавленной капли)

Биопроба Заражение кролика материалом от больного, если есть заболевание - картина ранних орхитов

Серодиагностика 1. Экспресс-метод с кровью из пальца для отбора подозрительных лиц 2. Реакция Вассермана (РСК) 3. Осадочные реакции (Реакции Кана и Закса-Витебского) 4. Реакция ИБТ 5. Непрямая РИФ 6. Непрямой ИФА 7. РПГА 8. Иммуноблоттинг для обнаружения Ig M и Ig G

ПЦРдля выявления ДНК бледных трепонем

Бактериология

К работе № 7

Диагностика лептоспироза

Исследование проводят в лаборатории особо опасных инфекционных болезней. Диагноз лептоспироза подтверждают следующими методами:

♦ бактериоскопический (экспресс-метод). В первые дни больным проводят микроскопию крови в темном поле, а с 6-7-го дня и микроскопию мочи.

♦ серологический (основной метод). Очень чувствительная реакция микроагглютинации (РМА) с парными сыворотками крови, взятыми на 1-й неделе болезни и через 7-10 дней.

Диагностическое значение имеет нарастание титра антител к лептоспирам в 4 раза и более. Иногда антитела появляются даже через 1 месяц и позже. Для РМА берут 3-4 мл крови из вены. Весьма перспективны иммуноферментный и радиоиммунный методы;

♦ с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) можно обнаружить лептоспиры с первых дней болезни, даже если их количество ничтожно;

♦ бактериологический (дополнительный метод). Высевают кровь, мочу, спинномозговую жидкость на специальные среды (Уленгута, Терских и другие). Однако лептоспиры растут долго – в течение 30 суток, а частота выделения их невелика;

♦ биологический (дополнительный метод). Гвинейским свинкам или молодым золотистым хомякам вводят внутрибрюшинно или наносят на скарифицированную рану кровь больного, мочу или ликвор, при наличии лептоспир заболевание развивается примерно через неделю (желтуха, кровотечение).

Наиболее распространенный метод исследования – реакция микроагглютинации-лизиса с живыми антигенами. Может быть использована РСК, а также реакция макроагглютинации с убитым антигеном. Агглютинины, лизины и комплементсвязывающие антитела появляются в крови на 3-5-й день болезни и максимально накапливаются на 8-10-й день, титр сыворотки в этих случаях равен1:10000-1:50000.

К работе № 8

Диагностика Лайм-боррелиоза

Ранняя диагностика основывается на клинико-эпидемиологических данных. При классической картине мигрирующей эритемы диагноз ставится по клиническим признакам, диагноз регистрируют даже при отсутствии лабораторного подтверждения и данных об укусе клеща. В остальных случаях диагноз подтверждают лабораторными методами. Посев, выявление антигена возбудителя и гистологическое исследование кожи недостаточно чувствительны и специфичны, гистологическое исследование, кроме того,инвазивно. Поэтому диагноз подтверждают, в основном, серологическими методами - выявлением в крови специфических антител к возбудителю. ПЦР-тестирование на наличие генетического материала возбудителя в данном случае малоэффективно.

Антитела к Borrelia burgdorferi класса IgM выявляются через 1 - 3 недели после инфицирования. Максимальное количество IgG-антител синтезируется через 1,5 - 3 месяца после инфицирования. Антитела класса IgG часто не выявляются на ранней, локализованной стадии заболевания или при рано назначенной антимикробной терапии. Антитела класса IgG циркулируют в крови длительный срок (от нескольких месяцев до нескольких лет), даже после успешной антимикробной терапии и излечения инфекции. Иммунитет против боррелий не является стерильным. У переболевших людей возможно повторное заражение через несколько лет. Ложноположительные результаты определения антител класса IgG к боррелиям могут быть обусловлены присутствием в крови специфических антител при заболеваниях, вызываемых спирохетами (сифилис, возвратный тиф); низкий уровень антител IgG возможен при инфекционном мононуклеозе, гепатите B, ревматических болезнях (СКВ), заболеваниях периодонта, у 5 – 15 % здоровых лиц из эпидемической зоны.

Положительный результат исследования свидетельствует о текущей или перенесенной в прошлом инфекции. Это может иногда приводить к неверной оценке результатов исследования, если клиническая картина заболевания нетипична.

Отрицательный результат исследования может быть при отсутствии инфицирования, при проведении исследования в ранние сроки заболевания или в отдалённые сроки после перенесенной инфекции. Нужно помнить, что отсутствие антител не исключает раннюю инфекцию, но действительно исключает хронический боррелиоз.

В принципе, на основании только серологических исследований нельзя определить необходимость назначения лечения и нельзя оценить эффективность терапии. Эти проблемы должны решаться индивидуально с учётом клинических данных.

Для лабораторной диагностики используют серологическое исследование крови в непрямой реакции иммунофлюоресценции (нРИФ) с антигеном из боррелий. Положительной реакцией считают нарастание титра антител через З нед от начала заболевания в 2 раза. При отсутствии нарастания титра антител в динамике диагностическим является титр 1: 40. На поздних сроках заболевания положительная нРИФ в титре 1: 40 и выше, вероятно, свидетельствует о хроническом или латентном течении болезни Лайма. Для выявления антител классов IgM и IgG используется ИФА. Среди перспективных методов диагностики боррелиоза - вестернблот и ПЦР.

Занятие № 2.2.3

Спирохетозы. Лабораторная диагностика сифилиса, лептоспироза, боррелиозов

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Возбудитель сифилиса. Таксономия, биологические свойства. Лабораторная диагностика.

2. Возбудитель лептоспироза. Таксономия, биологические свойства. Лабораторная диагностика.

3. Возбудители боррелиозов. Таксономия, биологические свойства. Лабораторная диагностика.

4. Патогенез, иммунитет сифилиса, лептоспироза, боррелиозов.

5. Методы специфической профилактики и терапии.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

дифференцировать возбудителей спирохетозов по морфологическим признакам;

· интерпретировать результаты серологических реакций по определению антител в

сыворотке больных спирохетозом;

классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ: алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

Работа № 1.Клинические проявления сифилиса

Стадии	Клиника	Исследуемый материал
Первичный
Вторичный
Третичный

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА СПИРОХЕТОЗОВ

БАКТЕРИОСКОПИЯ

Работа № 2. Морфологические и тинкториальные свойства возбудителей сифилиса, боррелиоза, лептоспироза

Treponema pallidum

__________________________________________________________

Borrelia reccurentis

___________________________________________________________

Leptospira interrhogans

___________________________________________________________

СЕРОДИАГНОСТИКА

12 3 Следующая ⇒

Поделиться с друзьями:

Археология об основании Рима: Новые раскопки проясняют и такой острый дискуссионный вопрос, как дата самого возникновения Рима...

Автоматическое растормаживание колес: Тормозные устройства колес предназначены для уменьшения длины пробега и улучшения маневрирования ВС при...

Историки об Елизавете Петровне: Елизавета попала между двумя встречными культурными течениями, воспитывалась среди новых европейских веяний и преданий...

Эмиссия газов от очистных сооружений канализации: В последние годы внимание мирового сообщества сосредоточено на экологических проблемах...