Реакция торможения гемагглютинации вирусов:назначение,ингредиенты,постановка,учет рез-тов.

Основана на способности АТ связывать различ. вирусы и нейтрализовать их, лишая возможности агглютинировать эритроциты.

РТГА применяют:для серотипирования вирусов и серодиагностики инфекций.

Ингредиенты:

1. Исслед. материал — аллантоисная жидкость куриного эмбриона,

2. Диагностич. противогриппозные типоспецифич. сыв-ки,

3. 5 % взвесь куриных эритроцитов.

4. Физ. раствор.

Постановка:

а)Капельный способ на стекле (ориентировочная реакция), примен. для серо копирования вирусов;

1)На стекло наносят по 1 капле диагностич.сыв-к и исслед. материала, перемешивают.

2)Добавляют 1 каплю взвеси эритроцитов.

Рез-т: При «+» р-ции наблюд. гомогенное покраснение.

При «-» выпадение хлопьев красного цвета (гемагглютинация).

б)Развернутый в пробирках или лунках(устан. окончат. типов. принадлеж. вируса)

1)Готовят двухкратные разведения сыв-ток на физ. р-ре и разливают по 0,25 мл.

2)К разведениям сыв-ки прибавляют по одной капле материала, содерж. вирус и по одной капле 1% взвеси эритроцитов=>инкубир.в теч. 30 мин.

Рез-т: Агглютинация клеток в лунках с высоким разведением свидет. о том, что содерж. в сыв-ке данного разведения а/т не могут нейтрализ. агглютинирующей активности вируса.

При низких разведениях сыв-ки эритроциты образ.плотный осадок на дне лунки;

Радиоиммунный анализ: назначение, ингредиенты, постановка, учет результатов

Радиоиммунный анализ (РИА) – метод, основ-й на р-ции а/г – а/т с прим-ем а/г или а/т, меченных радионуклидом.

Назначение:

1) выявл-я а/г м/о, вирусов

2) гормонов, ферментов, лек.вещ-в

Постановка:

Имеются меченные а/т, к кот-м добавл-т немеч-й а/г => образ-ся ИК. Затем добавл-т мечен-й а/г => образ-ся комплексы с оставшимися мечен-ми а/т.

Рез-т: расход мечен-го а/г будет тем меньше, чем больше мечен-го а/т связалось с немеч-м а/г.

Иммуноферментный анализ:назначение,ингредиенты,постановка,учет рез-тов.

Основан на выявл. а/г с помощью соответ. им а/т, конъюгированных с ферментом-меткой.

Исп. для диаг-ки вирусных, бакт. и паразит.болезней, ВИЧ-инфекций, гепатитов.

Ингредиенты:

1) исследуемый материал сыворотка или плазма крови;

2) антитела к HbsAg.

3) коньюгат — мышиные моноклониальные антитела к HbsAg, меченые пероксидазой,

4) ортофенилендиамин (ОФД) -субстрат;

5) фосфатно-солевой буфер;

6) контрольные сыворотки:

Постановка:

Прямая твердофазная ИФА:

1)Сыв-ку икубир.(37С,1ч) с а/г фиксир. на твердом субстрате(пластик. микропланшетка)

2)А/т, не связавшие а/г,удаляют многократ. промыванием.

3)Вносят меч. ферментом антисыворотку к а/т,связавшим а/г=>инкубируют(37С,1ч)

4)Опред-ют кол-во фермента-маркера,связавшегося с а/т

5)Затем ставят цветную реакцию с использ. ОФД=> желтое окрашивание.

Рез-т: учет ИФА – по оптич. плотности с помощью фотометра, при этом степень оптич. плотности будет обратно пропорциональна концентрации а/г вируса.

Реакция иммунного блоттинга: назначение, ингредиенты, постановка, учет результатов.

Иммуноблоттинг — метод выявл-я белков, основ-й на сочетании электрофореза и ИФА.

Назначение: диагностич. метод при ВИЧ-инфекции.

Постановка: с помощью электрофореза а/г раздел-ся на а/г пептиды. Их обрабат-т а/т, кот.мечены ферментом. Добавл-т хромогенный субстрат.

Рез-т: при «+» р-ции – измен-е окраски из-за расщепл-я хромогенного субстрата ферментом.