Характеристика бактериальных препаратов

Бактериальный препарат	Бактерии, как действующее начало	Способ применения	Механизм действия на растение	Под какие с/х растения применяется
Азотобактерин
Нитрагин (Ризоторфин)

Вопросы к коллоквиуму по теме:

«Превращение микроорганизмами азотсодержащих

соединений»:

1. Назовите основные стадии круговорота азота в природе.

2. Почему превращения микроорганизмами соединений азота имеют большое значение в природе и сельском хозяйстве?

3. Какая из стадий имеет ключевое значение для сохранения жизни на Земле, обеспечивая непрерывность цепей питания?

4. Назовите возбудителей и конечные продукты аммонификации в аэробных и анаэробных условиях.

5. Особенности аммонификации мочевины.

6. В чём заключается процесс нитрификации? Из каких фаз он состоит?

7. С какой целью применяют ингибиторы нитрификации?

8. Чем отличается гетеротрофная нитрификация?

9. Какой процесс приводит к образованию недоступных для растений форм азота?

10. Какое значение имеет соотношение С:N для процесса иммобилизации азота?

11. Почему денитрификацию называют анаэробным нитратным дыханием?

12. Особенности возбудителей денитрификации.

13. Каковы размеры потерь азота в результате денитрификации?

14. Какие агротехнические приемы следует применять для предотвращения денитрификации в почве и навозе?

15. Вклад биологической фиксации молекулярного азота в баланс азота в почве.

16. Почему возбудителей азотфиксации называют также и диазотрофами?

17. На какие группы подразделяют возбудителей азотфиксации?

18. Характеристика ферментной системы процесса азотфиксации.

19. Каковы затраты энергии при осуществлении азотфиксации?

20. Особенности и распространение свободноживущих азотфиксаторов.

21. Сравните вклад в баланс азота в почве анаэробными и аэробными азотфиксаторами.

22. Опишите характерные виды свободноживущих диазотрофов для различных типов почв.

23. Особенности фиксации атмосферного азота цианобактериями.

24. Назовите основные отличия ассоциативной азотфиксации.

25. Вклад ассоциативных азотфиксаторов в азотный баланс почв.

26. Отличия симбиотической азотфиксации от других видов этого процесса.

27. Морфологические и физиологические свойства клубеньковых бактерий.

28. Опишите процесс взаимодействия клубеньковых бактерий с растением-хозяином.

29. В какой форме клубеньковые бактерии фиксируют азот?

30. Роль леггемоглобина для фиксации азота бактероидами.

31. Перечислите и уточните свойства клубеньковых бактерий для успешного формирования азотфиксирующего симбиоза.

32. Значение бобово-ризобиального симбиоза для азотного баланса почв.

33. Охарактеризуйте микроорганизмы, разлагающие белковые вещества в аэробных и анаэробных условиях.

34. Каковы оптимальные условия разложения мочевины микроорганизмами?

35. Назовите фамилию учёного, открывшего энергетический процесс, названный хемосинтезом.

36. В чём заключается процесс нитрификации? Из каких двух фаз он состоит?

37. Каковы отличительные особенности ассимиляционного и диссимиляционного процессов восстановления нитратов?

38. Размеры потерь молекулярного азота из почв в результате процесса нитрификации.

39. Назовите наиболее распространённые свободноживущие азотфиксирующие бактерии.

40. Чем отличаются свободноживущие азотфиксирующие бактерии от ассоциативных азотфиксаторов?

41. Симбиотические азотфиксаторы и их роль в накоплении азота в почве.

42. Как называется препарат, основанный на использовании симбиотических клубеньковых бактерий?

 

 

Раздел 8. Взаимоотношения в биотических
сообществах.

Изучение взаимодействия вирусов (на примере колифагов)

и бактерий

Теория вопроса:

 

Значение показателя и область применения. Колифаги-бактериальные вирусы (бактериофаги), способные лизировать кишечную палочку и формировать зоны лизиса (бляшки) через 18+2 часа при температуре 37+1 ⁰С на ее «газоне», выращенном на питательном агаре (МПА). Колифаги являются нормируемым показателем и предназначены для проведения текущего контроля качества воды поверхностных водоемов, служащих источником для питьевого и хозяйственно-бытового водоснабжения, пищевых предприятий, для рекреационного водопользования, в черте населенных мест в отношении ее возможного вирусного загрязнения.

Подготовка тест – культуры E.coli штамма 3254. На всех этапах исследования используют бактериальную суспензию, приготовленную следующим образом: культуру E.coli штамм 3254 засевают в пробирку со скошенным питательным агаром (МПА). Через 18±2 часов инкубации при температуре 37±1^о С производят смыв бактерий с агара 5-ю мл стерильного физиологического раствора и по стандарту мутности готовят суспензию E.coli в концентрации 10⁹ бактериальных клеток в 1 мл. суспензии.

Постановка опыта. Студенты работают группами по 3-4 человека. Каждая бригада имеет набор стерильной посуду (чашки Петри, пипетки), стерильную водопроводную воду в колбах (не менее 300 мл), стерильные пустые пробирки и стерильная питательная среда - МПА в колбе. Посев бактериофагов проводится из различных поверхностных водоисточников.

Объем воды взятой для посева может быть разным (от 100 до 300 мл)в зависимости от степени ее загрязнения с таким расчетом, чтобы на чашках выросло до 300 бляшек, без образования сливных зон. При посеве на чашку Петри 1 мл или соответствующих десятикратных разбавлений используют питательный агар в обычной прописи. При посеве 100 мл исследуемой воды используют питательный агар двойной концентрации В зависимости от плотности используемого агара, проводят посевы воды по 10 мл на 10 чашек или по 20мл на 5 чашек.

Для освобождения исследуемой воды от сопутствующего загрязнения микроорганизмами, ее обрабатывают хлороформом из расчета 1 мл хлороформа на 10 мл воды. Пробу с хлороформом тщательно встряхивают и отстаивают в течение 15 минут при комнатной температуре для осаждения хлороформа. На исследование берут воду над хлороформом.

В расплавленный питательный агар, с температурой 44 + 1°С, добавляют смыв (для получения смыва в пробирку с культурой E.coli 3254 вносят 5 мл стерильной воды или физиологический раствор) из расчета 1,0 мл смыва на каждые 100 мл агара и перемешивают. Для проверки культуры E.coli на возможную контаминацию ее колифагом в чашку Петри вносят 10 мл стерильной водопроводной воды и добавляют 25 мл питательной среды, содержащей суспезию культуры E.coli 3254, после чего осторожно перемешивают. Эта чашка считается контрольной.

Исследуемые объемы воды вносят в стерильные чашки Петри и заливают 25 мл смеси агара с кишечной палочкой. Содержимое чашек осторожно перемешивают и оставляют при комнатной температуре до застывания. Чашки с застывшим агаром переворачивают вверх дном, чтобы избежать попадания на его поверхность конденсационной влаги с крышки и помещают в термостат на 18±2 часов при температуре 37±1^оС.

Учет результатов. Просмотр результатов посевов осуществляют в проходящем свете. При исследовании 100 мл воды (10 чашек по 10 мл или 5 чашек по 20 мл) подсчитывают и суммируют на всех чашках Петри образовавшиеся зоны лизиса культуры E. coli 3254 т.н. «бляшки». Если количество исследуемой воды было меньше 100 мл, то число колифагов вычисляют по формуле:

А х 100, где

Х = V

а - сумма бляшек на чашках,

V - объем исследуемой воды.

При посеве десятикратных разведений исследуемой воды, число колифагов в 100 мл воды вычисляют по формуле:

а х р₁ + а х р₂ + а х р₃

Х = 3х100, где

 

а - сумма бляшек на чашке,

р _1,2,3 – номер разведения.

3 – количество повторностей разведений (в данном примере их 3 - р_1, р_2, р₃).

В контрольной чашке бляшки должны отсутствовать. Предварительный учет результатов можно проводить через 5—6 часов инкубации. На этом этапе при наличии четких зон лизиса может быть сделано предварительное заключение о присутствии колифагов в воде.

Окончательный количественный учет проводят через 18 ± 2 часов. Результаты выражают в БОЕ на 100 мл воды.

Если отмечен сливной рост бляшек и счет затруднителен, то по данным проведенного анализа может быть выдан качественный результат: «обнаружено в 100 мл воды».

При наличии зон лизиса в контрольной чашке результат исследования считается недействительным.

Определение колифагов титрационным методом.

Теория вопроса.

Цель работы - установить титр бактериофага в воде.

Студенты работают бригадами по 3-4 человека. Каждая бригада имеет набор стерильной посуды (чашки Петри, пипетки), стерильную водопроводную воду в колбах и пробирках, стерильный МПА в колбе и выдается по 10 мл воды содержащей определенное количество колифага.

Постановка опыта. К 10 мл исходной пробы воды внести 1 мл хлороформа, тщательно встряхнуть и отстаивать в течение 15 минут в термостате при температуре 25°С для осаждения хлороформа. В расплавленный и остуженный до 44 + 1°С питательный агар, добавляют смыв E. coli 3254 из расчета 1,0 мл смыва на каждые 100 мл агара, перемешивают. Для контроля культуры E. coli на возможную контаминацию ее колифагом в одну чашку Петри вносят 10 мл стерильной водопроводной воды, заливают 25 мл приготовленного агара с взвесью E. coli 3254 и осторожно перемешивают. Приготовить разведения пробы воды от 10^-1 до 10^-9, далее по 1 мл каждого разведения вносят в чашки Петри и заливают смесью МПА с E. сoli (начиная с контрольной чашки). И термостатируют при 37º С в течение 18-24 часов.

Учет результатов. Количество фага учитывают подсчетом зон просветления на газоне чувствительной бактериальной культуры

 

 

Методы исследования взаимоотношений в биотическом сообществе

Теория вопроса.

 

 

Цель: ознакомиться с методами исследования взаимоотношений в биотическом сообществе

Задача: исследовать взаимоотношения в различных биотических сообществах.