Колориметрическое определение глюкозы в моче на ФЭКе

 

Принцип метода:

Метод основан на цветной реакции, получаемой при нагревании раствора глюкозы со щелочью. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию глюкозы в моче.

Реактивы: 10% раствор едкого натра, дист. вода.

 

Ход определения:

Ø К 2 мл мочи в пробирке добавить 1 мл 10% р-р едкого натра

Ø Выдержать 5 минут на кипящей водяной бане. При наличии глюкозы в моче образуется окрашивание (от жёлтого до бурого).

Ø Добавить 4 мл дист. воды

Ø ФЭК: кювета 10 мм, зеленый светофильтр, контроль дист. вода

Ø Расчет по калибровочному графику

 

Можно приготовить цветную шкалу в пробирках (стандарты). Готовят следующие растворы глюкозы: 0,5; 1; 1,5; 2; 3 и 4% и обрабатывают их так же, как исследуемую мочу.

БИОМЕДИЦИНСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ: Фотоэлектроколориметрический метод анализа относится к методам определения концентрации вещества в окрашенном растворе по интенсивности окраски. Метод широко применяется в медицине для определения концентраций окрашенных веществ в биологических жидкостях и тканях. Он может быть использован для измерения концентраций и неокрашенных веществ, если эти вещества могут быть переведены в окрашенное состояние с помощью подходящего реагента.

 

Самостоятельная работа с исследовательским этапом

Методические установки:

ü прочитать и законспектировать методы определения глюкозы в моче в рабочих тетрадях;

ü затем получить у преподавателя образцы биологического материала;

ü провести самостоятельную исследовательскую работу пользуясь методическим материалом;

ü полученные результаты исследования оформить согласно требованиям заполнения бланков анализа.

Задание №1. Качественное определение глюкозы в моче методом Гайнеса-Акимова	Примечание:Моча должна быть прозрачной и не содержать белок.
Посуда, оборудование и реактивы:	· химические пробирки · штативы для пробирок · градуированные пипетки · пастеровские пипетки · резиновые груши · реактив Гайнеса · водяная баня
Ход исследования:	Ø В пробирку наливают 3-4 мл реактива Гайнеса и добавляют 8-12 капель мочи. Ø Нагревают на водяной бане 1 минуту.
Интерпретация полученных результатов:	При наличии глюкозы в моче цвет синего реактива меняется от зеленого, желтого до кирпично- красного и появляется осадок
Задание №2. Качественное определение глюкозы в моче с тест полосками (полуколичественное).	Примечание: Полоски хранят при температуре от +8 до +18 °С, избегая попадания на них прямых солнечных лучей; не рекомендуется дотрагиваться рукой до цветной шкалы полоски. ВНИМАНИЕ! При наличии на посуде для сбора мочи остатков моющих средств (плохо вымытая и отмытая посуда) существует большая вероятность возникновения ложноположительных или ложноотрицательных результатов исследования.
Посуда, оборудование, реактивы	· тест-полоски для определения глюкозы
Ход определения:	Мочу перемешивают. Тест-полоску погружают в исследуемую мочу так, чтобы полоса с реактивами оказалась смоченной, после этого ее немедленно извлекают из мочи и на 2 мин оставляют на пластмассовой пластинке.
Интерпретация полученных результатов:	По истечении 2 мин сразу же сравнивают изменившуюся окраску цветной полосы на бумаге со шкалой, имеющейся в комплекте
Задание №3. Запишите полученные данные анализа мочи на глюкозу в рабочих тетрадях	Проба мочи № ___ Показатели Результат Количество доставленной мочи на анализ Диагностического значения не имеет Цвет мочи Различные оттенки жёлтого цвета Прозрачность мочи Прозрачная Запах мочи Специфический Реакция мочи или рН Слабо-кислая Удельный вес (относительная плотность) мочи 1,026 Белок в моче «+» или отсутствует Глюкоза в моче «+» или отсутствует
Задание №4. Количественное определение глюкозы в моче на ФЭКе	Примечание:Моча должна быть прозрачной и не содержать белок, т.к. белок является оптически активным веществом и коагулирует по действием реактивов и нагревания.
Посуда, оборудование, реактивы	· химические пробирки · штативы для пробирок · градуированные пипетки на 1 мл · резиновые груши · 10% раствор едкого натра · дистиллированная вода · водяная баня · песочные часы на 5 минут · ФЭК (фотоэлектроколориметр) · кювета 10 мм
Ход определения:	К 2 мл мочи в пробирке добавить 1 мл 10% р-р едкого натра. Выдержать 5 минут на кипящей водяной бане. Добавить 4 мл дист. воды Измерить на фотоэлектроколориметре (зеленый светофильтр) против контроля в кювете длиной оптического пути 10 мм. Контролем дист. водой. Из 40% раствора глюкозы (можно использовать ампулы глюкозы для инъекций) приготовить 20 мл 4% раствора (в качестве разводящей жидкости использовать мочу, не содержащую глюкозу). Из 4% раствора приготовить разведения: 4%, 3%, 2%, 1,5%, 1%, 0,5% по схеме:
Концентрация 4% 3% 2% 1,5% 1,0% 0,5% Объем 4%р-ра в мл 4,0 3,0 2,0 1,5 1,0 0,5 Объем разводящей жидкости (мочи) мл - 1,0 2,0 2,5 3,0 3,5
Интерпретация полученных результатов:	Расчет ведут по калибровочному графику, учитывая показания экстинции (оптическая плотность).
Задание №5. Запишите полученные данные анализа мочи на глюкозу в рабочих тетрадях	Проба мочи № ___ Показатели Результат Количество доставленной мочи на анализ диагностического значения не имеет Цвет мочи водянистая Прозрачность мочи прозрачная Запах мочи специфический Реакция мочи или рН Кислая Удельный вес (относительная плотность) мочи 1,035 Белок в моче 0,25г\л Глюкоза в моче 0,5%

В нормальной моче глюкоза содержится в минимальных количествах, которые не обнаруживаются обычными методами, применяемыми в лаборатории.

Глюкозы в моче в норме НЕТ.

 

 

Контрольные вопросы и задания

А. Ответьте на поставленные вопросы, используя рабочую тетрадь

1. Раскройте понятие «глюкозурия».

2. Назовите классификацию глюкозурий.

3. Назовите причины развития алиментарной глюкозурии.

4. Назовите причины развития эмоциональной глюкозурии.

5. Перечислите патологические глюкозурии и причины их развития.

6. При какой концентрации глюкозы в крови она начинает фильтроваться в мочу?

7. Какой вид глюкозурии можно предположить при следующих лабораторных показателях: уровень глюкозы в крови – 5,0 ммоль/л; реакция на сахар в моче положительная?

8. Расскажите методику обнаружения глюкозы в моче реакцией Гайнеса – Акимова.

9. Принцип метода Гайнеса- Акимова, реактивы, особенности их приготовления.

10. Как сделать цветную шкалу Альтгаузина.

11. Сбор мочи больного сахарным диабетом на анализ.

12. Что может повлиять на анализ глюкозы в моче?

13. Как приготовит 4% раствор глюкозы 10 мл?

14. Почему белок в моче мешает определению глюкозы на ФЭКе?

15. Почему моча больного сахарным диабетом водянистого цвета.

 

Б.Запишите в рабочей тетради термины и дайте им обозначение, используя изученный материал

№	Термин	Обозначение
	Глюкозурия
	Гликемия	Наличие глюкозы в крови
	Гипергликемия
	Сахарный диабет	Заболевание, обусловленное абсолютной или относительной недостаточностью инсулина и характеризующееся нарушением обмена углеводов с повышением количества глюкозы в крови и моче, а также другими нарушениями обмена веществ
	Инсулин
	Глюкурез
	Полиурия
	Панкреатит	Воспаление поджелудочной железы
	Суточный диурез
	Почечный диабет	Заболевание, для которого характерно повышенное содержание глюкозы в моче при нормальном уровне сахара в крови. Данная аномалия связана с дисфункцией транспорта глюкозы в канальцевой системе почек

Домашнее задание:

1. Знать теоретический и практический материал.

2. Отвечать на контрольные вопросы.

3. Знать термины.

4. Подготовить лекционный материал:

- теория мочеобразования;

- причины и виды глюкозурий.

Литература для самостоятельной подготовки:

Основная:

Камышников В.С. Методы клинических лабораторных исследований М: МЕДпресс-информ, 2011. Стр. 37-41, 57-63

Дополнительная:

Кишкун А.А. Клиническая лабораторная диагностика. – М.: ГЭОТАР – Медиа, 2008.