Макроскопические диагностические признаки

Цветки у фиалки трехцветной одиночные, зигоморфные, на длинных (3—13 см) цветоножках, с двумя прицветниками. Венчик длиннее чашечки.

Чашелистиков 5, они линейные или ланцетовидные в основании с овальными или ромбическими, обращенными вниз придатками. Венчик из пяти неравных лепестков, у основания опушенных тонкими изогнутыми волосками. Два верхних лепестка большей частью сине-фиолетовые, реже бледно-фиолетовые, два боковых—сине-фиолетовые или желтые с одним-тремя темными нектарными полосками; нижний лепесток крупнее других, у основания всегда желтый, с пятью-семью темными полосками, по краю фиолетовый, часто бледный с синеватым шпорцем. Тычинок 5, почти сидячих, плотно прилегающих пыльниками к пестику [8].

У фиалки полевой верхний лепесток обычно белый, реже светло-фиолетовый, а остальные желтые, венчик равен по длине чашечке или меньше ее [2,3].

Микроскопия

При рассмотрении листа с поверхности у обоих видов фиалки видны клетки эпидермиса, с нижней стороны более извилистые, чем с верхней; устьица располагаются с обеих сто­рон и окружены 3—4 клетками эпидермиса (аномоцитный тип)[рис4].Простые волоски нежнобородавчатые, с толстыми стенками и за­остренным концом [рис.3], располагаются преимущественно на жилках и по краю листа. Железистые волоски[рис5] с многоклеточной головкой на широкой многоклеточной ножке, встречаются только по краю листа с углублениями между зубцами и на концах зубцов. В мезо­филле листа видны многочисленные крупные друзы оксалата каль­ция.

Клетки эпидермиса лепестков имеют сосочковидные выросты. На эпидермисе средних и нижних лепестков (у основания) распо­лагаются длинные одноклеточные тупоконечные волоски с тонкими стенкам[рис.6]. На эпидермисе нижнего лепестка при входе в шпорец видны извилистые длинные одноклеточные бугорчатые волоски [рис.7]. В паренхиме нижней части лепестков встречаются друзы оксалата кальция.[3,6].

рис.3 рис.4 рис.5

 

 

рис.6 рис.7

 

КАЧЕСТВЕННЫЕ ХИМИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ

Основной группой БАВ являются флавоноиды.

Для обнаружения флавоноидов в ЛРС используют химические реакции и хроматографию. Химические реакции подразделяются на цветные и реакции осаждения.

 

Цветные реакции

1. Специфической реакцией на флавоноиды является цианидиновая проба (проба Шинода), основанная на восстановлении карбонильной группы атомарным водородом в кислой среде в присутствии металлического магния и образовании антоцианидинов. Продукты восстановления флавонов имеют окраску оранжевую, флавонолов, флаванонов - красно-фиолетовую. При использовании цинка положительную реакцию дают флавонолы и флавонол-3-гликозиды, а флаваноны не дают её. Цианидиновую реакцию не дают также изофлавоны, неофлавоноиды, халконы и ауроны. Халконы и ауроны образуют красное окрашивание при добавлении концентрированной хлористоводородной кислоты за счет образования оксониевых солей.

 

2. Реакция со щелочами (аммиаком) - флавоноиды дают различную окраску от желтой до коричневой; халконы и ауроны со щелочами дают красное окрашивание или ярко-желтое; антоцианидины - синее окрашивание.

3. Флавоноиды, благодаря карбонильным и фенольным оксигруппам, способны образовывать комплексы с солями металлов:

• с хлоридом окисного железа (III) флавоноиды образуют комплексы, окрашенные в различные цвета в зависимости от структуры (от зеленого до коричневого цвета);

• борно-лимонная реакция -

5-оксифлавоны и 5-оксифлавонолы взаимодействуют с борной кислотой в присутствии лимонной (или щавелевой), образуя комплекс ярко-желтого окрашивания с желто-зеленой флуоресценцией в УФ-свете.

Если флавонол или флавон не содержит гидроксил в 5 положении, то реакция протекает за счет гидроксила 3 положения;

 

• реакция с треххлористой сурьмой -

5-оксифлавоны и 5-оксифлавонолы, взаимодействуя с треххлористой сурьмой, образуют комплексные соединения, окрашенные в желтый или красный цвет;

он

 

• многие флавоноиды дают окрашенные комплексы желтого цвета с 5% спиртовым раствором алюминия хлорида, с 2% спиртовым раствором циркония хлорида. Флавоноиды, имеющие две оксигруппы у С3 и С5, дают хелаты жёлтого цвета за счёт образования водородных связей между карбонильной и гидроксильной группами.

4. Флавоноиды со свободной 7-оксигруппой вступают в реакцию с солями диазония, образуя оранжевые или красные продукты азосочетания.

II. Реакции осаждения

Все флавоноиды с основным ацетатом свинца образуют осадки, окрашенные в ярко-желтый или красный цвет.

Средним ацетатом свинца осаждаются лишь флавоноиды, содержащие свободные орто-гидроксильные группы в 3', 4' -положениях кольца В.

III. Хроматография

Для обнаружения флавоноидов в растительном материале широко используется бумажная и тонкослойная хроматография. Обнаружение флавоноидов на хроматограммах проводят:

• по окраске пятен в видимом свете (антоцианы);

• по характеру свечения в УФ-свете: флавоны, флавонол-3-О-гликозиды, флаваноны и халконы обнаруживаются в виде темно-коричневых пятен, флавонолы и их 7-О-гликозиды - в виде желтых или желто-зеленых;

по характеру свечения в УФ-свете после проявления 5%~ ным спиртовым раствором хлорида алюминия и последующего прогревания хроматограммы при 105°С 2-3 мин: наблюдают пятна флавоноидов с интенсивной желтой и желто-зеленой флуоресценцией [7].

 

ДОБРОКАЧЕСТВЕННОСТЬ ЛРС

Доброкачественность-соответствие ЛРС требованиям НД. Доброкачественность ЛРС определяется количеством действующих веществ, чистотой сырья, естественной степенью измельчения (для цельного сырья), влажностью, содержанием золы.

Числовые показатели. Цельное сырье. Экстрактивных веществ, извлекаемых водой, не менее 30%; влажность не более 14%; золы общей не более 13%; золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты, не более 3 %; пожелтевших листьев и стеблей не более 7 %; других частей растения (плодов, створок плодов, корней, в том числе отделенных при анализе) не более 3 %; органической примеси не более 3 %; минеральной при­меси не более 1 %.

Измельченное сырье. Экстрактивных веществ, извле­каемых водой, не менее 30 %; влажность не более 14 %; золы об­щей не более 13 %; золы, нерастворимой в 10 % растворе хлористо­водородной кислоты, не более 3 %; пожелтевших кусочков листьев и стеблей не более 7 %;других частей растения (плодов, створок плодов, корней) не более 3 %; частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, не более 10 %; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, не более 10 %; органи­ческой примеси не более 3 %; минеральной примеси не более 1 % [3].

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЭКСТРАКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В ЛЕКАРСТВЕННОМ РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ

Определение экстрактивных веществ в сырье проводят в случае отсутствия в нормативно-технической документации метода количественного определения действующих веществ.

Около 1 г измельченного сырья (тонкая навеска), просеян­ного сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, помещают в коническую колбу вместимостью 200—250 мл, прибавляют 50 мл воды, колбу закрывают пробкой, взвешивают (с погреш­ностью ±0,01 г) и оставляют на 1 ч. Затем колбу соединяют с обратным холодильником, нагревают, поддерживая слабое кипение в течение 2 ч. После охлаждения колбу с содержимым вновь закрывают той же пробкой, взвешивают и потерю в массе восполняют растворителем. Содержимое колбы тщатель­но взбалтывают и фильтруют через сухой бумажный фильтр в сухую колбу вместимостью 150—200 мл. 25 мл фильтрата пипет­кой переносят в предварительно высушенную при температуре 100—105°С до постоянной массы и точно взвешенную фарфо­ровую чашку диаметром 7—9 см и выпаривают на водяной бане досуха. Чашку с остатком сушат при температуре 100— 105°С до постоянной массы, затем охлаждают в течение 30 мин в эксикаторе, на дне которого находится безводный хлорид кальция, и немедленно взвешивают.

Содержание экстрактивных веществ в процентах (X) в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:

х₌ m*200*100

m₁(100— W) '

 

где m — масса сухого остатка в граммах; m₁ — масса сырья в граммах; W—потеря в массе при высушивании сырья в процентах[3].