Мероприятия по обеспечению качества получения АФИ или промежуточных продуктов из культуры клеток или путем ферментации

1. Поддержание в рабочем состоянии основного и рабочего банка клеток;

2. Использование качественных компонентов питательных сред, стерилизация сред;

3. Процесс предпочтительнее осуществлять в закрытых или изолированных системах. Все манипуляции с использованием открытых сосудов следует проводить в стерильных боксах или других устройствах, обеспечивающих контроль условий окружающей среды;

4. Непрерывный контроль критических рабочих параметров (температуры, рН, скорости перемешивания, скорости добавления газов, давление);

5. Биологический контроль роста (рост, продуктивность, жизнеспособность);

6. Идентификация посторонней микрофлоры и оценка ее влияния на качество продукции;

7. Обеспечение надлежащей процедуры сбора и очистки, при которых происходит удаление клеток или клеточных компонентов и других загрязнений, компонентов питательной среды с одновременной защитой АФИ от контаминации и потери качества;

8. Ведение протоколов процесса;

9. Очистка, санитарная обработка, стерилизация оборудования по окончании процесса.

Микробиологические лаборатории: объекты исследования, типы. Патогенные биологические агенты (ПБА), классификация. Нормативные документы Республики Беларусь, регулирующие правила работы с ПБА.

Работа в микробиологической лаборатории требует строгого соблюдения специальных правил, что определяется двумя основными положениями:

1. В микробиологической практике используют, главным образом, чистые культуры микроорганизмов, т. е. популяции микроорганизмов одного вида. Во избежание контаминации культур необходимо строгое соблюдение правил асептики.

2. При исследованиях с неидентифицированными микроорганизмами, при их выделении из объектов окружающей среды могут быть выделены патогенные и условно патогенные микроорганизмы. Кроме того, клетки как сапрофитных, так и патогенных микроорганизмов могут являться аллергенами для определенных индивидуумов.

Обеспечение личной безопасности, безопасности окружающих и окружающей среды приобретает особое значение.

Типы микробиологических лабораторий в зависимости от задач и выполняемых исследований:

1. Диагностические (клинико– диагностические и санитарно- эпидемиологические) лаборатории:

- проводят микробиологическую диагностику инфекционных заболеваний: выделение и идентификацию возбудителя, выявление иммунологических изменений у больного. На основании результатов лабораторных исследований составляется рациональная схема терапии.

- выполняют бактериологические, вирусологические, микологические, серологические исследования материала от здоровых людей, работающих в системе здравоохранения, торговли, общественного питания, образования, сельского хозяйства и пр.

3. Научно-исследовательские микробиологические лаборатории: изучение физиолого-биохимических и генетических особенностей микроорганизмов, механизмов и способов получения БАВ и т.д.

4. Производственная микробиологическая лаборатория (фармацевтического производства): осуществляет микробиологический контроль сырья, вспомогательных материалов, готовой продукции, санитарно-гигиенического состояния производственных помещений, технологического оборудования, инвентаря, тары, рук, одежды работающих, а также разработку и валидацию методик определения микробиологических показателей, работу с культурами-продуцентами БАВ и т.д.

5. Специализированные лаборатории, обеспечивающие безопасность персонала и невозможность «утечки» патогенных микроорганизмов за пределы лаборатории: работа с возбудителями особо опасных инфекций.

Санитарные правила СП 17 -129 РБ 2000 «БЕЗОПАСНОСТЬ РАБОТЫ С МИКРООРГАНИЗМАМИ III-IY ГРУПП ПАТОГЕННОСТИ И ГЕЛЬМИНТАМИ». Утверждены и введены в действие Постановлением Главного государственного санитарного врача Республики Беларусь от 27 июля 2000 года № 40.

Требования Правил обязательны для выполнения всеми предприятиями, учреждениями, организациями (лабора- ториями) на территории Республики Беларусь независимо от их ведомственной принадлежности и форм собственности, проводящими работы с патогенными биологическими агентами (ПБА) III – IV групп патогенности, а также для проектных, строительных и других организаций, занимающихся вопросами выбора земельных участков, проектирования, строительства и реконструкции лабораторий.

Требования Правил направлены на охрану здоровья персонала и обеспечение защиты окружающей среды при работе с ПБА III-IY групп патогенности.

Патогенные биологические агенты (ПБА) - патогенные для человека микроорганизмы (простейшие, грибы, бактерии, микоплазмы, риккетсии, хламидии, вирусы), модифицированные генно-инженерными методами микроорганизмы, яды биологического происхождения (токсины), гельминты, а также биологический материал (включая кровь, другие биологические жидкости и экскреты организма), подозрительные на содержание перечисленных агентов.

По степени опасности для человека и общества все ПБА отнесены к 4-м группам патогенности.

В качестве источника заболеваний человека и животных, вызываемых микроорганизмами I- IY групп, следует считать инфицированных:

человека, теплокровных животных, переносчиков, объекты внешней среды.

Наиболее опасные микроорганизмы отнесены в 1 и 2 группу патогенности. Для работы с ними требуются специальные условия и разрешения. Классификация патогенных для человека микроорганизмов (бактерий и грибов)

Требования к микробиологическим лабораториям для работы с патогенными биологическими агентами III-IV групп патогенности. Правила работы в микробиологической лаборатории. «Чистая» и «заразная» зоны. Микробиологический бокс: устройство, назначение, эксплуатация.

Требования к устройству микробиологических лабораторий для работы с ПБА III – IV групп патогенности:

Общие требования к организации лабораторий:

• Типовые проекты, а также проекты реконструкции и перепланировки зданий и помещений лаборатории подлежат обязательному согласованию с органами государственного санитарно-эпидемиологического надзора;

• Производственные лаборатории, должны располагаться в отдельно стоящих зданиях, не связанных с производственными помещениями, или изолированном блоке здания, имеющем отдельный вход. Не допускается их размещение в подвальных и цокольных этажах зданий;

• Диагностические лаборатории, должны иметь 2 входа: один - для сотрудников, другой - для доставки материала на исследование. Допускается получение материала через передаточное окно;

• В лабораториях научно-исследовательских учреждений, а также в производственных лабораториях, проводящих экспериментальные исследования, допускается наличие одного входа;

Требования к планировке, внутренней отделке и организации работы в микробиологической лаборатории

1. Работа с ПБА может проводиться только в лабораториях, имеющих разрешение, выданное в установленном порядке.

2. В составе микробиологической лаборатории обязательным должно быть наличие следующих основных и вспомогательных помещений:

• Для приема и регистрации проб,

• Для проведения исследований,

• Боксированные помещения,

• Моечная,

• Автоклавная для обеззараживания отработанного материала ("грязная автоклавная"),

• Автоклавная для стерилизации посуды и питательных сред ("чистая автоклавная"),

• Средоварочная с боксом для разлива питательных сред,

• Гардеробы для домашней и рабочей одежды персонала,

• Комната отдыха и приема пищи,

• Комната для работы с документацией и литературой,

• Кладовые для хранения питательных сред, химических реактивов, лабораторной посуды, контейнеров, уборочного инвентаря и др.

• Туалет.

3. Лаборатории и боксы должны быть обеспечены устройствами приточно-вытяжной вентиляции.

4. Движение «заразного» и «чистого» материалов должно быть разделено во времени.

5. Внутренняя отделка помещений лаборатории: поверхность пола, стен и потолка должна быть гладкой, без щелей, легко обрабатываемой, устойчивой к действию моющих и дезинфицирующих средств, полы не должны быть скользкими. Окна и двери должны быть герметичными.

6. В помещении моечной пол должен быть покрыт керамической плиткой; покрытие пола в помещениях автоклавных должно быть выполнено из электроизолирующего материала.

7. Покрытие потолка и стен выше 1,5 или 2 м от пола допускается силикатными красками; для отделки потолка может применяться покрытие масляными или водоэмульсионными красками. Не допускается в помещениях лабораторий применение подвесных потолков.

8. Лаборатория должна быть оснащена необходимым оборудованием и техникой: термостаты, автоклавы, сухожаровые шкафы, центрифуги, холодильники, измерительные приборы. Все оборудование и техника должны быть подписаны, аттестованы и проходить периодическую поверку для подтверждения их соответствия необходимым требованиям, иметь паспорта и инструкции по применению.

9. Лаборатория должна быть оснащена необходимой мебелью: шкафы, стеллажи, столы, оргтехника и др.

10. Лабораторное оборудование и мебель должны быть прочными, изготовленными из устойчивых к действию дезинфектантов материалов;

11. Помещения лабораторий должны быть непроницаемы для грызунов и насекомых;

12. Лаборатория должна быть обеспечена средствами пожаротушения.

13. Для создания асептических условий при проведении микробиологических исследований и других работ, а также предотвращения микробиологического загрязнения внешней среды в составе лаборатории предусматривается устройство боксированных помещений (боксов).

Боксированное помещение (бокс)- специальным образом устроенное помещение, состоящее из собственно бокса и предбокса, предназначенное для создания асептических условий при проведении исследований, а также для предотвращения микробного загрязнения внешней среды.

• Cтены, пол и потолок помещений бокса должны быть облицованы материалом, устойчивым к действию дезинфицирующих средств.

• Не должно быть недоступных для влажной дезинфекции поверхностей, исключено движение воздуха, создаваемое сквозняками, должны отсутствовать инженерные коммуникации.

• Допускается устройство в предбоксе раковины для мытья рук с подводкой горячей и холодной воды.

• Боксы должны быть оборудованы бактерицидными облучателями.

Эксплуатация бактерицидных облучателей должна осуществляться в рамках, указанных в паспорте и инструкции по их эксплуатации. Бактерицидное облучение проводится после влажной уборки; вход в помещение разрешается через 30 минут после отключения облучателя.

• Не разрешается устанавливать в помещении бокса лабораторное оборудование, кроме рабочего стола, бактерицидной лампы, необходимых инструментов для посева; в предбокснике допускается размещение термостатов для выращивания соответствующих данному боксу посевов;

"Чистая" зона - помещение или группа помещений лаборатории, где не про водятся манипуляции с ПБА.

"Заразная" зона - помещение или группа помещений лаборатории, где проводятся манипуляции с патогенными биологическими агентами и их хранение.

• Столы, на которых проводят работу с ПБА III- IY групп патогенности, должны быть покрыты пластиком или другим материалом, устойчивым к действию дезинфицирующих средств и фламбированию горящим спиртовым факелом, не должны иметь швов и трещин;

• Ежедневная уборка помещений лаборатории должна проводиться влажным способом с использованием водно-мыльных растворов в «чистой» и с применением дезинфицирующих растворов и моющих средств в «заразной» зоне.

• В помещениях боксов должна проводиться еженедельная генеральная уборка с применением дезинфицирующих средств путем протирания поверхности мебели, приборов, аппаратов, а также стен (на высоту до 2 метров). После влажной уборки помещения облучают бактерицидными лампами в течение 30-60 минут

Требования к режиму работы в микробиологической лаборатории:

• Работу с ПБА III-IY групп патогенности выполняют специалисты с высшим и средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку;

• Персонал допускается к работе с ПБА только после проведения инструктажа по соблюдению требований биологической безопасности; последующие инструктажи проводятся не реже 2 раз в год;

• Доставка в лабораторию материала для исследования осуществляется в специальных контейнерах, биксах или сумках-холодильниках; доставляемые емкости с жидким материалом должны быть закрыты резиновыми или пластмассовыми пробками, исключающими выливание содержимого во время транспортирования;

• Во время работы двери боксов и предбоксников должны быть закрыты; выход из бокса во время проведения работы запрещается;

• Все инструменты, имевшие контакт с ПБА III-IY групп патогенности, фламбируются в пламени горелки или сбрасываются в емкости с дезинфицирующим раствором или специальные емкости для последующего обеззараживания;

• Работы по обеззараживанию автоклавированием ПБА III-IY групп патогенности, стерилизации питательных сред и лабораторной посуды, производящиеся в одном помещении (автоклавной), должны быть разделены во времени;

• По окончанию работы все объекты, содержащие ПБА, должны быть убраны в хранилища (холодильники, термостаты, шкафы); в обязательном порядке производится дезинфекция рабочих поверхностей столов;

• Остатки ПБА III-IY групп патогенности, использованная посуда собираются в закрывающиеся емкости и передаются в автоклавную для уничтожения автоклавированием или путем погружения в дезинфицирующие растворы;

• По окончании рабочей смены следует обработать и вымыть руки, снять специальную одежду и снова вымыть руки; по окончании отдельных этапов исследования персонал обязан обработать руки 70-ти процентным раствором спирта и вымыть руки с мылом. Запрещается выходить из рабочих помещений в специальной одежде;

• Прием посетителей, хранение пищевых продуктов, прием пищи разрешается только в специально отведенных местах в "чистой" зоне лаборатории

Требования к порядку использования средств индивидуальной защиты (СИЗ):

• Сотрудники лабораторий должны быть обеспечены медицинскими халатами, комбинезонами, шапочками, сменной обувью и другими СИЗ в зависимости от характера выполняемых работ и в соответствии с действующими нормами;

• Рабочая одежда и обувь должны быть индивидуальными, соответствовать размерам работающих и храниться отдельно от личной одежды;

• При проведении исследований в боксированных помещениях производится смена медицинского халата в предбоксе

• Смена рабочей одежды должна проводиться по мере загрязнения, но не реже 1 раза в неделю;

• Перед сдачей в стирку защитная одежда должна быть обеззаражена

Режим обеззараживания различных объектов, зараженных или подозрительных на заражение микроорганизмами III-IY групп патогенности