Препаративная и аналитическая ТСХ

Аналитическая ТСХ является качественным методом анализа веществ. Необходимо помнить, что интенсивность цвета пятен далеко не всегда является даже приблизительной количественной характеристикой.Такая оценка возможна при использовании универсальных проявителей, тогдадетектирование производится визуально либо с помощью денситометра.

 

Препаративная ТСХ является методом выделения вещества или группы близких веществ из смеси. В этомслучае смесь наносится на старт в виде сплошной полосы. Далее отрезается край пластины (илизакрывается вся остальная часть) и производится проявление. Часть пластины, соответствущая целевомувеществу соскребается, вещество отделяется от адсорбента. Препаративную ТСХ следует использовать, еслив лаборатории нет высокоэффективного жидкостного хроматографа (ВЭЖХ).

Фотогалерея

Рахвитие процесса хроматогирования во времени:

 

 

 

ВЭЖХ, ГХ

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ, англ. HPLC, High performance liquid chromatography) — один из эффективных методов разделения сложных смесей веществ, широко применяемый как в аналитической химии, так и в химической технологии. Основой хроматографического разделения является участие компонентов разделяемой смеси в сложной системе Ван-дер- Ваальсовых взаимодействия (преимущественно межмолекулярных) на границе раздела фаз. Как способ анализа, ВЭЖХ входит в состав группы методов, которая, ввиду сложности исследуемых обьектов, включает предварительное разделение исходной сложной смеси на относительно простые. Полученные простые смеси анализируются затем обычным физико-химическими методами или специальными методами, созданными для хроматографии.

 

Принцип жидкостной хроматографии состоит в разделении компонентов смеси, основанном на различии в равновесном распределении их между двумя несмешивающимися фазами, одна из которых неподвижна, а другая подвижна.

 

Отличительной особенностью ВЭЖХ является использование высокого давления (до 400 бар) и мелкозернистых сорбентов (обычно 3 – 5 мкм, сейчас до 1,8 мкм). Это позволяет разделять сложные смеси веществ быстро и полно (среднее время анализа от 3 до 30 мин).

 

Метод ВЭЖХ находит широкое применение в таких областях, как химия, нефтехимия, биология, биотехнология, медицина, пищевая промышленность, охрана окружающей среды, производство лекарственных препаратов и во многих других.

 

По механизму разделения анализируемых или разделяемых веществ ВЭЖХ делится на адсорбционную, распределительную, ионообменную, эксклюзионнкю, лигандообменную и другие.

 

Следует иметь в виду, что в практической работе разделение часто протекает не по одному, а по нескольким механизмам одновременно. Так, эксклюзионное разделение бывает осложнено адсорционными эффектами, адсорбционное – распределительными, и наоборот. При этом чем больше различие веществ в пробе по степени ионизации, основности или кислотности, по молекулярной массе, поляризуемости и другим параметрам, тем больше вероятность проявления другого механизма разделения для таких веществ.

Нормально – фазовая ВЭЖХ

Неповижная фаза более полярна, чем подвижная, поэтому в составе элюента преобладает неполярный растворитель:

 

· Гексан: изопропанол = 95:5 (для малополярных веществ)

· Хлороформ: метанол = 95:5 (для среднеполярных веществ)

· Хлороформ: метанол = 80:20 (для сильнополярных веществ)

 

Обращенно – фазовая ВЭЖХ

Неподвижная фаза менее полярно, чем подвижная, поэтому в составе элюента почти всегда присуствует вода. В этом случае всегда можно обеспечить полное растворение БАС в подвижной фазе, почти всегда возможно использовать УФ – деткетирование, почти все подвижные йазы взаимно смешиваются, можно использовать градиентное элюирование, можно быстро переуравновесить колонку, колонку можно регенерировать.

 

Обычными элюентами для обращенно-фазовой ВЭЖХ являются:

· Ацетонитрил:вода

· Метанол:вода

· Изопропанол: вода

Прививки неподвижной фазы

Нормально – фазовая ВЭЖХ:

 

· Неподвижная фаза с пропилнитрильной прививки (нитрильной);

· Неподвижная фаза с пропиламинной прививкой (аминной).

Обращенно – фазовая ВЭЖХ:

 

· Неподвижная фаза с алкильной прививкой;

· Неподвижная фаза с алкилсилильной прививкой.

Энд – кэппирование – защита непривитых участков сорбента дополнительной прививкой «маленькими» молекулами. Гидрофобный энд – кэппинг (С1, С2): выше селективность, хуже смачиваемость; гидрофильный энд – кэппинг (диол): ниже селективность, выше смачивемость.

 

Детектор для ВЭЖХ

 

· Ультрафиолетовый

· Фотодиодно – матричный

· Флуориметрический

· Электрохимический

· Рефрактометрический

· Масс – селективный

Газовая хроматография

Газовая хроматография – разновидность хроматографии, метод разделение летучих компанентов, при котором подвижной фазой служит инертный газ (газ – носитель), протекающий через неподвижную фазу с большой поверхностью. В качестве подвижной фазы используют водород, гелий, азот, аргон, углекислый газ. Газ – носитель не реагирует с неподвижной фазой и разделяемыми веществами.

 

Различают газо – твердофазную и газо – жидкостную хроматографию. В первом случае неподвижной фазой является твердый носитель (силикагель, уголь, оксид алюминия), во втором – жидкость, нанесенная на поверхность инертного носителя.

 

Газо – жидкостная хроматография – разделение газовой смеси вследствие различной растворимости кампанентов пробы в жидкости или различной стабильности образующихся комплексов. Неподвижной фазой служит жидкость, нанесенная на инертный носитель, подвижной – газ.

 

Разделение основано на различиях в летучести и растворимости (или адсорбируемости) компонентов разделяемой смеси.