Тема: Определение содержания билирубина в сыворотке крови

Цель: Научиться определять содержание билирубина в сыворотке крови, изучить значение этого показателя для дифференциальной диагностики патологий (желтух).

Принцип метода:

Прямой (связанный, конъюгированный с глюкуроновой кислотой) билирубин непосредственно реагирует с диазотированной сульфаниловой кислотой, а общий билирубин – в присутствии кофеинового реагента с образованием окрашенного азосоединения. Интенсивность окраски реакционной среды пропорциональна концентрации билирубина и измеряется фотометрически при длине волны 535 (500-560) нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 мм.

Схема постановки опыта:

Подготовьте пробы следующего состава	Опытная проба		Контрольная проба	Калибровочная проба
	Общий билирубин	Прямой билирубин
Сыворотка, мл	0,2	0,2	0,2	-
Реагент №1, мл	1,4	-	-	1,4
Реагент №4, мл	0,2	1,6	1,8	0,2
Калибратор, мл	-	-	-	0,2
Диазореагент, мл	0,2	0,2	-	0,2

Пробы тщательно перемешайте.

Для определения прямого билирубина (точно!) через 5 минут (комнатная температура) измерьте величину оптической плотности опытной пробы против контрольной пробы при длине волны 535 нм (500-560).

Для определения общего билирубина через 20 мин (комнатная температура) измерьте величину оптической плотности опытной пробы против контрольной пробы при длине волны 535 нм (500-560).

Оптическую плотность калибратора измерьте против дистиллированной воды через 20 мин (комнатная температура) при длине волны 535 нм (500-560).

Расчёт концентрации билирубина в пробе (С) проведите по формуле:

       Е _пробы

C = -------------- х 85,5мкмоль/л,    где

       Е _{калибр.}

Е пробы – оптическая плотность опытной пробы,

Е калибр. – оптическая плотность калибровочной пробы,

85,5 – концентрация билирубина в калибраторе, мкмоль/л.

Нормальные значения:

Общий билирубин – 8.5-20.5 мкмоль/л

Прямой билирубин – до 4,0 мкмоль/л

Результат анализа:

Вывод:

Дата:                                                                               Подпись преподавателя:

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ 5

Контрольная работа 2. Обмен простых и сложных белков

Вопросы к контрольной работе по теме: Обмен простых белков

1. Почему нельзя заменить белки в питании жирами или углеводами? Какие аминокислоты являются незаменимыми?

2. Назовите основные факторы, необходимые для нормального переваривания белков. Перечислите ферменты, участвующие в переваривании белков, содержащиеся в желудочном, панкреатическом и кишечном соках.

3. В чем заключается биологическое значение выделения протеолитических ферментов в неактивной форме? Объясните механизм превращения:

а)  пепсиногена в пепсин,

б) трипсиногена в трипсин,

в) химотрипсиногена в химотрипсин.

4. Каков рН желудочного сока? Какова роль соляной кислоты в пищеварении? Какие биологически активные вещества влияют на секрецию соляной кислоты?

5. Перечислите виды кислотности желудочного сока и их нормальные величины.

6. Объясните понятия: гипоацидный гастрит, гиперацидный гастрит, анацидный гастрит, ахилия.

7. Что подразумевают под гниением белков в кишечнике? Где и как обезвреживаются ядовитые продукты, образующиеся в толстом кишечнике при распаде:

а)         триптофана,

б)        фенилаланина и тирозина.

8. Назовите основные типы дезаминирования аминокислот. Напишите окислительное дезаминирование глутаминовой кислоты.

9. Что понимают под непрямым окислительным дезаминированием аминокислот? Каково его биологическое значение? Напишите реакцию переаминирования между:

а)         аланином и a-кетоглутаровой кислотой,

б)        аспарагиновой кислотой и a-кетоглутаровой кислотой,

10.  Какова роль витамина В₆ в обмене аминокислот?

11. Напишите реакцию, катализируемую аланинаминотрансферазой (АЛТ). Каково клинико-диагностическое значение определения активности АЛТ в сыворотке крови?

12. Напишите реакцию, катализируемую аспартатаминотрансферазой (ACT).Каково клинико-диагностическое значение определения активности ACT в сыворотке крови?

13.  Какие вещества образуются в результате декарбоксилирования аминокислот? Какую роль они играют в организме? Напишите реакцию декарбоксилирования:

а)         глутаминовой кислоты,

б)        5-окситриптофана,

г)         гистидина.

14.  Какие биологически-активные вещества образуются на путях обмена фенилаланина и тирозина? Напишите их формулы.

15.  Что такое фенилкетонурия? Какова ее причина? К чему она может привести развивающийся организм?

16.  Что означают термины: «глюкогенные» и «кетогенные» аминокислоты? Покажите в виде схемы путь образования из глюкозы:

а)  аланина,

17. В каких двух формах существует аммиак в организме? Какая из этих форм наиболее токсична и почему?

18. Какие транспортные формы аммиака вам известны? Опишите процесс, в результате которого аммиак выводится:

а)    из активно работающей мышцы,

б)    из клеток мозга.

19. Назовите, какими путями и где происходит обезвреживание аммиака.

20. Сколько аммиака выводится из организма в виде аммонийных солей? Как и где они образуются?

21. Какова роль глутаминовой кислоты в обезвреживании аммиака?

22. Что понимают под восстановительным аминированием? Каково значение этого процесса в обмене веществ?

23. Напишите формулу мочевины. Где и в результате какого процесса она образуется? Какое количество мочевины выводится из организма за сутки?

24. Напишите в виде схемы орнитиновый цикл (без формул, используя только названия веществ и ферментов). Каково значение этого процесса для организма?

25. Почему мочевина синтезируется только в печени? Какую роль в этом процессе играет орнитин? Напишите заключительную стадию синтеза мочевины.

26. Что лежит в основе токсического действия аммиака на нервную клетку? Напишите механизм обезвреживания аммиака, имеющийся в нервных клетках.

27. Что понимают под остаточным азотом крови? Каково его количество в норме? Каково клиническое значение определения остаточного азота?

28.  При острых панкреатитах происходит самопереваривание поджелудочной железы. Чем это вызвано? Какие ферменты могут активироваться при острых панкреатитах?

29.  Для здоровых людей тирозин является заменимой аминокислотой, но при определенных генетических дефектах тирозин становится незаменимой аминокислотой, дети для нормального роста должны получать эту аминокислоту с пищей. Объясните, почему это происходит?

Обмен сложных белков

1. Что представляют собой нуклеопротеиды? Из чего построены нуклеиновые кислоты? Как соединены между собой мононуклеотиды в молекулах нуклеиновых кислот?

2. Назовите ферменты, участвующие в переваривании нуклеопротеидов. К какому классу они относятся? Какие продукты образуются при гидролизе и их дальнейшая судьба?

3. Напишите схему распада АМФ до мочевой кислоты.

4. Напишите схему распада ГМФ до мочевой кислоты.

5. Что такое подагра? Каковы ее причины и основные принципы лечения?

6. Перечислите вещества, относящиеся к хромопротеидам. Напишите химическую формулу гема.

7. Как построена молекула гемоглобина?

8. Что является источником железа для организма? Как происходит обмен железа в организме?

9. Из чего синтезируется гем?

10. Сколько времени живут эритроциты? Где они разрушаются? Где и как происходит распад гемоглобина?

11. Какие вещества называют желчными пигментами? Почему? В чем биологический смысл образования билирубин-глюкуронидов и билирубин-сульфатов?

12. Напишите схему образования «непрямого» билирубина. Почему он так называется?

13. Напишите схему образования прямого билирубина. Каковы свойства прямого билирубина?

14. Что происходит с билирубином в кишечнике? Перечислите последовательно образующиеся здесь из билирубина продукты.

15. Какое вещество, происходящее из гема, выделяется с нормальной мочой? Откуда и как оно попадает в мочу?

16. Сколько билирубина содержится в крови в норме? При какой патологии возникает гипербилирубинемия?

17. Перечислите основные симптомы обтурационной желтухи. В чем ее причина?

18. Перечислите основные симптомы паренхиматозной желтухи. В чем ее причина?

19. При какой патологии в моче отсутствует стеркобилиноген и почему?

20. При какой патологии в моче появляется уробилиноген и почему?

21. Что называют порфириями? Какие существуют их типы? Каковы их причины, чем они характеризуются?

22. Что происходит с освобождающимся при распаде эритроцитов железом?

23. Что понимают под термином «физиологическая желтуха новорожденных»?

УЭМ 6 РЕГУЛЯЦИЯ ПРОЦЕССОВ

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ 6