Правила забора биологического материала для микробиологического исследования. Общие правила получения биологического материала

Правила забора биологического материала для микробиологического исследования. Общие правила получения биологического материала

Биологический материал целесообразно получать до начала антимикробной терапии или если это невозможно – перед непосредственным введением антимикробного препарата. Материал для бактериологического исследования берут непосредственно из очага инфекции или исследуют клинически значимый биологический материал. Необходимо соблюдать асептику, избегая контаминации биологического материала нормальной микрофлорой. Количество материала должно быть достаточным для корректного проведения всех необходимых тестов. Собирают материал в стерильную посуду с пробками, полученную микробиологической лаборатории: для взятия отделяемого из раны, мазков слизистых оболочек, из глаза, уха, носа, зева, цервикального канала, влагалища, анального отверстия следует использовать стерильные ватные тампоны, для крови, гноя, спинномозговой жидкости и экссудатов используют стерильные шприцы и специализированные транспортные среды, для мокроты, мочи и кала стерильные плотно закрывающиеся небьющиеся контейнеры.

Внимание: необходимо следить за сроками годности посуды, полученной лаборатории. Если посуда, стерилизуемая в лаборатории, не использована срок, указанный на этикетках её необходимо вернуть в лабораторию для повторной стерилизации.

Нативный материал доставляют в лабораторию в максимально короткие сроки (для большинства образцов не позднее 1,5-2 ч после их получения). Допускается хранение материала в холодильнике при 4° С (это не относится биологическому материалу, полученному из стерильных в норме локусов: ликвору, крови, внутрисуставной и плевральной жидкости!). При использовании транспортных сред биологический материал можно хранить в течение 24 ч. Жидкий биологический материал можно транспортировать непосредственно в шприце, на кончик которого надет стерильный колпачок или загнутая под углом игла. Для исследования на анаэробы биологический материал необходимо помещать в анаэробные условия. Для жидких образцов (кровь, гной, экссудат, жидкости из стерильных полостей) используют специальные флаконы с жидкой питательной средой, заполненные газовой смесью определенного состава, куда из шприца уколом иглы через резиновую плотно завальцованную крышку вносят материал. Можно использовать анаэробные коммерческие тампоны с транспортной средой.

ü Транспортировка осуществляется в металлических биксах (пеналах), термоконтейнерах, которые должны легко подвергаться обработке. Пробы рекомендуется пересылать в герметично закрытом контейнере, помещенном в соответствующем отделе пластикового мешка (сумки), также защищенного от проливания жидкостей.

ü К материалу прилагают сопроводительный документ, где указывают наименование, источник и метод получения биологического материала, дату и время его взятия; ФИО, пол и возраст больного; название учреждения, отделения, № палаты; предполагаемый диагноз инфекционной патологии и предшествующую антибактериальную терапию; фамилию и подпись врача, направившего материал для проведения бактериологического исследования.

Внимание: погрешности в правилах сбора материала для микробиологического исследования приводят к ошибкам в диагностике возбудителя и определении его антибиотикочувствительности.

Исследование крови

Для взятия крови используют одноразовые шприцы или системы. Кровь берут во время подъёма температуры из периферической вены. Забор крови проводится с соблюдением правил асептики и мер индивидуальной защиты персонала, предусмотренных при работе с кровью. Обязательное использовать стерильные одноразовые перчатки. Кровь забирают и засевают сразу после взятия в питательные среды в процедурном кабинете. При необходимости допускается взятие и посев крови у постели больного. Перед использованием флаконов визуально определяют прозрачность среды, любое помутнение свидетельствует об их непригодности. При подозрениина анаэробную инфекцию необходимо одномоментно

собирать кровь в два флакона – с питательными средами для аэробного и анаэробного культивирования. Не следует брать кровь из сосудистых катетеров, кроме случаев, когда предполагается инфекция катетерного происхождения.

Забор и посев крови

Пальпировать вену следует перед обработкой места венепункции. Для предотвращения контаминации кожу пациента над пунктируемой веной тщательно обработать в следующей последовательности:

ü очистить 70% этиловым спиртом (или заменяющим его антисептиком)

ü протереть тампоном, смоченным 5% настойкой йода (или йодопирона, йодоната, хлоргексидина) круговыми движениями в направлении от центра будущего прокола к периферии

ü дают высохнуть обработанному участку кожи

ü не пальпируя повторно вену произвести взятие крови

ü после венепункции удалить остатки йода 70% этиловым спиртом (или заменяющим его антисептиком).

ü При аллергической реакции на йод кожу дважды обрабатывают 70% этиловым спиртом (или заменяющим его антисептиком).

Использование сред, приготовленных в лаборатории:

Среды в стеклянных флаконах, закрытые стерильными ватно-марлевыми пробками и предохранительными стерильными бумажными колпачками:

· «двухфазная среда» (комбинация плотной и жидкой среды в одном флаконе) – для роста аэробных микроорганизмов

· полужидкие специальные среды - для роста анаэробных микроорганизмов

Посев осуществляют во флаконы со средами над пламенем спиртовой горелки. Взятие и посев крови осуществляют два человека – в то время как один обрабатывает кожу пациента, пунктирует вену и берёт кровь, другой – над пламенем спиртовки открывает пробки флаконов, подставляет флаконы со средой под струю крови из шприца или системы, обжигает горлышки и пробки флаконов и закрывает их. Рекомендуемое соотношение объёмов крови и среды 1:10 (не менее 10-20 мл у взрослых, 1-20 мл у детей в зависимости от веса пациента).

Использование коммерческих сред (BacT/ALERT, BioMerieux):

o для аэробных микроорганизмов (с зелёной крышкой)

o для анаэробных микроорганизмов (с красной крышкой)

o педиатрические флаконы – (с жёлтой крышкой) для исследования крови в объёме до 5 мл

Снимают предохранительную пластиковую крышку.

Продезинфицировать резиновую пробку флакона 70% этиловым спиртом или заменяющим его антисептиком) и выдержать 1 минуту.

Дают просохнуть обработанной поверхности.

Прокалывают пробку флакона иглой шприца и производят посев крови.

Объём исследуемой крови по прилагаемой инструкции - обычно 10-30 мл для взрослых и 1- 5 мл для детей до 12 л (метка на этикетке флакона позволяет оценить объём взятой крови).

Сначала производят посев в «анаэробный» флакон, затем – в «аэробный» во избежание попадания воздуха из шприца.

Перемешивают осторожно круговыми движениями содержимое флакона.

Маркируют флаконы и до транспортировки в лабораторию содержат в термостате или при комнатной температуре в защищённом от света месте не в холодильнике!!)

При отсутствии в отделении флаконов для гемокультур.

В исключительных случаях, при экстренной ситуации допускается использование 20-миллилитрового шприца с иглами.

В шприц предварительно набирают 0,5-0,7 мл стерильного гепарина.

Заменяют иглу.

Затем пунктируют вену, соблюдая правила асептики. Набирают 10-15- мл крови.

Перемешивают осторожным покачиванием с гепарином (иглу со шприца не снимают).

В этом же шприце с согнутой у основания иглой (или надетым стерильным колпачком) немедленно отправляют в лабораторию.

Исследование ликвора

Спинномозговую жидкость получают при люмбальной пункции или пунции боковых желудочков мозга в объеме 3 -5 мл, помещают в стерильную, желательно центрифужную пробирку и немедленно доставляют в лабораторию. Полученную пробу доставить в лабораторию, избегая чрезмерного перегрева и особенно охлаждения (может быть использован термос). Охлаждение ликвора ниже 300 ведёт к гибели менингококков. При невозможности немедленно доставить в лабораторию ликвор сохраняют при 370 в термостате. При использовании коммерческих сред ( BacT/ALERT FA и др.) свежевзятый ликвор в количестве 5-10 мл из шприца, проколов резиновую пробку, вносится во флакон со средой (см. исследование крови).

Отделяемое из дренажей.

Берут стерильным шприцем и в количестве 1-2 мл помещают в стерильную пробирку или доставляют в шприце. Можно использовать для исследования концы удалённых дренажных трубок.

Кусочки тканей.

Помещают в другую плотно закрывающуюся стерильную ёмкость (пробирку), содержащую небольшое количество стерильного физ. раствора.

Раны после укусов.

Гнойное содержимое из раны получают шприцем после надреза, дренирования или поверхностной обработки инфицированной раны. При свежих укусах бактериологическое исследование не проводят, так как в этот период трудно выделить этиологически значимый микроорганизм.

Кости.

Материал получают при оперативном вмешательстве. Образец помещают в стерильный контейнер без формалина и других консервантов. Для предотвращения высыхания образца в контейнер может быть добавлен стерильный физ.раствор.

Отделяемое с конъюнктивы.

Берут стеклянными стерильными палочками или платиновой петлей, предварительно фламбированной в пламени спиртовки и остуженной и погружают в 0,2 % сахарный бульон. При наличии достаточно обильного гнойного отделяемого использую стерильные ватные тампоны (желательно коммерческие), которыми берут

гной с внутренней поверхности нижнего века движением к внутреннему углу глазной щели. Необходимо следить, чтобы при моргании ресницы не касались тампона (придерживать веки руками).

Край век.

Корочки гноя удаляют пинцетом. Берут материал из язвочки у основания ресниц.

Роговица.

Материал на исследование после обезболивания, можно взять платиновой петлёй или другим подходящим инструментом. Если пациент применяет контактные линзы, необходимо исследовать их внутреннюю поверхность. В кабинете врача производят посев на питательный бульон. Пробы клинического материала доставить в лабораторию не замочив пробки, чтобы не исказить результат исследования.

Мокрота.

Исследуют свободно откашливаемую мокроту, утреннюю порцию,натощак Пациент предварительно должен почистить зубы, дёсны, язык, слизистую оболочку щёк зубной щёткой и прополоскать рот кипяченой водой. Если мокрота отделяется плохо, накануне пациенту дают отхаркивающие средства или проводят ингаляцию физ. раствором. Мокроту собирают в стерильную посуду с крышкой. Сроки доставки мокроты в лабораторию не должны превышать 1,5-2 часа от момента её получения (допускается хранение в холодильнике, но не более 6 часов), т.к. задержка ведёт к аутолизу S.pneumoniae, а за счёт размножения бактерий-контаминантов меняется истинное соотношение микрофлоры бронхиального секрета.

Трахеобронхиальные смывы.

Исследуют при отсутствии мокроты или невозможности её выделить естественным путём. Специальным шприцем в трахею вводят около 10 мл стерильного физ.раствора и собирают откашливаемый смыв в стерильную посуду. Бронхиальные смывы, в том числе вблизи очага воспаления, могут быть сделаны с помощью бронхоскопа. Недостатком является очень часто значительное разведение трахеобронхиального содержимого, что снижает возможность выделения бактерий, а концентрация их падает примерно в 100 раз по сравнению с мокротой.

Плевральная жидкость.

Кожу перед пункцией обрабатывают 70% этиловым спиртом, затем спиртовой настойкой йода, затем опять спиртом. После прокола жидкость собирают шприцем в стерильную пробирку и незамедлительно отправляют в лабораторию. Допускается посев плевральной жидкости (по 5 мл) в аэробные и анаэробные флаконы, используемые для исследования крови.

Амниотическаю жидкость

Собирают через катетер, либо аспирируют при кесаревом сечении, либо пунктируют плодный пузырь.

Материал из уретры

Собирают не ранее, чем через 1 ч после мочеиспускания. Отделяемое из уретры собирают стерильным ватным тампоном. Если отделяемое получить не удается, наружное отверстие уретры обмывают мылом и ополаскивают кипяченой водой, вводят в уретру тонкий стерильный «уретральный» тампон на глубину 2-4 см, аккуратно вращают его в течение 2 сек., вынимают, помещают в соответствующую транспортную среду и доставляют в лабораторию.

Цервикальный канал.

Обнажают шейку матки с помощью зеркал и влагалищную ее часть тщательно обрабатывают ватным тампоном, смоченным стерильным физраствором или стерильной водой. Тонкий стерильный ватный тампон осторожно вводят в цервикальный канал, не касаясь стенок влагалища, и берут материал. Для бактериологического исследования можно использовать соскоб слизистой, полученный при диагностическом выскабливании стенок цервикального канала.

Матка.

Правильное взятие материала из матки может быть выполнено только при использовании специальных инструментов типа шприца-аспиратора., имеющего на зонде покрытие. После прохождения зондом цервикального канала в полость матки раскрывают наружную оболочку зонда и набирают в шприц содержимое матки. Материал из шприца помещают в стерильную пробирку.

Придатки матки.

Материал из очага инфекции (гной, экссудат, кусочки ткани) получают при оперативном вмешательстве или при диагностической пункции опухолевидных образований, проводимой через влагалищные своды.

Правила забора биологического материала для микробиологического исследования. Общие правила получения биологического материала

Биологический материал целесообразно получать до начала антимикробной терапии или если это невозможно – перед непосредственным введением антимикробного препарата. Материал для бактериологического исследования берут непосредственно из очага инфекции или исследуют клинически значимый биологический материал. Необходимо соблюдать асептику, избегая контаминации биологического материала нормальной микрофлорой. Количество материала должно быть достаточным для корректного проведения всех необходимых тестов. Собирают материал в стерильную посуду с пробками, полученную микробиологической лаборатории: для взятия отделяемого из раны, мазков слизистых оболочек, из глаза, уха, носа, зева, цервикального канала, влагалища, анального отверстия следует использовать стерильные ватные тампоны, для крови, гноя, спинномозговой жидкости и экссудатов используют стерильные шприцы и специализированные транспортные среды, для мокроты, мочи и кала стерильные плотно закрывающиеся небьющиеся контейнеры.

Внимание: необходимо следить за сроками годности посуды, полученной лаборатории. Если посуда, стерилизуемая в лаборатории, не использована срок, указанный на этикетках её необходимо вернуть в лабораторию для повторной стерилизации.

Нативный материал доставляют в лабораторию в максимально короткие сроки (для большинства образцов не позднее 1,5-2 ч после их получения). Допускается хранение материала в холодильнике при 4° С (это не относится биологическому материалу, полученному из стерильных в норме локусов: ликвору, крови, внутрисуставной и плевральной жидкости!). При использовании транспортных сред биологический материал можно хранить в течение 24 ч. Жидкий биологический материал можно транспортировать непосредственно в шприце, на кончик которого надет стерильный колпачок или загнутая под углом игла. Для исследования на анаэробы биологический материал необходимо помещать в анаэробные условия. Для жидких образцов (кровь, гной, экссудат, жидкости из стерильных полостей) используют специальные флаконы с жидкой питательной средой, заполненные газовой смесью определенного состава, куда из шприца уколом иглы через резиновую плотно завальцованную крышку вносят материал. Можно использовать анаэробные коммерческие тампоны с транспортной средой.

ü Транспортировка осуществляется в металлических биксах (пеналах), термоконтейнерах, которые должны легко подвергаться обработке. Пробы рекомендуется пересылать в герметично закрытом контейнере, помещенном в соответствующем отделе пластикового мешка (сумки), также защищенного от проливания жидкостей.

ü К материалу прилагают сопроводительный документ, где указывают наименование, источник и метод получения биологического материала, дату и время его взятия; ФИО, пол и возраст больного; название учреждения, отделения, № палаты; предполагаемый диагноз инфекционной патологии и предшествующую антибактериальную терапию; фамилию и подпись врача, направившего материал для проведения бактериологического исследования.

Внимание: погрешности в правилах сбора материала для микробиологического исследования приводят к ошибкам в диагностике возбудителя и определении его антибиотикочувствительности.

Исследование крови

Для взятия крови используют одноразовые шприцы или системы. Кровь берут во время подъёма температуры из периферической вены. Забор крови проводится с соблюдением правил асептики и мер индивидуальной защиты персонала, предусмотренных при работе с кровью. Обязательное использовать стерильные одноразовые перчатки. Кровь забирают и засевают сразу после взятия в питательные среды в процедурном кабинете. При необходимости допускается взятие и посев крови у постели больного. Перед использованием флаконов визуально определяют прозрачность среды, любое помутнение свидетельствует об их непригодности. При подозрениина анаэробную инфекцию необходимо одномоментно

собирать кровь в два флакона – с питательными средами для аэробного и анаэробного культивирования. Не следует брать кровь из сосудистых катетеров, кроме случаев, когда предполагается инфекция катетерного происхождения.

Забор и посев крови

Пальпировать вену следует перед обработкой места венепункции. Для предотвращения контаминации кожу пациента над пунктируемой веной тщательно обработать в следующей последовательности:

ü очистить 70% этиловым спиртом (или заменяющим его антисептиком)

ü протереть тампоном, смоченным 5% настойкой йода (или йодопирона, йодоната, хлоргексидина) круговыми движениями в направлении от центра будущего прокола к периферии

ü дают высохнуть обработанному участку кожи

ü не пальпируя повторно вену произвести взятие крови

ü после венепункции удалить остатки йода 70% этиловым спиртом (или заменяющим его антисептиком).

ü При аллергической реакции на йод кожу дважды обрабатывают 70% этиловым спиртом (или заменяющим его антисептиком).

Использование сред, приготовленных в лаборатории:

Среды в стеклянных флаконах, закрытые стерильными ватно-марлевыми пробками и предохранительными стерильными бумажными колпачками:

· «двухфазная среда» (комбинация плотной и жидкой среды в одном флаконе) – для роста аэробных микроорганизмов

· полужидкие специальные среды - для роста анаэробных микроорганизмов

Посев осуществляют во флаконы со средами над пламенем спиртовой горелки. Взятие и посев крови осуществляют два человека – в то время как один обрабатывает кожу пациента, пунктирует вену и берёт кровь, другой – над пламенем спиртовки открывает пробки флаконов, подставляет флаконы со средой под струю крови из шприца или системы, обжигает горлышки и пробки флаконов и закрывает их. Рекомендуемое соотношение объёмов крови и среды 1:10 (не менее 10-20 мл у взрослых, 1-20 мл у детей в зависимости от веса пациента).

Использование коммерческих сред (BacT/ALERT, BioMerieux):

o для аэробных микроорганизмов (с зелёной крышкой)

o для анаэробных микроорганизмов (с красной крышкой)

o педиатрические флаконы – (с жёлтой крышкой) для исследования крови в объёме до 5 мл

Снимают предохранительную пластиковую крышку.

Продезинфицировать резиновую пробку флакона 70% этиловым спиртом или заменяющим его антисептиком) и выдержать 1 минуту.

Дают просохнуть обработанной поверхности.

Прокалывают пробку флакона иглой шприца и производят посев крови.

Объём исследуемой крови по прилагаемой инструкции - обычно 10-30 мл для взрослых и 1- 5 мл для детей до 12 л (метка на этикетке флакона позволяет оценить объём взятой крови).

Сначала производят посев в «анаэробный» флакон, затем – в «аэробный» во избежание попадания воздуха из шприца.

Перемешивают осторожно круговыми движениями содержимое флакона.

Маркируют флаконы и до транспортировки в лабораторию содержат в термостате или при комнатной температуре в защищённом от света месте не в холодильнике!!)

При отсутствии в отделении флаконов для гемокультур.

В исключительных случаях, при экстренной ситуации допускается использование 20-миллилитрового шприца с иглами.

В шприц предварительно набирают 0,5-0,7 мл стерильного гепарина.

Заменяют иглу.

Затем пунктируют вену, соблюдая правила асептики. Набирают 10-15- мл крови.

Перемешивают осторожным покачиванием с гепарином (иглу со шприца не снимают).

В этом же шприце с согнутой у основания иглой (или надетым стерильным колпачком) немедленно отправляют в лабораторию.