Люминесцентная микроскопия в вирусологии.

Люминесценция - холодное свечение. Явление люминесценции сводится к излучению веществами света за счет ранее поглощенной энергии. Явление люминесценции известно давно. Изучение люминесценции началось около 300 лет назад. В настоящее время различают рентгенолюминесценцию, электролюминесценцию, фотолюминесценцию и т.д. Явление люминесценции объясняется законом Стокса: «При люминесценции спектр излучения сдвинут по отношению спектра поглощения в сторону более длинной волны». В биологии глубокое изучение метода люминесцентного анализа проводится с 1945 года, когда американский ученый Кунст предложил использовать в гистологии метод люминесцирующих антител. В микробиологии и вирусологии методы люминесцирующих антител стали применяться для обнаружения вируса в исследуемом материале и его идентификации с 1955 года (Кузьмин, Поляков, Мейсель, Михайлов и др.). Метод люминесцирующих антител в люминесцентной микроскопии является наиболее перспективным, т.к. является экспресс методом диагностики различных бактериальных и вирусных болезней людей, животных, растений. Люминесцирующие тела представляют собой иммунные глобулины, меченные флуорохромами. Отечественная промышленность выпускает более 30 различных флуорохромов-люминесцентных красок (люминофоров), но не все они пригодны для мечения антител. В России наиболее часто применяются изоционат флуоресцеина или изотиоционат флуоресцеина, дающий зеленую флуоресценцию, изоционат родамина В или изотиоционат родамина В - оранжевая флуоресценция, и некоторые другие красители. Реже применяют алфадиметилесульфохлорид, дающий слабое желтое свечение. В современных люминесцентных микроскопах люминесценция исследуемых препаратов вызывается, как правило, ультрафиолетовыми лучами ближнего спектра, а также фиолетовыми и синими, имеющими наименьшие длины волн по сравнению с другими лучами.

Трансмиссивная Энцефалопатия норок

Энцефалопатия норок (Infektioseenzephalopathie, трансмиссивная энцефалопатия норок) — инфекционная (прионная) болезнь, характеризующаяся длительным инкубационным периодом и прогрессирующим поражением центральной нервной системы, дегенеративными изменениями в мозге и гибелью животных. Летальность до 100%.аболевают только взрослые норки (старше 1 года), чаще в летне-осеннее время, затем болезнь самостоятельно затухает.Источник возбудителя инфекции:больные норки.Основной фактор передачи:контаминированный корм.Животные заражаются при поедании инфицированного мяса (норок и овец), субпродуктов, тушек и трупов, при каннибализме. Заболеваемость 9 - 100 %, летальность 100 %.Патогенез:В целом аналогичен патогенезу других прионных болезней.Клинические признаки:Инкубационный период от 6 месяцев до 1 года и более. Течение медленное, прогрессирующее. Продолжительность заболевания от начала проявления до гибели норок составляет 2 - 6 недель.

Билет 39

Очистка вирусов методом электрофореза.

Так как вирусы очень лабильны, то для очистки и концентрирования их используют мягкие методы осаждение иротаминсульфатом и полиэтиленгликолем, обработка в двухфазных полимерных системах, хроматография на фосфате кальция и электрофорез в градиенте плотности. Но наиболее широкое применение, особенно на заключительном этапе очистки, нашли методы зональногоцентрифугирования в градиенте плотности сахарозы и равновесное центрифугирование в хлористом цезии.

Негенетические и генетические взаимодействия вирусов.

Как при естественном инфекционном процессе, так и в экспериментальных условиях клетка может быть заражена не одним, а несколькими вирусами. Поэтому при смешанной инфекции наблюдаются две различные формы взаимодействия:

между геномами вирусов (генетические взаимодействия) — рекомбинация, множественная реактивация, кросс-реактивация, пересортировка генов, гетерозиготность, транскапсидация;

Между продуктами генов (негенетические взаимодействия) — комплементация, фенотипическое смешивание, негенетическая реактивация, интерференция.

Генетические взаимодействия вирусов. Рекомбинация, или обмен генами между организмами, может быть межгенная, т. е. обмен целыми генами, и внутригенная, т. е. обмен участками внутри одного гена.

Путем рекомбинации можно передавать ряд признаков: гемагглютинирующую активность; ингибиторо — и терморезистентность; патогенность для мышей; активность размножения в куриных эмбрионах; ферментативную, иммуногенную и цитопатоген- ную активности. Одни признаки (ингибиторорезистентность, гемагглютинирующая активность, инфекционность, иммунологическая активность) передаются регулярно, другие (терморезистентность, патогенность, ферментативная активность и ингибиторочувствительность) — нерегулярно.

Рекомбинанты вирусов позвоночных удается получить только при скрещивании близких по свойствам вирусов, принадлежащих к одному роду. Частота возникновения их широко варьирует и существенно зависит от используемой биологической системы (клетки, вирус), а также от того, какое наследственное свойство стремятся рекомбинировать. Рекомбинация с высокой частотой наблюдается у PHK-содержащих вирусов и у ДНК-содержащих вирусов, геном которых представлен двуспиральной ДНК.

В экспериментальных условиях гибридные формы можно получить одним из четырех способов: