Раздел 3. Лабораторно-практические занятия

 

                             Занятие № 1

 

1. Тема: Переваривание углеводов. Обмен гликогена.

2. Форма учебного процесса: Лабораторно-практическое занятие.

3. Актуальность: Углеводы играют важную роль в жизнедеятельности организма, так как входят в состав структурных элементов клеток всех органов и тканей, явля­ются важным источником энергии. Студенты должны хорошо изучить данный раздел, по­скольку с нарушениями обмена углеводов связаны такие заболевания как дисахаридозы, гликогенозы, агликогенозы и другие.

4. Цель общая:

4.1.1. Изучить переваривание углеводов и пути использования продуктов, роль печени в обмене углеводов, биохимические основы патологии процессов обмена углеводов.

 4.1.2. Научиться определять активность амилазы в крови, слюне и моче, оценивать полученные результаты.

4.2. Конкретные цели:

             Знать:

1. Определение и классификация углеводов.

2. Строение моносахаридов, дисахаридов и полисахаридов.

3. Функции углеводов.

4. Переваривание углеводов пищи.

5. Роль печени в обмене углеводов.

6. Обмен гликогена. Регуляция обмена гликогена.

7. Патология обмена углеводов.

 

             Уметь:

1. Использовать знание данной темы для решения ситуационных задач.

2. Научиться определять активность амилазы в крови, моче и слюне.

3. Интерпретировать полученные в ходе лабораторных исследований

результаты в соответствии с диагностическим значением.

 

 

       Вопросы для самостоятельной подготовки к занятию

 

Исходный уровень знаний:

       1. Определение и классификация углеводов.

      2. Строение моносахаридов, дисахаридов, крахмала и гликогена.

      3. Представление о первом этапе катаболизма углеводов.

      4. Понятие о киназах, лиазах и гидролазах.

 

По новой теме:

 

1. Переваривание и всасывание углеводов.

2. Нарушение переваривания и всасывания углеводов.

3. Роль печени в обмене углеводов.

4. Унификация углеводов.

5. Синтез и распад гликогена, регуляция процессов.

6. Нарушение обмена гликогена.

 

Рекомендуемая литература

1. Конспект лекций.

2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф., "Биологическая химия", 1990, стр. 238-266.

3. Николаев А.Я., " Биологическая химия", 1989, стр. 232-255.

 

            Учебно-исследовательская работа студентов на занятии

 

1. Проделать лабораторную работу “Определение активности амилазы в крови, слюне и моче”.

2. Сделать выводы по результатам проведенных биохимических анализов.

2. Подготовиться к защите лабораторной работы (ориентировочные задачи и вопросы приведены ниже).

 Лабораторная работа

 

1. Определение активности a-амилазы в крови

Оборудование:	1.	Штатив с пробирками.
	2.	Мерная коническая пробирка.
	3.	Пипетки на 1 мл и 0,1 мл.
	4.	Термостат.
	5.	КФК.
Реактивы:	1.	Крахмальный субстрат.
	2.	Раствор йода.
	3.	Дистиллированная вода
	4.	Сыворотка крови, моча, слюна.

Принцип метода. Метод основан на колориметрическом определении уменьшения концентрации крахмала в пробах после ферментативного гидролиза по сравнению с исходным уровнем, что служит мерой активности амилазы.

 

 Ход работы. В 2 пробирки (опытная и контрольная пробы) наливают по 0,5 мл крахмального субстрата. Опытную пробу прогревают при 37^ОС 5 мин, после чего добавляют в нее 0,01мл сыворотки и инкубируют 8 мин при 37^ОС в термостате. Сразу же после инкубации опытной пробы в обе пробирки добавляют по 0,5 мл раствора йода и доводят объем проб до 5 мл дистиллированной водой. Сразу же колориметрируют их при красном светофильтре в кюветах толщиной 1 см против воды.

         Активность a-амилазы рассчитывают по формуле:

(Е_К – Е_ОП)/Е_К х 150 = г крахмала, гидролизованного 1л сыворотки за 1 час инкубации (г/л), где

Е_К – оптическая плотность контрольной пробы,

Е_ОП – оптическая плотность опытной пробы,

150 – коэффициент пересчета на количество крахмала в г, гидролизованного 1 л сыворотки за 1 час инкубации.

Норма активности амилазы в сыворотке – 16-30 г/л в час

 

2. Определение активности a- амилазы в моче

 

Работу проводят так же, как с сывороткой крови, только в опытную пробу вместо сыворотки добавляют 0,01 мл мочи, разведенной в 100 раз. При расчете активности фермента в формулу добавляют коэффициент, учитывающий разведение мочи.

Норма активности амилазы в моче – 28-160 г/л в час

3. Определение активности a-амилазы в слюне

 

Работа проводится так же, как с сывороткой и мочой. В опытную пробу добавляют 0,01 мл разведенной в 10 раз слюны. При расчете учитывают коэффициент разведения.

Норма активности амилазы в слюне – 320-640 г/л в час.

 

 

  Диагностическое значение определения амилазы

 

Гиперамилаземия.  При остром панкреатите активность амилазы крови возрастает в первые 12 – 24 часа в 10-40 раз, затем быстро снижается и приходит к норме на 2-6 сутки.

       При остром аппендиците, перитоните, перфоративной язве желудка и двенадцатиперстной кишки активность амилазы повышается в 3-5 раз.

       Гиперамилаземия наблюдается также при паротите.

       Гиперамилаземию вызывают: адреналин, гистамин, секретин, фуросемид, салицилаты, антикоагулянты, морфин, пантопон, опий, кодеин, тетрациклин, алкоголь.

Гипоамилаземия. Чаще всего снижение активности амилазы свидетельствует о недостаточности экзокринной функции поджелудочной железы. Также встречается у больных гепатитами, циррозами, злокачественными опухолями с метастазами в печень, обширными ожогами кожи, сахарным диабетом, гипотиреозом, при интоксикациях.

Гиперамилазурия. При остром панкреатите в суточной моче активность амилазы возрастает в 10-40 раз. При этом активность амилазы остается высокой до 7 суток.

Отношение активности амилазы в крови к активности амилазы в моче служит показателем функциональной полноценности почечного фильтра.

              Проверка качества усвоения знаний (конечный уровень)

а) Вопросы для защиты лабораторной работы

1. К какому классу ферментов относится амилаза?

2. Назовите субстраты для амилазы.

3. Где образуется амилаза и где действует?

4. Назовите продукты амилазной реакции.

5. Какой принцип лежит в основе метода определения активности амилазы?

6. С какой целью пробы помещают в термостат?

7.  Для диагностики каких заболеваний используется определение активности амилазы в крови? моче? слюне?

8. Каковы причины снижения активности амилазы в крови?

9. Каковы причины увеличения активности амилазы в крови?

10. Каковы причины повышения активности амилазы в моче?

11. Чему равна норма активности амилазы в крови? В слюне? В моче?

 

б) Ситуационные задачи (УИРС)

1. Животному внутривенно ввели стерильный раствор сахарозы. Появится ли сахароза в моче?

2. Употребление в пищу кондитерских изделий, конфет вызывает у ребенка рвоту, понос. Он плохо переносит и сладкий чай, тогда как молоко не вызывает отрицательных реакций. Какой молекулярный дефект является причиной данных нарушений?

3. Больной страдает от судорог в мышцах при напряженной физической работе, но в остальном чувствует себя здоровым. Биопсия мышечной ткани выявила, что концентрация гликогена в мышцах этого больного гораздо выше нормы. Почему накапливается гликоген? Ваши рекомендации такому человеку.

4. Клинические симптомы двух форм галактоземии, одна из которых обусловлена недостаточностью галактокиназы, а другая - галактозо-1-фосфат-уридилтрансферазы, резко различаются по своей тяжести. И в том, и в другом случае молоко вызывает у больных кишечные расстройства, но при недостаточности галактозо-1-фосфат-уридилтрансферазы нарушаются функции печени, почек, селезенки и мозга, а затем наступает смерть. Какие продукты накапливаются в крови и тканях при недостаточности каждого из двух ферментов? Оцените сравнительную токсичность этих продуктов на основе приведенных выше данных.

5. Сделайте предположение о возможных причинах заболевания, если известно, что у больного, длительно страдающего хроническим заболева-нием кишечника – энтероколитом, после молочной пищи стали появляться метеоризм, диарея, колики.

6. Введение животным адреналина вызывает гипергликемию. Почему это не наблюдается у животных с удаленной печенью?

7. Какие реакции характерны для мобилизации гликогена в печени и мышцах?

1) гликоген → глюкозо-1-фосфат→ глюкозо-6-фосфат→ глюкоза

2) гликоген→ глюкозо-1-фосфат→ глюкозо-6-фосфат

3) гликоген → глюкозо-6-фосфат → лактат

4) гликоген → мальтоза

       А. Характерно для печени.

       Б. Характерно для мышц.

       С. Протекает и в печени, и в мышцах.

       Д. Не протекает ни в печени, ни в мышцах.

 

Занятие № 2

1. Тема: Гликолиз и глюконеогенез.

2. Форма учебного процесса: лабораторно-практическое занятие.

4. Цель общая:

4.1.1. Изучить процессы распада и синтеза глюкозы, понять значение этих процессов в организме.

4.1.2. Научиться определять содержа­ние глюкозы в крови и моче, оценивать полученные результаты в соответствии с диагностическим значением.

4.2. Конкретные цели:

      

Знать:

1. Гликолиз, ход реакций, регуляция и значение.

2. Глюконеогенез. Реакции. Регуляция. Значение.

3. Глюкозо-лактатный цикл.

 

     Уметь:

1. Использовать знание материала данной темы для решения ситуационных задач.

1. Пользоваться фотоэлектроколориметром.

2. Определять содержание глюкозы в крови и моче глюкозооксидазным методом.

3. Интерпретировать полученные результаты в соответствии с диагностическим значением.

 

Вопросы для самостоятельной подготовки к занятию

    Исходный уровень знаний

                                        1. Понятие о киназах, лиазах, оксидоредуктазах.

2. Представление о первом этапе катаболизма углеводов.

3. Распад гликогена в печени и мышцах.

      4. Цикл Кребса, дыхательная цепь, субстратное и окислительное фосфорилирование.

 

  По новой теме

       1. Понятие о гликолизе и гликогенолизе. Ход реакций в гликолизе.

       2. Регуляция гликолиза.

       3. Биологическая роль гликолиза.

       4. Определение глюконеогенеза. Ход реакций глюконеогенезе.

       5. Регуляция глюконеогенеза.

       6. Значение глюконеогенеза.

       7. Глюкозо-лактатный цикл.

 

     Рекомендуемая литература

1. Конспект лекций.

2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф., "Биологическая химия", 1990, стр. 244 -259.

3. Николаев А.Я., "Биологическая химия", 1989, стр. 241 - 246.

 

   Учебно-исследовательская работа студентов на занятии

1. Проделать лабораторную работу "Определение глюкозы в крови и моче"

- ознакомиться с другими методами определения глюкозы в крови;

- определить содержание глюкозы в исследуемой крови глюкозооксидазным методом;

- определить содержание глюкозы в моче.

2. Сделать выводы по результатам проведенных биохимических анализов.

3. Подготовиться к защите лабораторной работы (ориентировочные вопросы и задачи приведены ниже).

 

 

                        Лабораторная работа

 Методы определения глюкозы можно разделить на 3 группы:

 

- Методы, основанные на восстанавливающих свойствах глюкозы (например, метод Хагедорна – Йенсена). Эти методы неспецифичны, т.к. кроме глюкозы в крови могут быть другие редуцирующие вещества (аскорбиновая кислота, фруктоза, галактоза, ряд лекарственных препаратов), которые завышают истинные значения глюкозы в среднем на 30%.

 

 - Методы, основанные на превращении глюкозы в оксиметилфурфурол и его конденсации с ароматическими аминами (О-толуидин) с получением окрашенного продукта. Методы просты и достаточно специфичны, поэтому удобны для практики.

 

 -  Ферментативные методы. Самые специфичные и точные.

 

1. Определение глюкозы в крови глюкозооксидазным методом.

 

	Оборудование:	1.	Штатив с пробирками.
		2.	Пипетки на 1 мл и 0,2 мл.
		3.	КФК.
		4.	Кюветы на 3 мм.
		5.	Иммунологические планшеты.
		6.	Диагностические тест-полоски.
Реактивы:		1.	Рабочий раствор (ферментативно-хромогенный раствор).
		2.	Стандартный раствор глюкозы.
		3.	Дистиллированная вода.
		4.	Сыворотка крови.
		5.	Моча

 

Принцип метода. Глюкозооксидаза окисляет глюкозу с образованием перекиси водорода, которая под действием пероксидазы окисляет хромоген хлоркрезол с образованием окрашенного продукта. Обе реакции протекают одновременно.

Ход работы. Внести в пробирки образцы сыворотки крови и реагенты по схеме:

 

Реактивы (мл)	Опытная проба	Стандартная проба	Контроль
Рабочий раствор	1,0	1,0	1,0
Сыворотка	0,2	----	----
Стандартный раствор глюкозы (10ммоль/л)	----	0,2	----
Дистиллированная вода	----	----	0,2

 

Пробы тщательно перемешать и инкубировать 15 мин при 37^ОС, затем интенсивно встряхнуть. Измерение оптической плотности проводят при длине волны 490 нм в кювете толщиной 3 мм против контроля. Расчет концентрации глюкозы проводят по формуле:

 

                          С = (Е_О/Е_С) х 10, где

 

С – концентрация глюкозы в ммоль/л.

Е_О – оптическая плотность опытной пробы.

Е_С – оптическая плотность стандартной пробы.

10 – концентрация глюкозы в стандартной пробе, ммоль/л.

 

Норма глюкозы крови утром натощак – 3,3-5,5 ммоль/л.

 

2. Определение глюкозы в моче.

 

 В лунки иммунологического планшета вносят 0,05 мл мочи и 0,2 мл рабочего реактива.

Отсутствие развития окраски в течение 2 мин свидетельствует об отсутствии глюкозы в данной пробе. Пробы мочи, вызывающие покраснение реакционной смеси, считают положительными.

 

3. Определение глюкозы в моче с использованием тест-полосок

           

Тест-полоска, предназначенная для качественного экспресс-анализа содержания глюкозы в моче, представляет собой полоску полимерного материала с наклеенным аналитическим элементом в виде квадрата светло-бежевого, светло-розового или желтого цвета (в зависимости от красителя), выполненного из любого фильтрующего материала. На аналитический элемент нанесены глюкозооксидаза и пероксидаза.

Тест-полоску погружают в мочу на 1-2 секунды и вынимают, оставшуюся на полоске мочу удаляют о край сосуда и выдерживают на воздухе от 1 до 3 минут. Визуально определяют цвет. Переход светло-бежевого цвета в синий, светло-розового в красный, желтого в зеленый учитывают как положительный результат. Положительные пробы мочи направляются на количественное исследование.

       Чувствительность метода составляет 1,4 – 5,6 ммоль/л или не более 0,1% массовой доли глюкозы в исследуемой моче.

 

 

   Диагностическое значение определения глюкозы в крови и моче

       Для диагностики целого ряда заболеваний (к числу которых прежде всего следует отнести сахарный диабет, патологические состояния, связанные с недостаточностью функции печени и почек, некоторые эндокринные заболевания, новообразования мозга, поджелудочной железы и надпочечников, гиповитаминоз В₁, а также ряд наследственных аферментозов) важно иметь объективное представление о состоянии углеводного обмена, главным показателем которого служит содержание глюкозы в крови.

       Гипергликемия – это увеличение содержания глюкозы в крови выше нормы (до 6,7 – 7,0 ммоль/л). Наблюдается обычно при следующих состояниях:

      1) сахарном диабете, остром панкреатите, панкреатических циррозах (эти заболевания дают гипергликемию, связанную с недостаточностью инсулина);

       2) токсическом, травматическом, механическом раздражении центральной нервной системы. Травмы, опухоли мозга, а также эпилепсия, менингит, отравления ртутью, окисью углерода, синильной кислотой, эфиром дают так называемую центральную (нервную) гипергликемию;

       3) при гипефункции щитовидной железы, коры и мозгового вещества надпочечников, гипофиза (в этом случае выделяется больше гипергликемических гормонов);

       4) при сильных эмоциях и психическом возбуждении;

       5) после обильного приема с пищей углеводов – алиментарная гипергликемия.

                                    

  Гипогликемия – это снижение содержания глюкозы в крови. Встречается при: 

       1) передозировке инсулина (при лечении сахарного диабета);

       2) заболеваниях почек, когда нарушается процесс реабсорбции в канальцах;

       3) плохом всасывании углеводов вследствие заболевания тонкого кишечника;

       4) недостаточной выработке гипергликемических гормонов;

       5) при гиперфункции островков Лангерганса поджелудочной железы (аденомы, гиперплазии, гипертрофии);

       6) при острых и хронических гепатитах, циррозах, дистрофии печени, механической желтухе, алкогольной интоксикации, при раке печени, отравлении фосфором, бензолом, хлороформом, мышьяком;

       7) после больших потерь крови;

       9) при спленомегалии (стойкое увеличение селезенки) у детей;

       10) при несбалансированной диете (неправильном соотношении пищевых веществ), от недоедания и голода – алиментарная гипогликемия.

       Глюкозурия – повышение глюкозы в моче. Глюкозурия наблюдается при сахарном диабете, синдроме Иценко-Кушинга, акромегалии, феохромацитоме, тиреотоксикозе, инсульте, энцефалите, травмах и опухолях головного мозга, гепатитах, циррозе, инфаркте миокарда, воспалении легких. Глюкозурия наблюдается также при заболеваниях почек, связанных с нарушением реабсорбции глюкозы в почечных канальцах, пиелонефрите, гломерулонефрите, нефросклерозе, почечном диабете, раке почек. Во всех перечисленных случаях концентрация глюкозы в крови превышает верхнее значение почечного порога 9,99 ммоль/л.

       В моче здорового человека глюкоза практически не выявляется. Но может обнаружиться при некоторых физиологических состояниях (физиологическая глюкозурия): алиментарная глюкозурия, после психоэмоционального напряжения, при приеме лекарств (кофеина и других).

 

       Проверка качества усвоения знаний (конечный уровень)

а) Вопросы для защиты лабораторной работы

1. Какие методы определения глюкозы в крови вы знаете?

2. Принцип определения глюкозы в каждом из известных методов.

3. Какой из известных методов определения глюкозы является наиболее спе­цифичным?

4. Перечислите методы определения глюкозы в моче?

5. Какой метод определения глюкозы в основе экспресс анализа "глюкотест"?

6. Для диагностики каких патологий назначается анализ глюкозы в крови и мо­че?

7. Каково нормальное содержание глюкозы в крови? Моче?

8. Что такое гипергликемия? Гипогликемия? Глюкозурия?

9. Назовите причины гипергликемии.

 10. Перечислите причины гипогликемии.

 11. Назовите гипер- и гипогликемические гормоны.

 12. В каких случаях необходимо исследование концентрации глюкозы в крови и моче?

 13. Чем опасна длительная гипергликемия?

 14. Назовите причины глюкозурии.

 15. Рассчитайте концентрацию глюкозы в крови, если известно, что Е_О= 0,01 и Е_{СТАНДАРТА}= 0,02, концентрация глюкозы в стандартной пробе равна 10 ммоль/л.

 

б) Ситуационные задачи

1. Могут ли янтарная, яблочная, лимонная кислоты служить предшественниками глюкозы? Если да, то составьте схему превращения. Сколько АТФ необходимо для синтеза 1 молекулы глюкозы в каждом случае?

2. Описано два типа заболеваний. Для одного характерен дефект фосфорилазы мышц, для другого - печени. Назовите признаки этих заболеваний. Как изменится концентрация лактата в крови после физической нагрузки? Какова реакция больных на введение глюкагона?

3. При длительных физических нагрузках запасы гликогена истощаются не только в работающих, но и в неработающих мышцах. Обсудите механизм взаимосвязи обмена гликогена в этих тканях. Какой орган опосредует эту взаимосвязь?

4. Спортсмен пробежал 100-метровую дистанцию. Изменится ли содержание молочной кислоты в крови? Почему?

5. При добавлении АТФ к гомогенату мышечной ткани снизилась скорость гликолиза. Концентрация глюкозо-6-фосфата и фруктозо-6-фосфата увеличилась, а концентрация всех других метаболитов при этом снизилась. Укажите фермент, активность которого снижается при добавлении АТФ.

6. Подберите среди предложенных (А – С) подходящее изменение метаболизма углеводов для перечисленных состояний:

1)  Через 1-2 часа после еды в состоянии покоя.

2)  Голодание в течение 2-х суток.

3)  Утром натощак (постабсорбтивное состояние).

4) В промежутках между приемами пищи.

 

       А. В печени усиливается распад гликогена.

       В. В печени усиливается синтез гликогена.

       С. В печени усиливается ГНГ из глицерина и аминокислот.

           

7. Выберите утверждения, правильно характеризующие процесс глюконеогенеза:

       а) является одним из источников глюкозы в крови;

       б) регуляторные ферменты катализируют необратимые реакции;

       в) ингибируется при накоплении в клетке АТФ;

       г) протекает главным образом в печени, а также коре почек и слизистой тонкого кишечника;

       д) обеспечивает глюкозой мозг в тех случаях, когда глюкоза в организм не поступает.         

 

 

 8. Сколько АТФ образуется при окислении сахарозы до углекислого газа и воды?

 9. Сколько молекул АТФ нужно затратить на синтез 10 молекул глюкозы из пирувата?

 

Занятие № 3

1.Тема: Пентозофосфатный путь окисления глюкозы. Глюкоза крови и ее регуляция. Гетерополисахариды.

2. Форма учебного процесса: лабораторно-практическое занятие.

3. Актуальность:  Знание механизмов поддержания гомеостаза глюкозы крови необ­ходимо для понимания патогенеза ряда заболеваний: сахарный диабет, стероидный диабет, феохромацитома и другие. Гетерополисахариды выполняют структурообразовательную функцию и ряд других важных функций. Материал данной темы будет широко использоваться при изучении дисциплин медицинского профиля.

4.Цель общая:

 

4.1.1. Изучить пути окисления глюкозы.

4.1.2. Изучить механизмы поддержания гомеостаза глюкозы крови.

4.1.3. Изучить строение и функции протеогликанов и гликопротеинов.

4.1.4. Научиться определять содержание гликопротеинов в крови и объяснять полученные результаты на основе диагностического значения

 

4.2. Конкретные цели:

 

            Знать:

       1. Окисление лактата.

       2. Пентозофосфатный путь. Значение. Регуляция.

       3. Регуляция глюкозы крови гормонами.

       4. Строение и функции гетерополисахаридов.

 

           Уметь:

1. Определять концентрацию серогликоидов в сыворотке крови.

 

    Вопросы для самостоятельной подготовки к занятию

    Исходный уровень знаний

 

 

1. Химическое строение гетерополисахаридов (курс биоорганической химии).

2. Ферменты.

3. Основные метаболические пути обмена углеводов (гликолиз, глюконеогенеза, обмен гликогена)

4. Строение нуклеотидов.

 

По новой теме

1. Окисление лактата.

2. Пути образования и использования глюкозо-6-фосфата.

3. Пентозофосфатный путь окисления глюкозы. Ход реакций в окислительной части пентозофосфатного пути. Пентозный цикл. 

4. Значение пентозофосфатного пути для организма.

5. Регуляция пентозофосфатного пути.

6. Возрастные и тканевые особенности пентозофосфатного пути.

7. Глюкоза крови и ее регуляция.

8. Сахарные нагрузки и сахарные кривые.

9. Основные причины гипергликемии.

10. Неферментативное гликозилирование белков.

11. Причины гипогликемии.

12. Гетерополисахариды, определение, классификация.

13. Протеогликаны, строение значение.

14. Гликопротеины, их строение и значение.

 

 

Рекомендуемая литература

1. Конспект лекций.

2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф., "Биологическая химия", 1990, стр. 266-275, 521-525.

3. Николаев А.Я., "Биологическая химия", 1989, стр. 253-270, 405-408.

 

Учебно-исследовательская работа студентов на занятии

1. Проделать лабораторную работу "Определения серогликоидов в крови".

2. Сделать выводы по результатам проведенных биохимических анализов.

3. Подготовиться к защите лабораторной работы (вопросы приведены ниже).

 

                                     Лабораторная работа

          Определение концентрации серогликоидов в крови.

Оборудование:	1.	Штатив с пробирками.
	2.	Пипетки на 1 мл, 2 мл и 5 мл.
	3.	Мерная пробирка на 10 мл.
	4.	Центрифуга.
	5.	КФК.
	6.	Кюветы толщиной 1 см.

Реактивы:	1.	0,85% NaCl (физ. раствор).
	2.	1,8 Н хлорная кислота.
	3.	5% фосфорновольфрамовая кислота.
	4.	Сыворотка крови.

Принцип метода. Под названием серогликоиды (или серомукоиды) объединяется группа гликопротеидов, которые не осаждаются серной кислотой, трихлоруксусной и сульфосалициловой кислотами. Метод основан на осаждении всех белков, кроме серогликоидов, хлорной кислотой. Серогликоиды выделяют осаждением фосфорновольфрамовой кислотой и по степени помутнения раствора судят о содержании серогликоидов.

 

Ход работы. К 0,5 мл сыворотки приливают 4,5 мл 0,85% раствора хлористого натрия и добавляют по каплям 2,5 мл 1,8 H раствора хлорной кислоты. Хорошо перемешивают и оставляют на 10 мин при комнатной температуре. Затем центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. 5 мл центрифугата смешивают с 1 мл 5% раствора фосфорновольфрамовой кислоты и через 15 мин измеряют мутность на КФК в кювете толщиной 1 см при красном светофильтре против контроля. Контроль готовят, смешивая 3,3 мл физиологического раствора с 1,7 мл хлорной кислоты и 1 мл фосфорновольфрамовой кислоты.

Результат выражают в условных единицах – значении оптической плотности.

Норма содержания серогликоидов в крови – 0,13 - 0,2 условных единиц.

  Диагностическое значение определения серогликоидов в крови

 

Увеличение серогликоидов наблюдается при всех воспалительных и некробиотических процессах: у больных с инфарктом миокарда, желтушным синдромом (особенно на почве новообразования), злокачественной опухолью, обострением хронического холецистита, с деструктивной формой туберкулеза легких, ревматизмом, мозговым инсультом и другими патологическими состояниями.

Снижение серогликоидов наблюдается при инфекционном гепатите, гематоцеллюлярной дистрофии, рассеянном склерозе.

 

         Проверка качества усвоения знаний (конечный уровень)

а) Вопросы для защиты лабораторной работы

1. Что такое серогликоиды?

2. Принцип метода определения концентрации серогликоидов в крови.

3. Зачем к сыворотке крови приливают раствор хлорной кислоты?

4. Как рассчитывают концентрацию серогликоидов?

5. Для чего проводится центрифугирование?

6. Какая существует связь между концентрацией серогликоидов и состоянием больного?

7. В каких случаях содержание серогликоидов в крови может быть высоким?

8. Можно ли на основании повышения концентрации серогликоидов диагности­ровать определенное заболевание?

 

 

б) Ситуационные задачи (УИРС)

 

1. Глюкозу, меченную ¹⁴С в 6-м положении, добавили в раствор, содержащий ферменты и кофакторы окислительной части пентозофосфатного пути. Какова судьба радиоактивной метки?

2. На экзамене у студента содержание глюкозы в крови оказалось равным 7,2 ммоль/л. Является ли это признаком патологии?

3.  Будет ли содержать радиоактивную метку рибозо-5-фосфат, полученный в пентозофосфатном пути из глюкозы, меченной ¹⁴С по 1-му атому?

4. Выберите пути использования метаболитов пентозофосфатного пути:

 

1) НАДФН.                                  А. Синтез нуклеотидов.

2) Рибозо-5-фосфат.                 В. Восстановительные реакции в                                                                                                                        

   3) 3-фосфоглицериновый            окислении жирных кислот.

       альдегид.                               С. Реакции гидроксилирования.

   4) Фруктозо-6-фосфат.             Д. Гликолиз.

 

5. Выберите определения, характеризующие свойства НАДН и НАДФН.

 

1) Является коферментом дегидрогеназ.       А. Характерно для НАДН.

2) Служит донором водорода для дыха-         В. Характерно для НАДФН                

тельной цепи.                                    

3) Используется в реакции рибозо-5-фос-      С. Характерно для обоих.

фат → рибулозо-5-фосфат.                              Д. Не характерно для этих

4) Образуется в окислительной части ПФП.        коферментов.

5) Образуется в гликолизе.

6) Образуется при синтезе липидов. 

 

6. Выберите особенности, характерные для гликопротеинов и протеогликанов.

 

 1) Входят в состав мембран.                                         А. Протеогликаны.

 2) Состоят из различных мономеров.                           В. Гликопротеины.

 3) Обеспечивают взаимодействие между клетками.   С. Оба.

 4) Являются резервными углеводами.                          Д. Ни одно.

 5) Определяют группоспецифические свойства крови.

 

7. У больного резко уменьшено время ретракции сгустка (протромбиновое время - тест для оценки количества фибриногена). Введение какого протеогликана будет целесообразным и почему?