Возбудители лептоспироза. Биологические свойства, факторы вирулентности. Правила забора и транспортировки клинического материала в лабораторию. Принципы микробиологической диагностики.

Лептоспироз – острое природно-очаговое инфекционное заболевание, характеризующееся интоксикацией, волнообразной лихорадкой, поражением кровеносных капилляров почек, печени, ЦНС, сопровождающееся желтухой и гемморагическим синдромом.

Род – Leptospira (от греч. leptos – тонкий, spira – спираль)

Виды – L. interrogans (патогенные для человека и животных)

L. biflexa (сапрофитные)

Морфология.

Тонкие извитые нити, размеры 6-20х0,1 мкм; с 20-40 мелкими первичными завитками, первичные завитки тесно сжаты, при обычном увеличении не различимы (видны в электронном микроскопе), это придает им в мазке вид «четок» или «нитей жемчуга»; имеют вторичные завитки на концах, придающие им S- или С-образную форму в зависимости от направления загнутых концов; спор, капсул не имеют; с обоих концов отходят по два периплазматических жгутика, очень подвижны. Цист не образуют.

Тинкториальные свойства.

Плохо окрашиваются анилиновыми красителями, грамотрицательные, по Романовскому-Гимзе окрашиваются в розовый цвет, при импрегнации серебром по Морозову – коричневые или черные, изучаются с помощью темнопольной микроскопии.

Культуральные свойства.

Аэробы или микроаэрофилы, оптимальная температура культивирования 28-300С, рН 7,2-7,4, длительность – 3-7 дней. Не прихотливы к питательным средам (в природе живут в воде), но требуют повышенной влажности сред (гидрофилы). Для культивирования используют жидкие, полужидкие и плотные среды с добавлением кроличьей сыворотки (например, водно-сывороточная среда Уленгута, фосфатно-сывороточная среда). На плотных и полужидких питательных средах растут в нескольких миллиметрах от поверхности в виде бесцветных плоских дисков. При росте в жидких питательных средах визуального изменения не вызывает (о результатах роста судят по данным микроскопии в темном поле).

Антигенная структура.

Сложная, по химическому составу выделяют полисахаридные, липидные, белковые антигены (антигенную структуру изучают в РМАЛ). Известны более 200 сероваров, объединенных в 25 серогрупп (более 100 сероваров патогенны для человека). В Кировской области встречаются серовары: L.рomona, L.grippotyphosa, L.iсterohaemorrhagia.

Факторы патогенности.

Изучены недостаточно.

Токсины. Обнаружены эндотоксино-и экзотоксиноподобные вещества:

Эндотоксин – вызывает общую интоксикацию, кровоизлияние за счет повышения проницаемости сосудов.

Токсическое вещество белковой природы – обладает цитотоксическим действием.

Гемолизин обусловливает гемоглобинурию, желтуху, анемию.

Ферменты патогенности: фибринолизин, плазмокоагулаза.

Структурные и химические компоненты клетки: адгезины, высокая подвижность за счет жгутиков.

Резистентность.

Относительно устойчивые. В воде открытых водоемов сохраняются до 1 месяца (на длительность сохранения в воде решающее значение оказывают рН среды, со снижением рН продолжительность выживания уменьшается), в замороженном состоянии переживают месяцы, а при быстром замораживании (-700С) – годы. Чувствительны: к нагреванию (при 56-600С погибают через 30 минут, 1000C – мгновенно), к высушиванию, никим рН, к дез. растворам (быстро погибают под воздействием хлорсодержащих растворов), к УФО, к антибиотикам (пенициллин, тетрациклин, левомицетин).

Эпидемиология.

Зооноз.

Источник инфекции и основной резервуар лептоспир в природе – различные виды мелких млекопитающих, особенно грызуны (хронические носители лептоспир, выделяют с мочой).

Механизм передачи инфекции:

Урино-оральный (пути – водный – при употреблении для питья, контактный – при купании, уходе за больными животными, забое, разделке туш и алиментарный – чаще мясо и молоко).

Носит профессиональный характер.

Сезонность – весенне-летняя (покосные вспышки).

Входные ворота: поврежденная кожа (достаточно экскориации), неповрежденные слизистые (ЖКТ, глаз, мочеполовых органов).

Патогенез и клинические особенности.

В патогенезе (по К.Н.Токаревичу, 1982 г.) различают 5 фаз:

I фаза (7-20 дней) – инкубационная, внедрение возбудителя в организм, благодаря активному движению быстрое проникновение в лимфоузлы и кровь – первичная бессимптомная бактериемия и диссеминация возбудителя.

II фаза (1 неделя заболевания) – вторичная бактериемия, проникновение в органы и ткани (в основном паренхиматозные – печень, почки, легкие, оболочки мозга и т.д.), где возникают воспалительные и дегенеративные изменения. Клинически – резкое повышении температуры (38-400С), лихорадка, сильная головная боль, мышечная боль (особенно в икроножных мышцах).

III фаза (2 неделя заболевания) – токсическая (максимальное развитие токсемии). Поражение продуктами метаболизма лептоспир капилляров – капилляротоксикоз. Развиваютя:

Геморрагического синдрома (гемморагии на коже, слизистых, внутренних органах).

Желтуха (обусловлена гемолизом и некротическими изменениями печеночной паренхимы).

Нарушение мочеобразования и мочевыделения (повреждается эпителий почечных канальцев, коркового и подкоркового вещества).

Менингит (накопление лептосир в СМЖ).

IV фаза (3-4 неделя) – формирование нестерильного иммунитета, нарастание антител в крови, но возбудитель может длительно сохраняться в почках.

V фаза (4-5 неделя) – освобождение организма от возбудителя.

Иммунитет.

Постинфекционный иммунитет – гуморальный, прочный, напряженный, длительный, строго типоспецифический.

Микробиологическая диагностика. включает бактериоскопический, бактериологические, серологические и биологические методы. материал для исследований-кровь, при поражениях ЦНС-спинномозговая жидкость, на более поздних сроках(10-12 сутки)-центрифугат мочи.

 микроскопия. эффективна только в первые дни заболевания, материалы следует в темном поле либо копировать в маске, окрашенные по романовскому гимзе. количество циркулирующих в крови невелико эффективность превышает 10%.

 выделение возбудителя. проводятся первые пять суток посевом 8-10 мл венозной крови на 6-10 пробирок со средойФерворта-Вольфа. пробирки встряхивают для предупреждения сворачивания крови, заливают жидким парафином инкубируют через каждые пять суток исследуют, при отсутствии роста в течение 15-20 дней делают пересева на свежую среду. бактерии идентифицируют с помощью типовых агглютинирующих антисывороток.

 Серологические исследования. сывороточные АТ определяют в реакции микроагглютинации и лизиса с сывороткой пациента и стандартным набором микроорганизмов. К при положительном результате наблюдается образование кубиков из лептоспир или возникновение зернистого распада бактерии. Можно применять РСК или РПГА с эритроцитами нагружеными лептоспирами.

биологическая проба. хомячков и кроликоввнутрибрюшинно выражают кровью или мочой больного. Через 48 -72 часа проводник с брюшинного экссудата и крови. за животные ведут наблюдение на 10-14 сутки оно погибает.

Специфическое лечение.

Противолептоспирозный иммуноглобулин (гетерогенный из гипериммунной сыворотки волов).

Неспецифическое лечение – антибиотики (пенициллин, тетрациклин).