Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии

РЕФЕРАТ

Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии

 

ВЫПОЛНИЛ СТУДЕНТ

 

Фамилия, имя, отчество

Выползов

 

Михаил Александрович

 

Академическая группа

ББ-405

Курс

4

 

Формы обучения

Очная

 

 

 

«__» ______ 2019г.

 

   

 

 

 

 

 

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ

 

Фамилия, имя, отчество

Варфоломеева

 

Татьяна Александровна

  Ученая степень

кандидат биологических наук

  Ученое звание

Старший преподаватель

  Должность

Старший преподаватель кафедры радиационной биологии

 

 

 

 

 

 

«__» ______ 2019г.

                   

 

 

Челябинск

2019

 

Содержание

Введение………………………………………………………………..

Высокоэффективная жидкостная хроматография

1.1. Нормально-фазовая ВЭЖХ

1.2. Обращённо-фазовая ВЭЖХ

1.3. Матрицы для ВЭЖХ

1.4.Прививки неподвижной фазы

1.5.Детекторы для ВЭЖХ

2.Масс-спектрометрия

2.1. История масс-спектрометрии

2.2. Принцип работы и устройство масс-спектрометра

2.3. Источники ионов

2.4. Масс-анализаторы

2.5. Детекторы

2.6. Хромато-масс-спектрометрия

2.7. Характеристики масс-спектрометров и масс-спектрометрических детекторов

2.8. Применения масс-спектрометрии

Заключение

Список литературы

Введение

Жидкостная хроматография и тандемной масс-спектрометрия — широко распространённый метод химического анализа сочетающий в себе физическое разделение жидкостной хроматографии (или высокоэффективной жидкостной хроматографии) с масс-спектрометрией.

Жидкостная хроматография разделяет смеси нескольких компонентов и масс-спектрометрия обеспечивает структурную идентичность отдельных компонентов с высокой чувствительностью. Этот двойной метод может быть использован для анализа биохимических, органических и неорганических соединений часто встречается в сложных образцов из окружающей среды и биологического происхождения. Он может быть применён в широком диапазоне отраслей промышленности, включая биотехнологии, мониторинг окружающей среды, пищевой и фармацевтической, агрохимической и косметической промышленности.

Высокоэффективная жидкостная хроматография

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ, англ. HPLC, High performance liquid chromatography) — один из эффективных методов разделения сложных смесей веществ, широко применяемый как в аналитической химии, так и в химической технологии. Основой хроматографического разделения является участие компонентов разделяемой смеси в сложной системе Ван-дер-Ваальсовых взаимодействий (преимущественно межмолекулярных) на границе раздела фаз. Как способ анализа, ВЭЖХ входит в состав группы методов, которая, ввиду сложности исследуемых объектов, включает предварительное разделение исходной сложной смеси на относительно простые. Полученные простые смеси анализируются затем обычными физико-химическими методами или специальными методами, созданными для хроматографии.

Принцип жидкостной хроматографии состоит в разделении компонентов смеси, основанном на различии в равновесном распределении их между двумя несмешивающимися фазами, одна из которых неподвижна, а другая подвижна (элюент).

Отличительной особенностью ВЭЖХ является использование высокого давления (до 400 бар) и мелкозернистых сорбентов (обычно 3—5 мкм, сейчас до 1,8 мкм). Это позволяет разделять сложные смеси веществ быстро и полно (среднее время анализа от 3 до 30 мин).

Метод ВЭЖХ находит широкое применение в таких областях, как химия, нефтехимия, биология, биотехнология, медицина, пищевая промышленность, охрана окружающей среды, производство лекарственных препаратов и во многих других.

По механизму разделения анализируемых или разделяемых веществ ВЭЖХ делится на адсорбционную, распределительную, ионообменную, эксклюзионную, лигандообменную и другие.

Следует иметь в виду, что в практической работе разделение часто протекает не по одному, а по нескольким механизмам одновременно. Так, эксклюзионное разделение бывает осложнено адсорбционными эффектами, адсорбционное — распределительными, и наоборот. При этом чем больше различие веществ в пробе по степени ионизации, основности или кислотности, по молекулярной массе, поляризуемости и другим параметрам, тем больше вероятность проявления другого механизма разделения для таких веществ.

Нормально-фазовая ВЭЖХ

Неподвижная фаза более полярна, чем подвижная, поэтому в составе элюента преобладает неполярный растворитель:

• Гексан:изопропанол = 95:5 (для малополярных веществ)
• Хлороформ:метанол = 95:5 (для среднеполярных веществ)
• Хлороформ:метанол = 80:20 (для сильнополярных веществ)

Обращённо-фазовая ВЭЖХ

Обращённо-фазовая ВЭЖХ (англ. RP-HPLC от англ. Reversed Phase — обратная фаза) проводится с использованием неполярной стационарной фазы и полярных (водных) растворителей. Стационарная фаза это обычный силикагель, поверхность которого была модифицирована с RMe₂SiCl, где R — прямая цепочка алкильных групп, таких как C₁₈H₃₇ или C₈H₁₇. Соответственно различают колонки с материалом RP-18 и/или RP-8. С подобными стационарными фазами, время удерживания больше для менее полярных молекул, в то время как полярные молекулы вымываются быстрее (раньше в аналитической ВЭЖХ). Возможно увеличить время удерживания путём добавления большего количества воды в мобильную фазу, делая таким образом сродство гидрофобного анализируемого вещества к гидрофобной стационарной фазе сильнее, относительно теперь более гидрофильной подвижной фазы. Похожим образом возможно уменьшить время удерживания путём добавления большего количества органического растворителя к элюенту (подвижной фазе). Обращённо-фазовая ВЭЖХ используется так часто, что зачастую неправильно описывается как просто ВЭЖХ (HPLC) без каких-либо дополнительных обозначений. В фармации обращённо-фазовая ВЭЖХ используется как обязательный метод анализа лекарственных препаратов перед их выпуском.

ОФ-ВЭЖХ работает на принципе гидрофобных взаимодействий, которые случаются из-за высокой симметрии в дипольной структуре молекулы воды и играет наиболее важную роль во всех процессах в области наук о жизни. ОФ-ВЭЖХ позволяет измерить эти силы взаимодействия. Связывание анализируемого вещества со стационарной (неподвижной) фазой пропорционально площади поверхности контакта вокруг неполярного сегмента молекулы анализируемого вещества с лигандом стационарной фазы. Над этим сольвофобным эффектом доминирует сила воды «по уменьшению полостей» вокруг анализируемого вещества и цепочки С18 по сравнению с комплексом их обоих. Высвобождаемая при этом энергия пропорциональна поверхностному натяжению элюента (вода: 7,3×10−6 J/cm², метанол: 2,2×10−6 J/cm²) и гидрофобной поверхности анализируемого вещества и лиганда соответственно. Удерживание вещества в колонке может быть уменьшено путём добавления менее полярного растворителя (метанол, ацетонитрил) в подвижную фазу для того, чтобы уменьшить поверхностное натяжение воды. Градиент растворителей использует этот эффект автоматически уменьшая полярность и поверхностное натяжение водной подвижной фазы во время проведения анализа.

Структурные свойства молекулы анализируемого вещества играют важную роль в характеристиках её удерживания на стационарной фазе. В общем, анализируемое вещество с большой гидрофобной частью (С-Н, С-С и, обычно, неполярные атомные связи, такие как S-S и другие) удерживается дольше, потому что оно не взаимодействует с водной поверхностью. С другой стороны, анализируемые вещества с большими полярными частями в своей структуре (имеющие в своей структуре полярные группы, такие как -OH, -NH₂, COO^- или -NH₃⁺) удерживаются меньше, так как они лучше связываются с водой. Подобные взаимодействия могут подвергаться стерическим эффектам: очень большие молекулы могут иметь только ограниченный доступ к порам стационарной фазы, где происходят взаимодействия с поверхностными лигандами (алкильными цепочками). Подобное препятствие поверхности обычно приводит к сокращению удерживания.

Время удерживания увеличивается с увеличением площади гидрофобной (неполярной) поверхности. Вещества с разветвлёнными цепочками вымываются гораздо быстрее, чем их соответствующие линеарные изомеры, потому что общая площадь поверхности уменьшается. Похожие органические вещества с единичными С-С связями вымываются позже, чем подобные соединения с С=С связями или тройными С-С связями, так как двойные или тройные связи короче, чем одиночная С-С связь.

Не зависимо от поверхностного натяжения подвижной фазы (организационная сила в структуре элюента), другие характеристики мобильной фазы могут оказывать влияние на время удерживания анализируемого вещества. Например, добавление неорганических солей вызывает умеренное линейное увеличение поверхностного натяжения водных растворов (ок. 1.5⋅10⁻⁷ J/cm² per Mol для NaCl, 2.5⋅10⁻⁷ J/cm² per Mol для (NH₄)₂SO₄) и потому что энтропия раствора анализируемого вещества контролируется поверхностным натяжением, добавление солей приводит к увеличению времени удерживания. Подобная техника используется для плавного разделения и восстановления белков и защищает их биологическую активность при анализе белков (метод называется hydrophobic interaction chromatography, HIC).

 

Другой важный фактор — pH подвижной фазы, так как он может изменить гидрофобный характер анализируемого вещества. Для этого многие методы используют буферный агент, такой как натрия фосфат — для того, чтобы контролировать pH. Буферные растворы служат нескольким целям: контролируют pH, нейтрализуют заряд неподвижной фазы на поверхности силикагеля, а также являются агентами ионных пар для того, чтобы нейтрализовать заряд анализируемого вещества. Формиат аммония часто используется в масс спектрометрии для улучшения обнаружения некоторых аналитов путём формирования аналит-аммонийных аддуктов. Летучие органические кислоты, такие как уксусная кислота, или, чаще, муравьиная кислота часто добавляются в подвижную фазу, если масс спектрометрия используется для анализа элюируемого компонента колонки. Трифторуксусная кислота не часто используется в масс спектрометрии из-за того, что она остаётся в детекторе и системе подачи растворителей. Она может быть, однако, эффективна в улучшении удерживания анализируемых веществ, таких как карбоновые кислоты. Эффекты кислот и буферных растворов отличаются в зависимости от вида использования, но в общем они улучшают результаты хроматографии.

Колонки для ОФ-ВЭЖХ достаточно сложно повредить, по сравнению с колонками с нормальными силикагелем. Однако, многие ОФ-колонки состоят из алкил-производных силикагеля и их категорически запрещено использовать с водными основаниями, так как они уничтожат основные частицы силикагеля. Они могут быть использованы с водными растворами кислот, но колонку нельзя долго подвергать воздействию кислот, потому что это может вызвать коррозию металлических частей аппарата ВЭЖХ. Колонки для ОФ-ВЭЖХ следует промывать чистым растворителем после использования для удаления остатков кислот и буферных растворов, а также хранить в «надлежащем растворителе» (например, промыть метанолом и оставить шланги помпы в спирте т. о., чтобы в колонку не попадал воздух). Содержание металла в колонках ВЭЖХ должно быть низким, если необходимо сохранить способность разделять вещества наилучшим способом. Хорошим тестом на содержание металла в колонке может служить введение образца, содержащего смесь 2,2'- и 4,4'- бипиридина (bipyridine). Так как 2,2'-бипиридин может образовывать с металлами хелатные комплексы, форма пика для 2,2'-бипиридина будет искажена (с «хвостом») в том случае, если ионы металлов присутствуют на поверхности силикагеля.

Матрицы для ВЭЖХ

В качестве матриц в ВЭЖХ используются неорганические соединения, такие как оксид кремния (силикагель) или оксид алюминия, либо органические полимеры, такие как полистирол (сшитый дивинилбензолом) или полиметакрилат. Силикагель, конечно, в настоящее время общепризнан.

Основные характеристики матрицы:

• Размер частиц (мкм);
• Размер внутренних пор (Å, нм).

Получение силикагеля для ВЭЖХ:

1. Формование микросфер поликремневой кислоты;

2. Сушка частиц силикагеля;

3. Воздушное сепарирование.

Частицы сорбента:

• Регулярные (сферические): выше устойчивость к давлению, выше стоимость;
• Несферические: ниже устойчивость к давлению.

Размер пор в ВЭЖХ — один из наиболее важных параметров. Чем меньше размер пор, тем хуже их проницаемость для молекул элюируемых веществ. А следовательно, тем хуже сорбционная ёмкость сорбентов. Чем крупнее поры, тем, во-первых, меньше механическая устойчивость частиц сорбента, а, во-вторых, тем меньше сорбционная поверхность, следовательно, хуже эффективность.

Прививки неподвижной фазы

Нормально-фазовая ВЭЖХ:

• Неподвижная фаза с пропилнитрильной прививкой (нитрильной);
• Неподвижная фаза с пропиламинной прививкой (аминной).

Обращенно-фазовая ВЭЖХ:

• Неподвижная фаза с алкильной прививкой;
• Неподвижная фаза с алкилсилильной прививкой.

Энд-кэппирование — защита непривитых участков сорбента дополнительной прививкой «маленькими» молекулами. Гидрофобный энд-кэппинг (С1, С2): выше селективность, хуже смачиваемость; гидрофильный энд-кэппинг (диол): ниже селективность, выше смачиваемость.

Масс-спектрометрия

Масс-спектрометрия (масс-спектроскопия, масс-спектрография, масс-спектральный анализ, масс-спектрометрический анализ) — метод исследования вещества, основанный на определении отношения массы к заряду ионов, образующихся при ионизации представляющих интерес компонентов пробы. Один из мощнейших способов качественной идентификации веществ, допускающий также и количественное определение. Можно сказать, что масс-спектрометрия — «взвешивание» молекул, находящихся в пробе.

История масс-спектрометрии ведётся с основополагающих опытов Дж. Дж. Томсона в начале XX века. Окончание «-метрия» в названии метода появилось после повсеместного перехода от детектирования заряженных частиц при помощи фотопластинок к электрическим измерениям ионных токов.

Особенно широкое применение масс-спектрометрия находит в анализе органических веществ, поскольку обеспечивает уверенную идентификацию как относительно простых, так и сложных молекул. Единственное общее требование — чтобы молекула поддавалась ионизации. Однако к настоящему времени придумано столько способов ионизации компонентов пробы, что масс-спектрометрию можно считать практически всеохватным методом.

Почти все масс-спектрометры — вакуумные приборы, поскольку ионы очень нестабильны в присутствии посторонних молекул.

Масс-спектр — зависимость интенсивности ионного тока (количества вещества) от отношения массы к заряду (природы вещества). Поскольку масса любой молекулы складывается из масс составляющих её атомов, масс-спектр всегда дискретен, хотя при низком разрешении масс-спектрометра пики разных масс могут перекрываться или даже сливаться. Природа анализируемого вещества, особенности метода ионизации и вторичные процессы в масс-спектрометре могут влиять на масс-спектр. Так, ионы с одинаковыми отношениями массы к заряду могут оказаться в разных частях спектра и даже сделать часть его непрерывным.

Большинство небольших молекул при ионизации приобретает только один положительный или отрицательный заряд. Чем больше молекула, тем больше вероятность того, что во время ионизации она превратится в многозарядный ион. Поэтому особенно сильно данный эффект проявляется в отношении крайне больших молекул, например, белков, нуклеиновых кислот и полимеров. При некоторых видах ионизации (например, электронный удар) молекула может распадаться на несколько характерных частей, что даёт дополнительные возможности идентификации и исследования структуры неизвестных веществ.

Точное определение массы анализируемой молекулы позволяет определить её элементный состав. Масс-спектрометрия также позволяет получить важную информацию об изотопном составе анализируемых.

История масс-спектрометрии

• 1912 год — Дж. Дж. Томсон создаёт первый масс-спектрограф и получает масс-спектры молекул кислорода, азота, угарного газа, углекислого газа и фосгена.

• 1913 год — С помощью своего масс-спектрографа Дж. Дж. Томсон открывает изотопы неона: неон-20 и неон-22.

• 1918 год — Артур Демпстер строит первый масс-спектрограф.

• 1919 год — Фрэнсис Астон, независимо от Демпстера, строит свой первый масс-спектрограф и начинает исследования изотопов. Этот прибор имел разрешающую способность около 130.

• 1923 год — Астон измеряет с помощью масс-спектрометра дефект массы.

• 1932 год — Кеннет Бейнбридж строит масс-спектрометр с разрешающей способностью 600 и чувствительностью 1 часть на 10 тыс.

• 1936 год — Артур Демпстер, Кеннет Бэйнбридж (англ. Kenneth Tompkins Bainbridge) и Йозеф Маттаух (англ. Josef Heinrich Elizabeth Mattauch) конструируют масс-спектрограф с двойной фокусировкой. Демпстер разрабатывает искровой источник ионизации.

• 1940 год — Альфред Нир с помощью препаративной масс-спектрометрии выделяет уран-235.

• 1940 год — Альфред Нир создаёт первый надёжный источник электронного удара, применив ионизационную камеру.

• 1942 год — Лоуренс запускает «калутрон» — промышленную установку по разделению изотопов урана, основанную на магнитно-секторном масс-спектрометре.

• 1946 год — Уильям Стивенс предлагает концепцию времяпролётного масс-спектрометра.

• 1948 год — Камероном и Эггерсом создан первый масс-спектрометр с времяпролётным масс-анализатором.

• 1952 год — В. Л. Тальрозе и А. К. Любимова впервые наблюдают сигнал метония CH₅⁺ в ионном источнике электронного удара при повышенном давлении метана в ионизационной камере (в 1966 году Мансон и Филд применят это открытие для аналитических целей и создадут ионный источник с химической ионизацией).

• 1953 год — Пауль патентует квадрупольный масс-анализатор и ионную ловушку.

• 1956 год — Фред МакЛафферти и Голке создают первый газовый хромато-масс-спектрометр.

• 1966 год — Мансон и Филд создают ионный источник с химической ионизацией.

• 1972 год — Каратаев и Мамырин изобретают время-пролётный масс-анализатор с фокусировкой, значительно улучшающий разрешение анализатора.

• 1974 год — Первый жидкостный хромато-масс-спектрометр создан Арпино, Болдуином и МакЛафферти

• 1981 год — Барбер, Бордоли, Седжвик и Тайлор создают ионизатор с бомбардировкой быстрыми атомами (FAB).

• 1982 год — Первый масс-спектр целого белка (инсулин) с помощью бомбардировки быстрыми атомами (FAB).

• 1983 год — Бланки и Бестал изобретают термоспрей.

• 1984 год — Л. Н. Галль, а затем Фенн публикуют работы по методу электроспрей.

• 1987 год — Карас, Бахман, Бар и Хилленкамп изобретают ионизацию лазерной десорбцией при содействии матрицы (MALDI).

• 1999 год — Александр Макаров изобретает электростатическую ионную ловушку «Орбитрэп».

Источники ионов

Первое, что надо сделать для того, чтобы получить масс-спектр, — превратить нейтральные молекулы и атомы, составляющие любое органическое или неорганическое вещество, в заряженные частицы — ионы. Этот процесс называется ионизацией и по-разному осуществляется для органических и неорганических веществ. Вторым необходимым условием является перевод ионов в газовую фазу в вакуумной части масс-спектрометра. Глубокий вакуум обеспечивает беспрепятственное движение ионов внутри масс-спектрометра, а при его отсутствии ионы рассеиваются и рекомбинируют (превращаются обратно в незаряженные частицы).

Условно способы ионизации органических веществ можно классифицировать по фазам, в которых находятся вещества перед ионизацией.

Газовая фаза

• электронная ионизация (EI)
• химическая ионизация (CI)
• Ионизация захватом электрона (англ.)русск. (EC)
• ионизация в электрическом поле (FI)

Жидкая фаза

• термоспрей
• ионизация при атмосферном давлении (AP)
• электроспрей (APESI)
• химическая ионизация при атмосферном давлении (APCI)
• фотоионизация при атмосферном давлении (APPI)

Твёрдая фаза

• прямая лазерная десорбция - масс-спектрометрия (LDMS)
• матрично-активированная лазерная десорбция/ионизация (MALDI)
• масс-спектрометрия вторичных ионов (SIMS)
• бомбардировка быстрыми атомами (FAB)
• десорбция в электрическом поле (FD)
• плазменная десорбция (PD)

В неорганической химии для анализа элементного состава применяются жёсткие методы ионизации, так как энергии связи атомов в твёрдом теле гораздо больше и значительно более жёсткие методы необходимо использовать для того, чтобы разорвать эти связи и получить ионы.

• ионизация в индуктивно-связанной плазме (ICP)
• термоионизация или поверхностная ионизация
• ионизация в тлеющем разряде и искровая ионизация
• ионизация в процессе лазерной абляции

Исторически первые методы ионизации были разработаны для газовой фазы. К сожалению, очень многие органические вещества невозможно испарить, то есть перевести в газовую фазу, без разложения. А это значит, что их нельзя ионизовать электронным ударом. Но среди таких веществ почти всё, что составляет живую ткань (белки, ДНК и т. д.), физиологически активные вещества, полимеры, то есть всё то, что сегодня представляет особый интерес. Масс-спектрометрия не стояла на месте и последние годы были разработаны специальные методы ионизации таких органических соединений. Сегодня используются, в основном, два из них — ионизация при атмосферном давлении и её подвиды — электроспрей (ESI), химическая ионизация при атмосферном давлении (APCI) и фотоионизация при атмосферном давлении (APPI), а также ионизация лазерной десорбцией при содействии матрицы (MALDI).

Масс-анализаторы

Полученные при ионизации ионы с помощью электрического поля переносятся в масс-анализатор. Там начинается второй этап масс- спектрометрического анализа — сортировка ионов по массам (точнее по отношению массы к заряду, или m/z). Существуют следующие типы масс-анализаторов:

непрерывные масс-анализаторы

• Магнитный и электростатический секторный масс-анализатор
• Квадрупольный масс-анализатор
• импульсные масс-анализаторы

• Времяпролётный масс-анализатор
• Ионная ловушка
• Квадрупольная линейная ловушка
• Масс-анализатор ионно-циклотронного резонанса с Фурье-преобразованием
• Орбитрэп

Разница между непрерывными и импульсными масс-анализаторами заключается в том, что в первых ионы поступают непрерывным потоком, а во вторых — порциями, через определённые интервалы времени.

Масс-спектрометр может иметь два масс-анализатора. Такой масс-спектрометр называют тандемным. Тандемные масс спектрометры применяются, как правило, вместе с «мягкими» методами ионизации, при которых не происходит фрагментации ионов анализируемых молекул (молекулярных ионов). Таким образом, первый масс-анализатор анализирует молекулярные ионы. Покидая первый масс-анализатор, молекулярные ионы фрагментируются под действием соударений с молекулами инертного газа или излучения лазера, после чего их фрагменты анализируются во втором масс-анализаторе. Наиболее распространёнными конфигурациями тандемных масс спектрометров являются квадруполь-квадрупольная и квадруполь-времяпролётная.

Детекторы

Итак, последним элементом описываемого нами упрощённого масс-спектрометра, является детектор заряженных частиц. Первые масс-спектрометры использовали в качестве детектора фотопластинку. Сейчас используются динодные вторично-электронные умножители, в которых ион, попадая на первый динод, выбивает из него пучок электронов, которые в свою очередь, попадая на следующий динод, выбивают из него ещё большее количество электронов и т. д. Другой вариант — фотоумножители, регистрирующие свечение, возникающее при бомбардировке ионами люминофора. Кроме того, используются микроканальные умножители, системы типа диодных матриц и коллекторы, собирающие все ионы, попавшие в данную точку пространства (коллекторы Фарадея).

Хромато-масс-спектрометрия

Масс-спектрометры используются для анализа органических и неорганических соединений.

Органические образцы в большинстве случаев представляют собой сложные смеси индивидуальных веществ. Например, показано, что запах жареной курицы составляют 400 компонентов (то есть, 400 индивидуальных органических соединений). Задача аналитики состоит в том, чтобы определить сколько компонентов составляют органическое вещество, узнать какие это компоненты (идентифицировать их) и узнать сколько каждого соединения содержится в смеси. Для этого идеальным является сочетание хроматографии с масс-спектрометрией. Газовая хроматография как нельзя лучше подходит для сочетания с ионным источником масс-спектрометра с ионизацией электронным ударом или химической ионизацией, поскольку в колонке хроматографа соединения уже находятся в газовой фазе. Приборы, в которых масс-спектрометрический детектор скомбинирован с газовым хроматографом, называются хромато-масс-спектрометрами («Хромасс»).

Многие органические соединения невозможно разделить на компоненты с помощью газовой хроматографии, но можно с помощью жидкостной хроматографии. Для сочетания жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией сегодня используют источники ионизации в электроспрее (ESI) и химической ионизации при атмосферном давлении (APCI), а комбинацию жидкостных хроматографов с масс-спектрометрами называют ЖХ/МС (англ. LC/MS). Самые мощные системы для органического анализа, востребованные современной протеомикой, строятся на основе сверхпроводящего магнита и работают по принципу ионно-циклотронного резонанса. Они также носят название FT/MS, поскольку в них используется Фурье преобразование сигнала.

Заключение

Современную клинико-лабораторную диагностику нельзя представить без метода высокоэффективной жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии, который позволяет диагностировать болезни. Медицина не обходится без масс-спектрометрии. Изотопная масс-спектрометрия углеродных атомов применяется для прямой медицинской диагностики инфицированности человека H. pylori и является самым надёжным из всех методов диагностики. Также масс-спектрометрия применяется для определения наличия допинга в крови спортсменов.

Список литературы

1. Кишкун, А. А. Руководство по лабораторным методам диагностики [Текст] / А. А. Кишкун. — Издательская группа «ГЭОТАР-Медиа», 2007. — 798 с.

2. Высокоэффективная жидкостная хроматография [Электронный ресурс] https://studfile.net (дата обращения 17. 11. 19)

3. Высокоэффективная жидкостная хроматография

 [Электронный ресурс] https://ru.wikipedia.org/ (дата обращения 17. 11. 19)

 

РЕФЕРАТ

Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии

 

ВЫПОЛНИЛ СТУДЕНТ

 

Фамилия, имя, отчество

Выползов

 

Михаил Александрович

 

Академическая группа

ББ-405

Курс

4

 

Формы обучения

Очная

 

 

 

«__» ______ 2019г.

 

   

 

 

 

 

 

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ

 

Фамилия, имя, отчество

Варфоломеева

 

Татьяна Александровна

  Ученая степень

кандидат биологических наук

  Ученое звание

Старший преподаватель

  Должность

Старший преподаватель кафедры радиационной биологии

 

 

 

 

 

 

«__» ______ 2019г.

                   

 

 

Челябинск

2019

 

Содержание

Введение………………………………………………………………..