Количественное определение холестерола липопротеинов высокой плотности в сыворотке крови человека

В связи с запретом использования биологических жидкостей (цельная человеческая кровь, нативная плазма, сыворотка) при проведении лабораторной работы используется имитатор сыворотки крови.

При определении количества холестерола липопротеинов высокой плотности в сыворотке крови из набора экспресс-метода Vital используются рабочий реагент и калибратор.

В качестве имитатора негемолизированной сыворотки крови используется имитатор, разработанный для работы «ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ОБЩЕГО ХОЛЕСТЕРОЛА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЭНЗИМАТИЧЕСКИМ МЕТОДОМ».

В связи с тем, что этот имитатор сыворотки крови, используемый в опытной пробе не представляется возможности центрифугировать, для проведения работы предлагается условный центрифугат – имитатор сыворотки крови разведенный в соотношении 1:4,5. Причем стандартный раствор используется разведенным в соотношении 1:4. Осаждающий реагент из набора не используется..

При проведении соответствующих измерений оптической плотности опытной и стандартной пробы против контроля (колориметрирование в зеленом светофильтре с длиной волны 490-500 нм): (см. Рабочая тетрадь по биологической химии для студентов 2 курса медицинского фаультета специализации «Лечебное дело» и «Педиатрия») получены следующие экстинкции:

Оптическая плотность опытной пробы -      Е_0п =0, 152

Оптическая плотность стандартной пробы - Е_ст=0,163 

Концентрация холестерола ЛПВП (α-холестерола)  рассчитывалась по формуле:

С = Ео/Ест × 1,29 (ммоль/л) = 0,152:0,163х1,29= 1,2 ммоль/л

Холестериновый индекс атерогенности (ХИА) с учетом вычисленного в предыдущей работе значения общего холестерола = 4,32 ммоль/л содержания холл составил:

ХИА = (общий холестерол – α-холестерол) / α-холестерол = (4,32-1,2):1,2=2,6, величина холестеринового индекса атерогенности находится в пределах нормы (≤3,0.)

Расчет необходимого количества наборов Vital для учебного процесса:

Лабораторная работа по указанной теме проходит в 19-ти группах медицинского факультета (специализации «Лечебное дело» и «Педиатрия»). 1 опыт выполняется парой студентов. В группах в среднем 12-14 студентов (6-7 пар)(а также специальности «Фармация» - 2группы - 12 пар, Институт биологии, экологии и агротехнологий – 4 группы – 20 пар;) следовательно:

19 х 7 =133 пары, т.е. в целом 133 опыта: 

19 х 7 =133 пары +12 пар + 20 пар = 165 пар, т.е. в целом 165 опытов: 

25 контрольных растворов 25 х 2мл = 50 мл рабочего реагента (выполняет 1 пара в группе)

70 стандартных растворов 70 х 2мл = 140 мл рабочего реагента; 70 х 0,2 мл = 14 мл станд. раствора

 70 опытных растворов   70 х 2мл = 140 мл рабочего реагента 70 х 0,2 мл = 14 мл имитатора             .                                                                                                                                                     сыворотки крови

Для поведения данной лабораторной работы в целом на курсе необходимо 330 мл рабочего реагента (500 мл с учетом потерь)

14 мл стандартного раствора (20 мл с учетом потерь)

14 мл имитатора сыворотки крови (20 мл с учетом потерь)

Потери стандартного раствора и имитатора сыворотки крови в основном связаны с использованием набора экспресс-метода Vital во время отработок лабораторных работ.

Количественное определение аскорбиновой кислоты в пищевых продуктах и моче

Курс «Фармация» 2 группы х 12 человек = 24 человека – 12 пар. Работа выполняется каждой парой.

Используемые пищевые продукты:

1. Яблоко        5. Картофель

2. Банан          6. Капуста квашеная

3. Киви            7. Лук репчатый

4. Апельсин

1. 10 %-й раствор HCl

Используется раствор, приготовленный для работы «Качественные реакции на витамины»

2. 0,001 N – ый раствор 2,6 – дихлорфенолиндофенола

Раствор применяется для титрования и готовится заранее в количестве 500 мл с учетом непредвиденных потерь.

3. 1 г опытного образца измельчают в фарфороывой ступке с 2 мл дистиллированной воды, переносят в мерную колбу на 25 мл и доводят водой до метки. Через 10 мин. Смесь фильтруют через бумажный фильтр. К 2 мл полученного фильтрата добавляют 2-3 капли раствора HCl-10 % и 2 мл дистиллированной воды. Содержимое переливают в колбу емкостью 50 мл и титруют 0,001 N раствором 2,6 – дихлорфенолиндофенола до появлеия розовой окраски не исчезающей в течение 30 минут. Колиество аскорбиновой кислоты определяют по формуле:

Х = (0,088 × А × 25 × 100) / Б × В (мг%),

где А – количество раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола (в мл), пошедшее на титрование;

В – количество сухого вещества в г, взятое для анализа;

Б – количество вытяжки в мл, взятое для титрования;

25 – общее количество вытяжки в мл;

0,088 – количество аскорбиновой кислоты в мг, эквивалентное 1 мл 0,001н раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола.