Глава 3. Результаты собственных исследований

На первом этапе работы нами проведен подбор оптимальной концентрации индуктора агрегации эритроцитов (альциановый голубой). По данным литературы альциановый синий является катионным красителем фталоцианиновой группы и обладает способностью связываться с гликолипидами, гликопротеидами и кислыми мукополисахаридами мембраны эритроцитов и тем самым вызывать их агрегацию. В низкой концентрации алциановый голубой не повреждает клетки, не проникает в цитоплазму, но сорбируется в количестве, пропорциональном содержанию белков и углеводов в гликокаликсе [21]. Данный индуктор используется для определения агрегационных свойств эритроцитов в концентрации 0,05% - 0,4%.

Мы проанализировали агрегацию эритроцитов здоровых лиц с использованием раствора альцианового синего в концентрации от 0,05% до 0,4%. При этом выявлено дозозависимое увеличение агрегации эритроцитов под действием данного индуктора. При концентрации 0,05% агрегация эритроцитов практически не наблюдалась, при 0,1% - слабовыраженная агрегация, при 0,2% - выраженная агрегация, при 0,4% - максимально выраженная агрегация эритроцитов, уже на первой минуте наблюдалось 100% светопропускание в пробе. На рисунке 3.1. представлены данные об изменении степени агрегации эритроцитов при различных концентрациях альцианового голубого.

Рисунок 3.1. - Степень агрегации эритроцитов на первой минуте, в зависимости от концентрации индуктора (альциановый голубой).

Значения показателей агрегации эритроцитов у обследованных пациентов и здоровых лиц при использовании в качестве индуктора агрегации 0,2% раствор альцианового голубого представлены в таблице 3.1.

Таблица 3.1 - Показатели агрегации эритроцитов у обследованных пациентов и здоровых лиц

Примечание. * - различия достоверны при сравнении с группой здоровых лиц (р < 0,05). Индуктор - 0,2% раствор алцианового голубого.

Как видно из таблицы 3.1., у больных хроническими рецидивирующими воспалительными заболеваниями по сравнению со здоровыми лицами отмечается увеличение скорости агрегации эритроцитов (37,3±2,2%/мин. - у больных, 28,8±1,7%/мин. - у здоровых, р<0,0136). Изменение данного показателя может быть связано с нарушением структуры и функциональных свойств мембран эритроцитов. Основным звеном конформационных изменений эритроцитарной мембраны является активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и белков с накоплением высокотоксичных первичных и вторичных продуктов обмена веществ, что влечет за собой повышение вязкости цитозоля, особенно в примембранных слоях - гликокаликсе. Кроме того, длительное влияние аномальных продуктов метаболизма, приводит к конформации белково-фосфолипидного бислоя мембраны эритроцитов, уплотнению их с резким снижением трансмембранной транспортной функции, формированием, так называемой, жесткой мембраны. С другой стороны, под действием мембраноповреждающих агентов (например, бактериальных токсинов) происходит образование дополнительных каналов проницаемости - кластеров, что влечет за собой увеличение диффузии пластических и энергетических субстратов, а также электролитов в клетку. Такие изменения приводят к нарушению деформируемости, формы и сорбционной способности эритроцитов, и как следствие нарушению их агрегационной способности [21]. Таким образом, данный показатель можно считать одним из факторов нарушения реологических свойств крови, и, в частности, при хроническом воспалении.

Интересно отметить, что показатель максимальной степени агрегации (MAX) имел более высокие значения в контрольной группе, чем в общей группе больных: 79,8±2,7% и 70,0±1,9% соответственно (р<0,006). По данным Акулёнка А.В. и Козловского В.И. максимальная степень агрегации эритроцитов у здоровых лиц при использовании в качестве индуктора альциановый синий в концентрации 0,05% составляет в среднем 36,4±1,45%. Возможно расхождение наших данных с результатами этих авторов связано с использованием нами более высокой концентрации индуктора. Эти же авторы отмечают, что у лиц с артериальной гипертензией наблюдалось увеличение агрегационной способности эритроцитов МАХ - 49,6±0,87%. В наших исследованиях показано, что при воспалительных процессах различной этиологии максимальная степень агрегации эритроцитов ниже, чем у здоровых лиц. В литературных источниках авторами приводятся лишь изменения показателей обратимой агрегации эритроцитов (ОАЭ) при воспалительных заболеваниях. Их изучение осуществлялось вибрационным фотометрическим способом. Они отмечают увеличение максимальной механической прочности агрегатов эритроцитов (Ud, В), индекса агрегации эритроцитов (Ja) и уменьшение значений минимальной механической прочности агрегатов эритроцитов (Uo, В), полупериода спонтанной агрегации эритроцитов (t, с), что в целом согласуется с нашими данными.

Показатель времени максимальной степени агрегации (Т) в группе больных и контроле не отличался: 8,2±0,2 мин. и 8,3±0,3 мин. соответственно.

С целью сравнения показателей агрегации эритроцитов у больных воспалительными заболеваниями различной этиологии были выделены и проанализированы следующие группы больных лиц: первая - больные с хроническим рецидивирующим фурункулезом, вторая - больные с другими воспалительными заболеваниями (герпетическая инфекция, хронический синусит, хронический ларингит и ЧДБ).

У больных с фурункулезом обнаружены достоверные различия показателей агрегации эритроцитов по сравнению с соответствующими значениями у здоровых: скорость агрегации (V) - 38,8±2,8%/мин. и 28,8±1,7%/мин. (р<0,009); максимальная степень агрегации (МАХ) - 70,4±2,4% и 79,8±2,7% (р<0,015) соответственно.

При сравнении двух отдельных групп (первая - больные с рецидивирующим фурункулезом, вторая - больные с герпетической инфекцией, хроническим синуситом, хроническим ларингитом и ЧДБ) статистически достоверных различий в показателях агрегации эритроцитов выявлено не было. Таким образом, роли этиологического фактора в нарушении агрегационных свойств эритроцитов установлено не было.

Нами проведен анализ взаимосвязи между показателями агрегации эритроцитов. При этом установлена статистически достоверная обратная связь между скоростью агрегации эритроцитов и временем максимальной степени агрегации эритроцитов (r = -0,45, р<0,029).

Как известно одним из косвенных способов оценки агрегации эритроцитов является определение СОЭ. Однако нами не выявлено статистически достоверной корреляции между показателем СОЭ и показателями агрегации эритроцитов у обследованных больных (показатель СОЭ находился в пределах нормы). Это доказывает, что СОЭ является достаточно малоинформативным методом для оценки агрегационных свойств эритроцитов, так как скорость седиментации эритроцитов находится в тесной зависимости от белкового состава плазмы крови и может указывать на наличие воспалительного процесса, но при этом не отражает функционального состояния мембраны эритроцитов.

.   У больных хроническими рецидивирующими воспалительными заболеваниями различной этиологии по сравнению со здоровыми лицами отмечается достоверное увеличение (р<0,0136) скорости агрегации эритроцитов, но снижение максимальной степени агрегации (р<0,006) под воздействием 0,2% раствора альцианового голубого.

.   Достоверных различий между больными с воспалительным процессом стафилококковой этиологии и нестафилококковой этиологии по показателям агрегации эритроцитов не выявлено.

.   Обнаружено наличие достоверной обратной связи (r = -0,45, р<0,029) между скоростью агрегации и временем максимальной степени агрегации.

Статистически достоверной корреляции между показателем СОЭ и показателями агрегации эритроцитов у обследованных больных выявлено не было.

Заключение

В ходе проведенной работы было изучено изменение агрегационной способности эритроцитов, как одного из показателей функциональных свойств красных клеток крови, у больных с хроническими рецидивирующими воспалительными заболеваниями различной этиологии.

При проведении исследований была определена оптимальная концентрация индуктора агрегации (альцианового голубого) - 0,2% для оценки функциональных свойств эритроцитов. Нами установлено, что у больных хроническими рецидивирующими воспалительными заболеваниями различной этиологии по сравнению со здоровыми лицами отмечается увеличение скорости агрегации эритроцитов, но снижение максимальной степени агрегации под воздействием 0,2% раствора альцианового голубого; достоверных различий между больными с воспалительным процессом стафилококковой этиологии и нестафилококковой этиологии по показателям агрегации эритроцитов не выявлено; обнаружено наличие достоверной обратной связи (r = -0,45, р<0,029) между скоростью агрегации и временем максимальной степени агрегации; статистически достоверной корреляции между показателем СОЭ и показателями агрегации эритроцитов у обследованных больных выявлено не было.

Таким образом, нарушение структурно-функциональных свойств эритроцитов и особенно их агрегационной способности является одним из патогенетических механизмов развития заболеваний и их осложнений, и в частности при хроническом воспалении. Данный процесс требует более детального изучения при конкретном заболевании, необходимо также определить наиболее эффективную методику для его оценки и внедрить в практическую лабораторную диагностику, как показатель нарушения функциональных свойств эритроцитов и реологических свойств крови.