Техника приготовления основных питательных сред

 

Для культивирования микробов в лабораторных усло­виях готовят питательные среды с учетом потребности в питательных веществах каждого вида в отдельности. Питательная среда в своем составе должна содержать углерод, водород, кислород, азот, фосфор, серу, магний, железо, микроэлементы и биостимуляторы роста. Различают питательные среды естественные (молоко, яйца, картофель и т. п.),искусственные, приготовленные из продуктов животного или раститель­ного происхождения, и синтетические (среды Чапека, Сабуро). По консистенции среды могут быть жидкими, полужидкими и плотными. Для приготовления плотных сред в жидкие среды добавляют агар-агар или желатин. Агар-агар представляет собой продукт переработки высушенных морских водорослей рода анфельция, состоящий в основном из полисахаридов. В холодной воде агар-агар набухает и размягчается, в горячей (90—100° С) расплавляется, образуя клееобразную массу. Застывает агар-агар при 40° С, образуя студень. Как питательное вещество агар-агар микробами не используется. Желатин получают путем вываривания кожи, костей и сухожилий животных. При нагревании с водой желатин образует коллоидный раствор, застывающий при 18—20° С в однородный коллоидный студень и рас­плавляющийся при 25—27° С. В бактериологической практике обычно применяют среды из продуктов животного и растительного происхождения, содержащие пептоны, экстрактивные вещества мяса, кровь, сыворотку, сусло, углеводы и т. п. Необходимые питательные вещества должны содержаться в среде в доступной форме и в определенных соотношениях. Питательные среды должны быть стерильными (должно быть обеспечено получение чистых культур микроорганизмов), прозрачными (выросшие на них мик­роорганизмы должны быть хорошо видны и иметь опре­деленную величину рН). Хранят готовые среды в прохладном месте, в плотно закрывающихся шкафах или ящиках, что предохраняет их от быстрого высыхания. Надолго хранившихся средах микробы развиваются слабо или совсем не растут.

Питательные среды принято делить на три группы:

1) стандартные (универсальные) — предназначаются для культивирования большинства микробов;

2 )специальные элективные, избирательные — предназначаются для выращивания только определен­ного вида микробов, рост других микроорганизмов на этих средах подавляется;

3) дифференциально-диагностические — предназначаются для изучения биохимических свойств микробов с целью дифференцирования различных видов микроорганизмов.

Сухой питательный агар. Содержит рыбный или мясной бульон, агар, хлористый и фосфорнокислый натрий. К 5 г порошка агара добавляют 100 мл холод­ной дистиллированной воды. Тщательно взбалтывают и нагревают при помешивании до полного растворения агара, не допуская пригорания. По мере надобности раствор фильтруют, разливают по пробиркам, стерилизуют при избыточном давлении 0,1 МПа в течение 20 мин.

 

Проведение исследования воздуха в различных помещениях

На питательную среду приготовленную из сухого питательного агара были произведены посевы в различных местах академии седиментационным методом.

Седиментационный метод основан на самопроизвольном оседании пылинок и капель вместе с микроорганизмами на поверхность плотной питательной среды в открытых чашках Петри.

Для определения ОМЧ воздуха пользуются правилом Омелянского. Считается, что на 100 см² агара за 5 мин оседает примерно столько микроорганизмов, сколько их содержится в 10 л воздуха.

Исследования проводились в следующих локациях: кабинет микробиологии (1), коридор на кафедре инфекционных и паразитарных болезней (2) и в деканате (3).

Открытые чашки Петри держали в помещении 5-10 мин. После чего их закрыли и поместили в термостат на сутки при температуре 37.6 C.

Результаты:

(1) В кабинете микробиологии – 1 колония

(2)  В коридоре – 4 колонии

(3)  В деканате - 5 колоний

Расчеты:

ОМЧвозд (общее микробное число) – количество микроорганизмов в 1м³ воздуха.

𝑆_чашки=П𝑟²= 3,14×4,75 = 70, 8 см²

Формула Омелянского где:

x – количество микробов в 1 м3;

a – количество колоний в агаре чашки;

b – площадь чашки

 

Вывод: Наименьшая загрязненность была отмечена в кабинете микробиологии (408), этому способствовала небольшое количество людей, а так же, стоит отметить, что предварительно проводилась влажная уборка помещения. Средняя загрязненность наблюдается в коридоре, так как там находится большее количество людей. Наибольшая загрязненность воздуха отмечается в деканате в связи с активным его посещением учащихся и преподавателей.

Изучение культуральных свойств выделенных культур микроорганизмов

Для изучения были взяты чашки Петри с различными количествами проросших колоний микроорганизмов. Для описания была взята одна, наиболее крупная колония и отмечена на нижней поверхности чашки Петри маркером.

При рассмотрении не вооруженным глазом было отмечено что: образовались видимые колонии преимущественно темно желтого цвета. Колонии имели небольшой размер, округлую форму, неровные волнистые края, поверхность колонии блестящая, гладкая, непрозрачная, плотная. Цвет равномерный. Колонии не выпуклые, плоские. На среде не наблюдалось разжижжения и помутнения.

 

 

Ознакомление с правилами содержания, кормления лабораторных животных

Виварий (лат. Vivarium- заповедник для дичи, зверинец) - по­мещение для содержания и разведения лабораторных животных, ис­пользуемых для научных целей и в практике органов ветеринарии и здравоохранения.

Виварии бывают весьма различные как по виду, так и по количеству находящихся в них животных, что определяется особенностями научных исследований. Виварии могут быть исполь­зованы не только для содержания, но и для увеличения поголовья лабораторных животных.

В лабораторной практике разделяют два понятия: виварий - по­мещение для содержания в надлежащих условиях животных, на­ходящиеся в состоянии опыта, и питомник - помещение для раз­множения и содержания животных до использования их.

Беспере­бойное снабжение лаборатории животными возможно только при организации крупных питомников, руководимых квалифицирован­ными специалистами и находящихся под жестким ветеринарно санитарным контролем.

Устройство виварий определяется в первую очередь видовым составом животных, в связи с чем различают виварии специализи­рованные (псарни, обезьянники и т.д.) и общего или комплексного типа, обеспечивающие содержание различных животных - собак, кошек, кроликов, морских свинок, белых крыс, мышей.

Виварий также могут включать аквариумы для пресноводных и морских жи­вотных, террариумы для амфибий и рептилий, вольеры и клетки для птиц и другие приспособленные помещения для разных видов мле­копитающих. 

Для ухода за животными после сложных операций в современных вивариях устраивают, так назы­ваемые клиники, где животным создают особенно благоприятные ус­ловия и где они находятся под постоянным наблюдением.

  Клинические помещения могут также использоваться для дли­тельного содержания животных, требующих специального ухода. В случае необходимости при устройстве клиник предусматриваются как общие, так и одиночные палаты.

Обязательно должны быть спе­циально оборудованные помещения, позволяющие проводить сан­обработку, как вновь поступивших животных, так и назначенных на операцию или используемых в длительных экспериментах, требую­щих соблюдения определенных санитарно-гигиенических условий (условно-рефлекторные опыты и др.).

В ряде случаев совершенно необходимо иметь в виварии спе­циально оборудованную дезинфекционную камеру, позволяющую быстро обрабатывать зараженные клетки, спецодежду сотрудников и подсобный инвентарь.

Должно быть предусмотрено помещение для вскрытия павших животных и хранения трупов.

Виварий обо­рудуются кухней с раздаточной, мойкой и складскими помещениями для хранения продуктов и запасного инвентаря. 

Следует отдать предпочтение относительно небольшим по­мещениям для животных. В них меньше шума, который беспокоит животных, их легче вентилировать и поддерживать в них чистоту, наконец, они представляют меньшую опасность в инфекционном отношении.

По форме помещения для животных должны быть ско­рее удлиненными, а не квадратными, чем достигается более эко­номное использование пространства.

По истечении карантинного срока животных перево­дят в экспериментальную секцию. Мышей, крыс, морских сви­нок и кроликов содержат в клетках, установленных на ме­таллических стеллажах. Грызуны содержатся в клетках со сплошным дном на подстилке или с сетчатым дном-полом. Подстилочным материалом могут служить древесные опил­ки, стружка, волокнистый торф, мягкая солома. Подстилки заранее автоклавируют или дезинфицируют в сухожаровой печи при температуре 150—180°С в течение 15—20 мин. При размещении животных по клеткам следует исходить из при­водимых ниже нормативов.

Примечание: Для примерного определения производственной площади сле­дует исходить из расчета, что 1 см площади дна клетки должен приходиться на 1 г массы животного. Стеллажи размещаются в основном вдоль стен и должны занимать примерно 0,4 м производственной площади. В каждом отдельном помещении вивария рекомендуется содержать только один вид животных. Если по условиям эксперимента в одной секции совместно содержатся живот­ные разных видов, размещать их следует на разных стел­лажах. На каждой клетке с животными вывешивают паспор­та, образец которого приводится ниже.

Нормы площади для содержания лабораторных животных

Вид животных	Минимальная площадь дна клетки на одно животное, см2	Максимально допустимое число живот­ных в клетке	Число животных на 1 м2 пло­щади пола помещения (взрослых / молодняка)
Мыши	40	15	65 / 240
Крысы	150	10	20 / 100
Морские свинки	300	5	15—18
Кролики	2000	1	3—4

На клетках подопытных животных, которые могут явить­ся источником заражения человека, укрепляют паспорта яр­кого цвета. Животные, наиболее опасные в смысле возможности заражения окружающих, содержатся в изоляторе в ме­таллических клетках или стеклянных банках в металличе­ской оправе.

Отделение (лаборато­рия)

Клетка N^o,..

Вид, линия, пол живот­ных

Возраст... Дата поступления

(фамилия экспери­ментатора)

Начало эксперимента

Окончание экспери­мента

Особые отметки

При уходе за животными, зараженными особо опасными инфекциями, персонал должен надевать два халата, резино­вый фартук, нарукавники, резиновые перчатки, маску и га­лоши. В заразное помещение разрешается входить только рабо­чим, обслуживающим животных, и научно-техническим со­трудникам, участвующим в опыте. Трупы животных, погибших в ходе эксперимента, до вскрытия хранятся в специальном холодильнике (не более суток). Вскрытие животных производится экспериментато­ром. В случае гибели животного вне зависимости от опыта на вскрытии присутствует представитель вивария. Каждый случай падежа или вынужденного забоя животных фикси­руется в специальном журнале по приводимой ниже форме.

 

Журнал регистрации павших или вынужденно забитых животных

Дата	Вид животных	Секция животных	Предполагаемый диагноз	Результаты вскрытия	Кто производил вскрытие		Результат экспертизы

 

После вскрытия трупы заразных животных сжигают под контролем ответственного лица, выделенного администраци­ей, трупы незараженных животных сдают утильзаводу в во­донепроницаемых металлических ящиках с обязательным оформлением соответствующей документации. Работа по уходу и содержанию лабораторных животных строится в соответствии с распорядком дня и регламентом работы, утвержденным руководителем учреждения. В рас­порядке дня предусматривается время на санитарную обра­ботку помещения и оборудования, раздачу кормов и прове­дение экспериментальных работ и манипуляций. Клетки для индивидуального содержания кроликов делают обычно деревянными, длиной 75 см, шириной 45—50 см и высотой 50—55 см, с ре­шетчатым полом, под которым должен быть железный приемник (противень). Переднюю стенку клетки обивают металлической сеткой с диаметром ячеек в 2—3 см. Клетки для морских свинок такие же, как и для кроликов, но несколько меньших размеров (65´55´40 см). В клетках одноярусного содержания оби­вают сеткой снимающийся верх клетки, а при двухъярусном—одну из боко­вых стенок. Клетки для белых мышей делают металлическими, размером 50´40´30 см, вставляемыми в противень, на дно которого насыпают мелкий, сухой торф или опилки. Стенки такой клетки—переднюю (дверка), одну боковую, верхнюю и дно—обтягивают мелкой сеткой. Внутри клетки помещается сет­чатое гнездо. При очистке клетку поднимают, и все нечистоты через сетку попадают в противень. Для мышей можно применять деревянные клетки того же размера, что и металлические, с сетчатыми передней (дверка) и верх­ней стенками. Белых мышей помещают в клетки группами, из расчета 6‑8 самок и 1 самец, а для крыс—2‑4 самки и 1 самец в каждой. Клетки должны иметь затемненное отделение для устройства гнезда и отдыха белых мы­шей и крыс. Клетки располагают на стеллажах, рядами, в один или 2—3 яруса, на расстоянии 40—50 см от пола и стен в целях защиты животных от диких грызунов (крыс, хорьков). Клетки нужно регулярно, не реже одного раза в три дня, очищать и мыть горячей водой. После такой обработки клетки высушивают огнем паяльной лампы, а в летнее время—на солнце. В сырые клетки помещать животных нельзя. Нечистоты из питомника следует удалять немедленно после уборки в специально определенное для этой цели место.

Некоторые общие сведения о лабораторных животных мы приводим в виде таблицы.

Общие сведения о лабораторных животных

	Собака	Кошка	Кролик	Морск. свинка	Крыса	Мышь	Курица	Голубь	Лягушка
Продолжитель­ность жизни (в годах)	15-20	10-12	4-9	6-8	2-2,5	1,5-2	10-14	10	6-7
Продолжитель­ность беремен­ности (в днях)	60-63	56	30	60-68	20-30	20-25	21	18
Количество детенышей	1-10	3-6	3-5-15	1-6	5-9	5-9
Количество по­метов в год	2	2-3	3-5	3-5	4-7	4-7
Продолжитель­ность лакта­ционного пе­риода у са­мок (в днях)	30-40	30-40	30-50	30	30	25-35
Время удвое­ния веса те­ла новорожденных (в днях)	8	9	6	12
Время отделе­ния от мате­ри детены­шей (в неделях)	6-8	8	6-8	3-5	2,5-3	3-4
То же, самцов от самок (в месяцах)			4	2	1-1,5	1-1,5
Соотношение ко­л-ва сам­цов и самок в питомнике			1:10-12	1:5-10	1:1-4	1:5-8
Возраст первой случ­ки (в месяцах)	12	6-8	6-10	4-6	3,5-4	2,5-3
Предел производительности самцов (в годах)			2-2,5	2,5-3	1-2	1-1,5
Температура тела	37,5-39°	38-39°	38,5-39,5°	38-39°	38,5-39,3°	37-39°	40,5-42°	41-43°
Количество ударов серд­ца (в минуту)	70-150	120-140	120-150	130-790		520-780	312	244	35
Количество крови (отношение к ве­су тела)	1:14,5	1:5	1:18	1:17	1:13		1:11	1:10	1:15
Число дыха­тельных движений (в минуту)	14-24	20-30	50-60	100-150	»30		40-50	50-70

Приложение

Отчет по физиологии и этологии животных.

Исследования проводились на собаке по кличке Фаер Харт, возраст 5 лет, порода Йоркширский терьер – мини.

 

Физиология пищеварения