Главныепринципыиособенностипосевабактерий

Главныепринципыиособенностипосевабактерий

Посев различных бактерий представляет собой один из наиболее эффективных и широко распространенных способов, который в настоящее время активно применяется в сфере медицинской микробиологии.

 

Также данный метод незаменим в области биотехнологии, где он играет важную роль в изучении различных свойств как биологического, так и биохимического характера.

 

Под данным методом подразумевается процесс культивирования микроскопических организмов с использованием питательных сред, различающихся между собой по характеристикам и свойствам.

 

Бактериологические посевы могут проводиться с целью:

· тщательного исследования отделяемых клеток глаз, половых органов человека,

· а также с целью максимально точного анализа крови, мочи или кала,

· посевы спермы и мокроты для исследования.

· довольно часто проводится посев на анаэробные бактерии.

Питательные среды для микроорганизмов

При выборе среды для осуществления посева в первую очередь следует ориентироваться на характер содержания, присущего бактериям, которые являются главным объектом исследования.

 

Питательные среды должны

· содержать все макро и микроэлементы.

· иметь достаточную влажность - не менее 20 % воды.

· концентрация солей должна соответствовать концентрации солей в микробной клетке.

· концентрация водородных ионов (ph среды) должна быть оптимальной – 4,5 – 8,5

· окислительно - восстановительный потенциал (Еh) среды должен соответствовать потребностям микроорганизма – для анаэробов – 0,120-0,060 В; для аэробов – более 0, 080 В.

· питательная среда должна быть стерильной.

 

Для приготовления питательных сред используют мясо, рыбную муку, молоко, яйца, кровь, картофель, дрожжи, сухие консервированные порошки.

Стерилизуют при t 120 гр. С.

Готовые стерильные среды подвергают контролю на стерильность путем выдерживания в термостате при температуре 37 гр. в течение 1 – 3 суток.

В том случае, если необходимо получить изолированные колонии бактерий, а также определить чистую культуру, следует выполнять посев на плотные питательные среды.

Но если материал, подверженный исследованию, содержит в себе не очень большое количество микроорганизмов, можно в этих целях использовать жидкую питательную среду.

Существует несколько разновидностей питательных сред, в которых осуществляется бактериальный посев.

Различают среды:

I.

1. простые

2. специальные

II.

3. элективные

4. дифференциально-диагностические.

Каждая категория питательных сред отличается своими индивидуальными особенностями и характеристиками.

 

I. Простые и специальные питательные среды бывают:

 

· плотными,

· жидкими.

 

Плотные - это мясопептонный агар,

Жидкие - мясопептонный бульон.

 

Главной особенностью специальныхсред является абсолютная замена основы либо смешивание ее с другим компонентом, обладающим специфическими свойствами и характеристиками.

В результате такого процесса можно выделить следующие виды питательных сред:

· агар на основе сыворотки;

· агар на основе казеина и активированного угля;

· яичная среда, открытая бактериологами Леванштейном и Йенсеном;

· бульон на основе агара и стерильной дефибринированной крови кролика, лошади или барана.

II. Элективные и дифференциально-диагностические питательные среды

Отличительной чертой является получение роста только того из микроорганизмов, который на данный момент представляет интерес для исследования.

К элективным средам относят:

· пептонную воду; (для исследования холерного вибриона)

· щелочной агар; (для исследования холерного вибриона)

· среду Мюллера; (для исследования сальмонелл)

· среду Леффлера; (для исследования коринебактерий дифтерии)

· желточно-солевой агар; (для исследования стафилококка)

· селенитовую среду. (для исследования сальмонелл)

 

При помощи дифференциально-диагностических питательных сред проводится максимально точная идентификация отдельно взятых категорий, групп и типов бактерий.

 

Выделяют два основных типа ДДПС:

· среда Сабуро, для которой характерно добавление антибиотика;

· среды Гисса, известные под названием «пестрый ряд».

Способы и техники посева

 

Принято различать несколько техник и методов посева.

В основном данный процесс осуществляется при помощи специальных микробиологических петель.

При посеве на специальные чашки Петри применяются особые иглы или шпатели, изготовленные из стекла или металла.

Для жидких материалов применяют специальную петлю в сочетании с пипетками – пастеровскими или градуированными.

Чашка Петри предназначена специально для осуществления посева на плотные питательные среды. Изобретена в 1877 году знаменитым немецким бактериологом ЮлиусомРизардом Петри, который являлся ассистентом микробиолога Роберта Коха(первооткрыватель плотных питательных сред. Разработанные Кохом методы выделения и культивирования микроорганизмов в лабораторных условиях позволили открыть ряд возбудителей инфекционных заболеваний).

 

Для изготовления чашки Петри, как правило, используют стекло либо полистирол с прозрачной текстурой.

Самый широко используемый размер чашки Петри – высота до 15 миллиметров и диаметр от 50 до 100 миллиметров.

 

Для посева немного приоткрывают крышку чашки Петри, а затем наносят на поверхность плотной питательной среды – агара – требуемое количество посевного материала.

 

После инкубациибакпосева, бактерии начнут расти густо и равномерно, превращаясь в полноценную культуру и подразделяясь на отдельные колонии.

В данном процессе можно использоваться как стеклянные, так и пластмассовые чашки Петри.

Стеклянные предназначается для многоразового, пластиковые – для одноразового применения. Пластиковые чашки Петри являются стерильными, а поставляют их в специальных надежных герметических упаковках. Стеклянные сосуды требуют тщательной стерилизации перед осуществлением каждого нового посева.

Если при бакпосеве на плотные среды применяются чашки Петри, то в случае с жидкими средами можно использовать пробирки.

 

Посев на секторы.

 

· Дно чашки расчерчивают на секторы.

· Посев производят зигзагообразными движениями от края чашки к центру так, чтобы штрихи с одного сектора не переходили на другой.

Посев газоном.

 

· 1 мл исследуемого материала (жидкой бульонной культуры или взвеси микробов в физиологическом растворе) наносят пипеткой и тщательно распределяют по всей поверхности среды.

· Избыток материала отсасывают пипеткой и вместе с ней помещают в дезинфицирующий раствор.

После посева чашки закрывают и переворачивают вверх дном.

Надписи на чашках делают со стороны дна.

На пробирках – в верхней части.

 

Чтобы очистить бактериальные культуры, загрязненные грибами или микроорганизмами из природных популяций, добавляют в среду вещества, подавляющие рост тех или иных микроорганизмов, (например, нистатин в культуру, сильно загрязненную грибами).

 

Посевы инкубируются в термостате 18 – 24 часов. В течение этого времени из отдельных микробных клеток формируются изолированные колонии.

2. Второй этап исследования – изучение изолированных колоний.

Колония – это изолированное скопление микробных клеток одного вида на плотной питательной среде.

Каждому виду микробов присуща типичная форма колоний.

ЖЕЛЧЬ

1. Желчь собирают при зондировании в процедурном кабинете отдельно по порциям А, В и С в три стерильные пробирки с плотно закрывающимися крышками.

2. Полученные порции желчи желательно доставить в лабораторию не позднее 1-2 ч от момента взятия.

3. При невозможности доставить материал в указанный срок, допускается хранение.

ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОМЫВНЫХ ВОД, ЛАВАЖА (ИЗ ЖЕЛУДКА)

1. Материал собирается рано утром, до еды, пока пациент еще в постели.

2. Вводят назо-гастральный зонд через нос в желудок.

3. Желудок промывают 25-50 мл охлажденной дистиллированной водой.

4. Далее жидкость отсасывается и помещается в стерильный контейнер. Крышку плотно закрывают.

5. Аккуратно, следуя правилам, удаляют зонд.

6. Материал может храниться не более 2-х часов при комнатной температуре и не более 24-х часов при 2-8С.

ОТДЕЛЯЕМОЕ УРЕТРЫ

1. Перед взятием мазка на посев проводится туалет наружных половых органов для снижения контаминации пробы с помощью стерильных салфеток и дистиллированной воды.

2. Материал собирают не ранее, чем через 2 часа после мочеиспускания.

3. Для стимуляции выделений нежно массируют уретру, отделяемое собирают стерильным тампоном, входящим в состав транспортной среды Эймс с углем.

4. Если отделяемое получить не удается, в уретру вводят стерильный тампон на глубину 1-2 см, аккуратно вращают его в течение 10 сек., вынимают, помещают в транспортную среду Эймс с углем.

5. Для исследования на микоплазмы транспортной средой является флакончик с бульоном светло-желтого цвета, на трихомонады флакончик с транспортной средой для трихомонад. Для сбора материала используют сухой тампон без среды, находящийся в индивидуальной стерильной упаковке.

6. Материал хранится, помещенный в транспортную среду, в зависимости от вида исследования

ОТДЕЛЯЕМОЕ ВЛАГАЛИЩА

1. Материал берут до проведения мануальных исследований.

2. Зеркало и подъемник вводят во влагалище, стерильной салфеткой убирают избыток выделений и слизи. Материал собирают из заднего свода или с патологически измененных участков стерильным тампоном, входящим в состав транспортной системы со средой Эймс с углем.

3. При исследовании на уреа/микоплазмы для сбора материала используют сухой тампон, находящийся в индивидуальной стерильной упаковке. После того, как материал получен, его суспендируют во флаконе для микоплазм.

4. При посеве на трихомонады для сбора материала используют сухой тампон, находящийся в индивидуальной стерильной упаковке. После того, как материал получен, его суспендируют во флаконе с транспортной средой для трихомонад.

ОТДЕЛЯЕМОЕ ШЕЙКИ МАТКИ

1. Обнажают шейку матки с помощью зеркал и влагалищную ее часть и убирают избыток выделений и слизи стерильной марлевой салфеткой или ватным шариком, смоченными стерильным физиологическим раствором или дистиллированной водой. Далее вытирают салфеткой избыток влаги.

2. Тонкий стерильный тампон (входящий в состав транспортной системы) аккуратно вводят в цервикальный канал и вращают 10 сек., не касаясь стенок влагалища.

3. Для посева можно использовать соскоб слизистой, полученный при диагностическом выскабливании стенок цервикального канала. В этом случае материал переносится на тампон и погружается в пробирку с транспортной средой Эймс с углем.

4. При исследовании на уреа/микоплазмы и трихомонады материал берут так же, как описано выше.

СОДЕРЖИМОЕ ПОЛОСТИ МАТКИ

1. Используют специальные инструменты типа шприца-аспиратора, имеющего на зонде покрытие.

2. При введении зонда в полость матки раскрывают наружную оболочку зонда и набирают в шприц содержимое матки.

3. Закрывают наружную оболочку и выводят зонд из матки.

4. Материал из шприца помещают на тампон и погружают в транспортную среду Эймс с углем.

 

В контейнер «Уро-тампон»

1. Вымойте руки с мылом.

2. Отведите назад крайнюю плоть (если она не обрезана), головку полового члена вымойте с мылом теплой кипяченой водой, просушите с помощью чистой салфетки.

3. Подготовьте контейнер, приоткрыв крышку контейнера так, чтобы ее можно было снять одной рукой. Не дотрагивайтесь руками до внутренних стенок контейнера и крышки.

4. Выпустите небольшое количество мочи в унитаз. Приостановите мочеиспускание.

5. Удерживая крайнюю плоть в отведенном положении, направьте струю мочи в контейнер и наполните его до половины объема, при этом старайтесь не касаться краев контейнера. Объем мочи должен быть не менее 1/3 контейнера.

6. Открутить крышку пробирки «Уро-тампон» и извлечь аппликатор с губкой.

7. Опустить губчатый тампон в образец мочи на 5 секунд, пока губка полностью не пропитается мочой (вар.1) или непосредственно помочиться на тампон (вар. 2).

8. Вернуть аппликатор с тампоном в пробирку и плотно ее закрыть.

9. Произвести маркировку пробы на этикетке, находящейся на пробирке. Внимание! Губку, находящуюся в пробирке не отжимать.

ОТДЕЛЯЕМОЕ УРЕТРЫ

1. Материал собирают не ранее, чем через 2-3 часа после мочеиспускания.

2. Перед взятием мазка из уретры, кожу обрабатывают салфеткой, смоченной стерильным физиологическим раствором или дистиллированной водой. Высушивают стерильной салфеткой.

3. В уретру на глубину 2-4 см аккуратно вводят стерильный тампон на тонком аппликаторе, входящий в состав транспортной системы Эймс с углём. Нежно, но интенсивно вращают им внутри в течение 10 сек., после чего тампон помещают в пробирку со средой.

4. Если проводится исследование на уреа/микоплазмы или трихомонады, для сбора материала используется тампон без среды, находящийся в индивидуальной стерильной упаковке. Клетки и слизь с тампона тщательно суспендируют в соответствующий флакон с жидкой средой (просьба, не путать флаконы для трихомонад и микоплазм).

СЕКРЕТ ПРОСТАТЫ

1. Перед сбором материала проводят тщательный туалет наружных половых органов с помощью мыла и кипяченой воды.

2. Проводят ручной массаж простаты через прямую кишку.

3. Материал собирают в стерильную пробирку, а затем используют транспортную систему со средой Эймс. Пропитайте жидкостью стерильный тампон и поместите его в пробирку с транспортной средой.

4. Если проводится исследование на уреа/микоплазмы, собранный материал в количестве 0,5 мл (несколько капель) помещается во флакончик с транспортной средой для микоплазм.

5. При посеве на трихомонады секрет простаты сначала собирается в стерильный контейнер с крышкой, а затем аккуратно переливается во флакончик с транспортной средой для трихомонад в количестве 0,5-1,0 мл. Можно сразу собрать секрет простаты во флакончик.

МАЗКИ ИЗ НОСА

1. Для обоих носовых ходов используется один тампон с транспортной средой Эймс.

АСПИРАТ ИЗ ПАЗУХ

1. Производят пункцию верхнечелюстной пазухи, соблюдая правила асептики.

2. Далее содержимое аспирационного шприца переносят на стерильный тампон, входящий в состав транспортной системы Эймс с углем (можно небольшое количество жидкости добавить в пробирку с транспортной средой).

ЖИДКОСТЬ ПРИ ТИМПАНОЦЕНТЕЗЕ

1. Очищают наружный слуховой проход слабым раствором антисептика.

2. Если барабанная перепонка не нарушена, ушной канал промывают мыльным раствором, ополаскивают, высушивают, и, используя аспирационную технику, набирают жидкость в шприц. Далее аспират из шприца переносят на стерильный тампон, входящий в состав транспортной системы Эймс с углем (можно небольшое количество жидкости добавить в пробирку с транспортной средой).

3. При прободении барабанной перепонки экссудат собирают стерильным тампоном, входящим в состав транспортной системы Эймс с углем, используя слуховое зеркало.

4. После взятия материала тампон погружают в пробирку со средой.

ТРАХЕОБРОНХИАЛЬНЫЕ СМЫВЫ

1. Исследуют при отсутствии мокроты или невозможности ее выделить естественным путем.

2. Гортанным шприцем в трахею вводят не более 5 мл стерильного физиологического раствора с последующим его отсасыванием в стерильную пробирку с желтой крышкой.

3. Бронхиальные смывы, в том числе вблизи очага воспаления, могут быть сделаны с помощью бронхоскопа.

4. Смывную жидкость помещают в стерильный контейнер с крышкой. Крышку плотно закрывают.

ПЛЕВРАЛЬНАЯ ЖИДКОСТЬ

1. Кожу перед пункцией обрабатывают 2% раствором йода, а затем 70% этиловым спиртом.

2. Делают прокол и собирают жидкость в стерильную пробирку с соблюдением правил асептики.

3. Во время получения материала участвуют двое, один пунктирует, другой открывает крышку пробирки в нужный момент, стараясь не прикасаться руками к верхнему краю пробирки и внутренней поверхности крышки.

ОТДЕЛЯЕМОЕ КОНЬЮНКТИВЫ

1. Материал для посева забирается утром до умывания.

2. При наличии обильного гнойного отделяемого используют стерильный тампон, входящий в состав транспортной системы Эймс с углем. Гной собирают с внутренней поверхности нижнего века движением от наружного к внутреннему углу глазной щели.

3. Необходимо следить, чтобы при моргании ресницы не касались тампона (придерживать веки руками).

4. При скудном отделяемом тампон предварительно смачивают стерильным физиологическим раствором или стерильной дистиллированной водой. Избыток влаги отжимают о внутреннюю поверхность ёмкости, далее собирают материал, как описано в пункте 1.

СОСКОБ С РОГОВИЦЫ

1. В каждый глаз закапывается местный анестетик.

2. При помощи стерильной лопаточки делают соскоб с язвы или другого образования.

3. Если больной применяет контактные линзы, необходимо исследовать их внутреннюю поверхность.

4. Из полученного материала делают мазок на стекле для микроскопического исследования, для этого используют тампон без транспортной среды в индивидуальной стерильной упаковке.

5. На посев берут мазок тампоном, входящим в состав транспортной системы со средой Эймс с углем.

ЦЕЛЛЮЛИТ

1. Поверхность кожи над местом наибольшего воспаления обрабатывают салфеткой, смоченной стерильным физиологическим раствором или 70% спиртом.

2. С помощью иглы и шприца аспирируют содержимое из мягких тканей, далее через эту же иглу набирают в шприц небольшое количество стерильного физиологического раствора.

3. Жидкостью из шприца пропитывают тампон, который погружают в транспортную среду Эймс с углем, часть жидкости (несколько капель) можно добавить в пробирку.

ПРОЛЕЖНИ, ЯЗВЫ

1. Поверхность пролежня (язвы) и кожу вокруг обрабатывают стерильным физиологическим раствором.

2. Материал получают путем энергичного надавливания тампоном на дно язвы. Поверхностный экссудат для исследования непригоден.

3. Тампон с полученным материалом помещают в транспортную среду Эймс с углем.

АБСЦЕСС (ОТКРЫТЫЙ)

1. Удалите поверхностный экcсудат салфеткой, смоченной стерильным физиологическим раствором.

2. Удалите жидкость из глубины.

3. Энергично прикасаясь, соберите тампоном исследуемый материал или удалите кусочек с приподнятого края абсцесса.

4. Поместите тампон в пробирку с транспортной средой.

АБСЦЕСС ЛИМФОУЗЛА

1. Обработайте поверхность кожи (слизистой) салфеткой, смоченной 70% спиртом, высушите стерильной марлевой салфеткой.

2. Проколите стенку абсцесса с помощью иглы и шприца и наберите содержимое, соблюдая правила асептики, перенесите на тампон, входящий в состав транспортной системы Эймс с углем.

3. Далее поместите тампон в транспортную среду.

БУККАЛЬНЫЙ ЦЕЛЛЮЛИТ

1. Промойте поверхность слизистой над местом наибольшего воспаления салфеткой, смоченной стерильным физиологическим раствором.

2. С помощью иглы и шприца попробуйте аспирировать содержимое из мягких тканей, далее наберите в шприц через эту же иглу небольшое количество стерильного физиологического раствора.

3. Перенесите жидкость из шприца в стерильную сухую пробирку.

4. Вскройте упаковку с транспортной средой Эймс, пропитайте тампон собранной в пробирку жидкостью и поместите его в пробирку со средой.

Упаковка: 490шт.

Контейнеры для сбора анализов (мочи) 60мл, СТЕРИЛЬНЫЕ + НАКЛЕЙКА (индивидуальная упаковка)

БАНОЧКИ (контейнеры) полимерные для хранения и транспортировки образцов биоматериалов (мочи) 100мл, с завинчивающейся крышкой, градуировкой и полем для маркировки, СТЕРИЛЬНЫЕ (арт. 3С-А).Упаковка: 200шт.

БАНОЧКИ (контейнеры) полимерные для хранения и транспортировки образцов биоматериалов (мочи) 100мл, с завинчивающейся крышкой, градуировкой и полем для маркировки, НЕСТЕРИЛЬНЫЕ (арт. 3-А).

Упаковка: 250шт.

Упаковка: 250шт.

Контейнеры для сбора анализов 100мл с ложкой, СТЕРИЛЬНЫЕ (индивидуальная упаковка)

БАНОЧКИ (контейнеры) полимерные для хранения и транспортировки образцов биоматериалов 100мл СТЕРИЛЬНЫЕ с ложкой, с завинчивающейся крышкой и полем для маркировки (арт. 3С-Б). Матовые полупрозрачные.

Упаковка: 250шт.

 

Контейнеры для сбора анализов (мочи) 150мл, СТЕРИЛЬНЫЕ (индивидуальная упаковка)

БАНОЧКИ (контейнеры) полимерные для хранения и транспортировки образцов биоматериалов 150мл СТЕРИЛЬНЫЕ, с завинчивающейся крышкой и полем для маркировки (арт. SCP-521). Матовые полупрозрачные.

Упаковка: 500шт.

Контейнеры для сбора анализов (мочи) 30мл, СТЕРИЛЬНЫЕ + НАКЛЕЙКА (индивидуальная упаковка)

БАНОЧКИ (Контейнеры) полимерные для хранения и транспортировки образцов биоматериалов (мочи) 30мл СТЕРИЛЬНЫЕ, с завинчивающейся крышкой и поле маркировки - НАКЛЕЙКА (арт. SCS-301, 311).Упаковка: 400шт.

Главныепринципыиособенностипосевабактерий

Посев различных бактерий представляет собой один из наиболее эффективных и широко распространенных способов, который в настоящее время активно применяется в сфере медицинской микробиологии.

 

Также данный метод незаменим в области биотехнологии, где он играет важную роль в изучении различных свойств как биологического, так и биохимического характера.

 

Под данным методом подразумевается процесс культивирования микроскопических организмов с использованием питательных сред, различающихся между собой по характеристикам и свойствам.

 

Бактериологические посевы могут проводиться с целью:

· тщательного исследования отделяемых клеток глаз, половых органов человека,

· а также с целью максимально точного анализа крови, мочи или кала,

· посевы спермы и мокроты для исследования.

· довольно часто проводится посев на анаэробные бактерии.