Лабораторные работы для выполнения

НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ

Раздел III. Обмен липидов.

Тема 3.1. Обмен триацилглицеролов.

Определение содержания бета- и пре-бета-липопротеинов сыворотки крови турбидиметрическим методом по Бурштейну и Самай

Принцип метода. Метод основан на способности гепарина образовывать с бета- и пре-бета-липопротеинами сыворотки крови комплекс, который под действием хлорида кальция выпадает в осадок. Степень помутнения раствора пропорциональна содержанию этих липопротеинов в сыворотке крови.

Ход определения. В контрольную и опытную кюветы КФК с толщиной слоя 0,5 см наливают по 2 мл хлорида кальция. Устанавливают шкалу прибора на нулевую отметку при 720 нм (красный светофильтр). В опытную кювету приливают микропипеткой 0,2 мл сыворотки, несколько раз промывая пипетку. Отмечают исходное значение экстинкции (Е₁). Затем добавляют микропипеткой 0,04 мл гепарина, несколько раз промывая ее, и перемешивают содержимое кюветы. Ровно через 4 минуты (по секундомеру) вновь измеряют экстинцию (Е₂).

Расчет. Содержание бета- и пре-бета-липопротеинов х (г/л) в сыворотке крови определяют по формуле:

х = (Е₁-Е₂) *11,65,

где 11,65-эмпирический коэффициент пересчета содержания бета- и пре-бета-липопротеинов на г/л.

Оформление работы. По полученным значениям экстинкции рассчитать содержание определяемых липопротеинов в сыворотке крови и сделать вывод о возможных их изменениях.

Практическое значение работы. В норме содержание бета- и пре-бета-липопротеинов в сыворотке крови составляет 3,6-6,5 г/л. Наиболее часто наблюдается увеличение содержания бета-липопротеинов в сыворотке крови. Оно тесно связано с повышением содержания холестерина в крови, так как им наиболее богаты бета-липопротеины. Повышение бета- и пре-бета-липопротеинов имеет место при заболеваниях, связанных с нарушением липидного обмена (атеросклероз, сахарный диабет и др.). Уровень их изменяется при нарушении функции печени (гепатиты).

К методическим рекомендациям

 

ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБОТЫ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ

НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ

Раздел III. Обмен липидов.

Тема 3.3. Обмен холестерина, кетоновых тел.

Определение общего холестерина в сыворотке крови по методу Илька

Содержание общего холестерина в сыворотке крови здорового человека колеблется в пределах 150-250 мг/дл (среднее значение 200 мг/дл). На эфиры холестерина с жирными кислотами приходится 60-70% от общего холестерина и 30-40%- на свободный холестерин. В сыворотке крови отношение свободного холестерина к эфирообразующему- величина постоянная. Увеличение содержания холестерина в плазме крови (гиперхолестеринемия) наблюдается при микседеме, менингитах, диабете, атеросклерозе, при некоторых заболеваниях печени. Описана также наследственная гиперхолестеринемия. Снижение содержания холестерина в плазме (гипохолестеринемия) отмечается при хронической сердечной недостаточности, острых инфекционных заболеваниях, острых панкреатитах, гипертиреозе.

Принцип метода. Метод основан на том, что холестерин в присутствии уксусного ангидрида и смеси уксусной и серной кислот образует окрашенные продукты, интенсивность окраски которых определяется колориметрически.

Ход определения. В сухую пробирку (присутствие следов воды мешает развитию окраски) вносят 2 мл рабочего реактива (реактив отмеривают стеклянным цилиндром) и 0,1 мл негемолизированной сыворотки. Сыворотку добавляют медленно, так чтобы она стекала по стенке пробирки. Пробирку энергично встряхивают 10-12 раз и помещают в термостат при 37˚С на 20 мин. Для приготовления контрольной пробы (одна-две пробы на группу) в сухую пробирку отмеривают 2 мл рабочего реактива. Окраску растворов измеряют на ФЭКе против контроля с красным светофильтром. Содержание холестерина в пробирках определяют по калибровочной кривой.

 

Калибровочный график для определения концентрации холестерина.

Оформление работы. Записывают принцип метода, результаты колориметрии, расчеты.

 

К методическим рекомендациям

 

ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБОТЫ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ

НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ

Раздел III. Обмен липидов.