Полимеразная цепная реакция(пцр). Компоненты. Практическое применение.

ПЦР - это метод, имитирующий естественную репликацию ДНК и позволяющий обнаружить единственную специфическую молекулу ДНК в присутствии миллионов других молекул.

Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм м/о. Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внеш. среды (вода, почва и т.д.). Для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, микоплазменной инфекции, ВПЧ - вирусов папилломы человека; в пульмонологии - для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулеза; в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллеза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; онковирусов.

Метод заключается в многократном увеличении количества (амплификации) ДНК диагносцирующего м/о. Для проведения амплификации необходимы следующие компоненты: 1)ДНК-матрица (ДНК или ее часть, содержащая искомый специфический фрагмент); 2)Праймеры - 20-30 нуклеотидных пар, комплементарные последовательностям ДНК на границах определяемого специфического фрагмента. 3)Смесь дезоксинуклеотидтрифосфатов (дНТФ) (смесь четырех дНТФ, являющихся материалом для синтеза новых комплементарных цепей ДНК); 4)Фермент Taq-полимераза (термостабильная ДНК-полимераза, катализирующая удлиннение цепей праймеров путем последовательного присоединения нуклеотидных оснований к растущей цепи синтезируемой ДНК); 5) Буферный раствор (реакционная среда, содержащая ионы Mg2+, необходимые для поддержания активности фермента).

 

ВАКЦИНЫ.ПРИНЦИПЫ КЛАССИФИКАЦИИ ВАКЦИН.АССОЦИИРОВАННЫЕ ВАКЦИНЫ. ТРЕБОВАНИЯ ПРЕДЪЯВЛЯЕМЫЕ К ВАКЦИНАМ.

Вакцины — иммунобиологические препараты, предназначенные для активной иммунопрофилактики, то есть для создания активной специфической невосприимчивости организма к конкретному возбудителю.

По назначению вакцины делятся на профилактические и лечебные.
По характеру микроорганизмов, из которых они созданы, вакцины бывают:- бактериальные,- вирусные,- риккетсиозные.

Существует моно- и поливакцина - приготовленные соответственно из одного или нескольких возбудителей.
По способу приготовления различают вакцины:

живые вакцины;убитые вакцины;комбинированные.

Для повышения иммуногенности к вакцинам иногда добавляют различного рода адъюванты (алюмо-калиевые квасцы, гидроксид или фосфат алюминия, масляную эмульсию), создающие депо антигенов или стимулирующие фагоцитоз и таким образом повышающие чужеродность антигена для реципиента.

Ассоциированные вакцины.

Для приготовления обычно используют убитые микробы или их компоненты. Их применение определяют эпидемическая обоснованность (против детских или раневых инфекций), иммунная совместимость и технологическая возможность комбинирования нескольких Аг. Наиболее известные ассоциированные препараты: адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина (АКДС-вакцина), тетравакцина (вакцины против брюшного тифа, паратифов А и В, а также столбнячный анатоксин) и АДС-вакцина (дифтерийно-столбнячный анатоксин).

Требования предъявляемые к вакцинам “ Идеальной” вакциной может считаться препарат, обладающий такими качествами, как:

1. полной безвредностью для привитых, а в случае живых вакцин - и для лиц, к которым вакцинный микроорганизм попадает в результате контактов с привитыми;

2. способностью вызывать стойкий иммунитет после минимального количества введений (не более трех);

3. возможностью введения в организм способом, исключающим парентеральные манипуляции, например, нанесением на слизистые оболочки;

4. достаточной стабильностью, чтобы не допустить ухудшения свойств вакцины при транспортировке и хранении в условиях прививочного пункта;

5. умеренной ценой, которая не препятствовала бы массовому применению вакцины.

68 Живые вакцины.Разновидности живых вакцин.Преимущества и недостатки живых вакцин.Примеры Живые вакцины изготовляют на основе ослабленных штаммов микроорганизма со стойко закрепленной авирулентностью (безвредностью). Вакцинный штамм после введения размножается в организме привитого и вызывает вакцинальный инфекционный процесс. У большинства привитых вакцинальная инфекция протекает без выраженных клинических симптомов и приводит к формированию, как правило, стойкого иммунитета. Примером живых вакцин могут служить вакцины для профилактики краснухи, кори, полиомиелита, туберкулеза, паротита. Положительные стороны: по механизму действия на организм напоминают "дикий" штамм, может приживляться в организме и длительно сохранять иммунитет (для коревой вакцины вакцинация в 12 мес. и ревакцинация в 6 лет), вытесняя "дикий" штамм. Используются небольшие дозы для вакцинации (обычно однократная) и поэтому вакцинацию легко проводить организационно. Последнее позволяет рекомендовать данный тип вакцин для дальнейшего использования. Отрицательные стороны: живая вакцина корпускулярная - содержит 99% балласта и поэтому обычно достаточно реактогенная, кроме того, она способна вызывать мутации клеток организма (хромосомные аберрации), что особенно опасно в отношении половых клеток.Живые вакцины содержат вирусы-загрязнители (контаминанты),особенно это опасно в отношении обезьяннего СПИДа и онковирусов.К сожалению, живые вакцины трудно дозируются и поддаются биоконтролю, легко чувствительны к действию высоких температур и требуют неукоснительного соблюдения холодовой цепи.

69.Инактивированные и химические вакцины, получение и применение.Примеры. принцип “депо”. ИНАКТИВИРОВАННЫЕ ВАКЦИНЫ содержат инактивированные вакцинные штаммы возбудителей или их выделенные и очищенные от примесей антигены. Они не способны размножаться в организме привитого, но в состоянии вызывать защитный иммунный ответ. Их готовят путем накопления вакцинных штаммов в куриных эмбрионах, например, гриппозная вакцина, или клеточных культурах, например, коревая вакцина. Для инактивации (подавления способности к заражению) вакцинного штамма используют разные методы: воздействие формалином, ацетоном, фенолом, ультрафиолетовое излучение. Такие вакцины стимулируют более слабый иммунный ответ и часто требуют применения нескольких доз. Инактивированные вакцины применяют для профилактики паратифов, дизентерии, холеры, коклюша, лептоспироза, сыпного тифа, гриппа, полиомиелита, клещевого энцефалита.Основной способ получения химических вакцин заключается в выделении протективных антигенов, обеспечивающих развитие надежного иммунитета, и очистки этих антигенов от балластных веществ)

 

СЕРОПРОФИЛАКТИКА И СЕРОТЕРАПИЯ. АНТИТОКСИЧЕСКИЕ И АНТИМИКРОБНЫЕ СЫВОРОТКИ. ИММУНОГЛОБУЛИНЫ.ПРИНЦИП ПОЛУЧЕНИЯ, ПРИМЕНЕНИЕ.ПРИМЕРЫ.

Серотерапия (от лат. serum — сыворотка и терапия), метод лечения заболеваний человека и животных (преимущественно инфекционных) при помощи иммунных сывороток. Лечебный эффект основан на явлении пассивного иммунитета — обезвреживании микробов (токсинов) антителами (антитоксинами), содержащимися в сыворотках, которые получают путём гипериммунизации животных (главным образом лошадей). Для Серотерапия применяют также очищенные и концентрированные сыворотки — гамма-глобулины; гетерогенные (полученные из сывороток иммунизированных животных) и гомологичные (полученные из сывороток иммунизированных или переболевших людей). Сыворотки иммунные применяют при лечении дифтерии (преимущественно в начальной стадии болезни), ботулизма, при укусах ядовитых змей; гамма-глобулины — при лечении гриппа, сибирской язвы, столбняка, оспы, клещевого энцефалита, лептоспироза, стафилококковых инфекций (особенно вызванных антибиотикоустойчивыми формами микробов) и других заболеваний. Для предупреждения осложнений Серотерапия (анафилактический шок, сывороточная болезнь) сыворотки и гетерогенные гамма-глобулины вводят по специальной методике с предварительной кожной пробой

Серопрофилактика (от лат. serum — сыворотка и профилактика), метод предупреждения инфекционных болезней человека и животных при помощи иммунных сывороток; создается сравнительно непродолжительный (1—4 нед) пассивный иммунитет. В современной медицинской практике для Серопрофилактика все шире применяют гамма-глобулины. Серопрофилактика проводят в эпидемических очагах лицам, имевшим контакт с больными (например, корью, коклюшем), при травмах (для предупреждения столбняка), при укусах животных (для профилактики бешенства) и клещей (для предупреждения клещевого энцефалита). Плановая Серопрофилактика осуществляется для профилактики инфекционного гепатита. В ветеринарной практике применяют Серопрофилактика колибактериоза телят, паратифа поросят и т. п. При некоторых инфекциях используют глобулиновые фракции сывороток (болезнь Ауески) или сыворотку молока иммунизированных животных (противоящурный иммунолактон.

Антитоксические Сыворотки иммунопрепараты, изготовляемые из крови иммунных людей и животных и применяемые для лечения пассивной иммунопрофилактики токсинемических инфекций (дифтерии, столбняка, ботулизма, некоторых форм стафилококковой инфекции и др.). Лечебное и профилактическое действие А. с. основано на том, что содержащиеся в них антитоксины (см.) создают пассивный иммунитет, к-рый защищает организм от токсического влияния токсинов с момента введения до 30 - 40-го дня после введения. А. с. не оказывают прямого ингибирующего действия на микробы, продуцирующие токсины, и их эндотоксины. Силу А. с. измеряют в международных ед. (ME) или АЕ, соответствующих минимальному количеству с-ки, нейтрализующему стандартную ед. того или иного токсина. Антимикробные сыворотки содержат антитела против клеточных антигенов возбудителя. Их получают иммунизацией животных клетками соответствующих возбудителей, и дозируют в миллилитрах. Антимикробные сыворотки могут применяться при лечении: сибирской язвы, чумы, стрептококковых инфекции, стафилококковой инфекции, синегнойной инфекций.

Их назначение определяется тяжестью течения заболевания и в отличие от антитоксических не является обязательным.При лечении больных с хроническими, длительно, вяло текущими формами инфекционных заболеваний, возникает необходимость стимулировать собственные механизмы специфической зашиты путем введения различных антигенных препаратов и создания активного приобретенного искусственного иммунитета (иммунотерапия антигенными препаратами). Для этих целей используются в основном лечебные вакцины, и значительно реже - аутовакцины или стафилококковый анатоксин.

Иммуноглобулины cоставная часть белков сыворотки крови. Они содержат защитные антитела, способные нейтрализовать болезнетворное действие различных микроорганизмов - в том числе и вирус клещевого энцефалита. Иммуноглобулины оказывают губительное действие на вирусы, бактерии, спирохеты и простейшие, что определяет их важную роль в предупреждении и лечении ряда инф. заболеваний, особенно у детей.Обычно Иммуноглобулины получают из крови людей, переболевших определенным заболеваниемм, животных (чаще лошадей), к-рым специально вводили соответствующие вакцины. Иммуноглобулины образуются на 2-й нед. после начала иммунизации или болезни.
С профилактич. целями Иммуноглобулины вводят внутримышечно лицам, которые имели контакты с больными и могли заразиться. Для лечения больных Иммуноглобулины рекомендуется вводить как можно раньше от начала заболевания (желательно в первые 2 дня). Как правило, Иммуноглобулины сокращают длительность лихорадочного периода, уменьшают тяжесть заболевания и возникновение возможных осложнений. В настоящее время используются Иммуноглобулины против гриппа, клещевого энцефалита, краснухи, свинки, инфекционного гепатита, кори, оспы, дизентерии, скарлатины, коклюша и сибирской язвы.