Тема 4. Реакции иммунитета (2 занятие) — КиберПедия 

Состав сооружений: решетки и песколовки: Решетки – это первое устройство в схеме очистных сооружений. Они представляют...

Индивидуальные и групповые автопоилки: для животных. Схемы и конструкции...

Тема 4. Реакции иммунитета (2 занятие)

2017-11-27 258
Тема 4. Реакции иммунитета (2 занятие) 0.00 из 5.00 0 оценок
Заказать работу

Реакции лизиса, как правило, проходят с участием 3-х основных компонентов: антиген, антитело, комплемент. Реакции с участием комплемента основаны на способности субкомпонента комплемента Clq и затем других компонентов комплемента присоединяться к иммунным комплексам и лизировать при этом антиген.

Реакция связывания комплемента (РСК) позволяет титровать антигены или антитела по степени фиксации комплемента комплексом антиген — антитело. Эта реакция состоит из двух фаз: взаимодействия антигена с испытуемой сывороткой крови (исследуемая система) и взаимодействия гемолитической сыворотки с эритроцитами барана (индикаторная система). При положительной реакции в исследуемой системе происходит связывание комплемента, и тогда при добавлении сенсибилизированных антителами эритроцитов гемолиза не наблюдается. Реакцию применяют для серодиагностики сифилиса (реакция Вассермана), вирусных и бактериальных инфекций.

Реакции бактериолиза основаны на способности комплемента лизировать бактериальную клетку после прикрепления к ее поверхности молекулы антитела. Реакцию используют как при диагностике бактериальных культур, так и определении типа сывороток. Для учета результатов применяют прямые посевы на питательные среды и через 24 часа регистрируют рост с количественным определением степени обсемененности материала.

Реакции иммоболизации по механизму сходны с реакциями бактериолиза, но учет результатов производится путем изучение подвижности объекта.

Исключением из стандартных реакций иммунного лизиса является реакция агглютинации-лизиса. В качестве антигена в этой реакции участвуют лептоспиры, которые лизируются без участия системы комплемента уже после прикрепления к их поверхности молекул антител.

Реакция нейтрализации основана на способности антител нейтрализовать некоторые специфические функции макромолекулярных или растворимых антигенов, например активность ферментов, токсины бактерий, болезнетворность вирусов. В бактериологии эту реакцию используют для обнаружения антистрептолизинов, антистрептокиназы и антистафилолизинов. Реакцию нейтрализации токсинов можно оценивать по биологическому эффекту, так, например, титруют антистолбнячные и антиботулинические сыворотки. Смесь токсина с антисывороткой, введенная животным, не вызывает их гибели. Различные варианты реакции нейтрализации применяют в вирусологии. При смешивании вирусов с соответствующей антисывороткой и введении этой смеси животным или в клеточные культуры патогенность вирусов нейтрализуется, при этом животные не заболевают, а клетки культур не подвергаются деструкции.

Помимо вышеописанных методов современные иммунологические лаборатории для определения наличия антител или антигенов используют следующие модификации диагностических систем:

A. Иммуноферментные, методы основаны на использовании антител, конъюгированных с ферментами, главным образом пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой. Наиболее популярной разновидностью иммуноферментного метода является иммуносорбция. На твердом носителе сорбируют антиген. Чаще носителем служит поверхность лунок микропанелей. В лунки с сорбированным антигеном вносят исследуемую сыворотку крови, затем меченную ферментом антисыворотку и субстрат. Положительные результаты учитывают по изменению цвета жидкой среды. Для обнаружения антигенов на носитель сорбируют антитела, затем вносят в лунки исследуемый материал и проявляют реакцию меченной ферментом антимикробной сывороткой. Повышению чувствительности иммунофлюоресцентного и иммуноферментного методов способствует введение в систему реакции авидина и биотина.

B. Радиоиммунологический метод основан на применении радиоизотопной метки антигенов или антител. Является наиболее чувствительным методом определения антигенов и антител, используется для определения гормонов, лекарственных веществ и антибиотиков, для диагностики бактериальных, вирусных, риккетсиозных, протозойных заболеваний, исследования белков крови, тканевых антигенов. Первоначально он был разработан как специфический метод измерения уровня циркулирующих в крови гормонов. Тест-системой являлись меченный радионуклидом гормон (антиген) и антисыворотка к нему.

C. Иммуногистологические методы предназначены для определения антигенов на поверхности или внутри клетки, например для обнаружения маркеров лимфоцитов и иммунокомплексов при гломерулонефритах и других заболеваниях почек. В этой реакции для выявления антигенов пользуются или иммунофлюоресценцией, или иммуноферментными конъюгатами с пероксидазой. Количество специфических антигенов определяют по интенсивности окрашивания. Иногда используют автоматическую регистрацию с помощью спектрофотометра.

D. Иммуноблоттинг применяют для выявления антител к отдельным антигенам или «узнавания» антигенов по известным сывороткам. Метод состоит из 3 этапов: разделения биологических макромолекул (например, вируса) на отдельные белки с помощью электрофореза в полиакриламидном геле; переноса разделенных белков из геля на твердую подложку (блот); выявления на подложкеискомых белков с помощью прямой или непрямой иммуноферментной реакции. Как диагностический метод иммуноблоттинг используют при ВИЧ-инфекции. Диагностическую ценность имеет обнаружение антител к одному из белков внешней оболочки вируса.

ЗАДАНИЕ

1. Зарегистрировать результаты постановки развернутой реакции агглютинации. Разобрать возможные варианты в диагностике заболеваний, где наиболее важно определение титра антител.

2. Произвести реакцию связывания комплемента (согласно таблице 6).

Таблица 6

ингредиенты Пробирки
         
Сыворотка* 0,25 - 0,25 - -
Антиген 0,25 0,25 - - -
Комплемент 0,25 0,25 0,25 0,25 -
Физиологический раствор - 0,25 0,25 0,5 0,75
Гемолитическая система 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

* - сыворотка, предварительно инактивируется при 56 0С в течение 30 минут для разрушения нативного комплемента.

3. Разобрать принцип определения состояния иммунного статуса.

Контрольные вопросы

1. Т-лимфоциты, строение клетки, фазы дифференцировки, функции.

2. Цитотоксические клетки, классификация, механизмы лизиса.

3. К-клетки, механизм лизиса.

4. NK-клетки, механизм лизиса.

5. Иммунный статус, основные компоненты, диагностическое значение исследования иммунного статуса.

6. Показатели функционирования гуморального иммунитета.

7. Показатели функционирования клеточного иммунитета.

8. Показатели функционирования факторов неспецифической резистентности организма.

9. Классификация иммунодефицитов.

10. Аутоиммунные заболевания: классификация.

11. Реакции лизиса, варианты постановки, механизм.

12. Реакция связывания комплемента: механизм, значение, методика постановки.

13. Реакция иммобилизации, варианты учета результатов.

14. Реакции нейтрализации.

15. Современные модификации диагностических методов.


Поделиться с друзьями:

Двойное оплодотворение у цветковых растений: Оплодотворение - это процесс слияния мужской и женской половых клеток с образованием зиготы...

Историки об Елизавете Петровне: Елизавета попала между двумя встречными культурными течениями, воспитывалась среди новых европейских веяний и преданий...

История создания датчика движения: Первый прибор для обнаружения движения был изобретен немецким физиком Генрихом Герцем...

Папиллярные узоры пальцев рук - маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни...



© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!

0.017 с.