Методы оценки гуморального иммунитета

- количественная оценка:

1. Определение количества В-лимфоцитов методом ЕАС – розеткообразования (ЕАС-РОК).

Принцип метода: аналогичен реакции розеткообразования для выявления Т-лимфоцитов, но вместо эритроцитов барана используются эритроциты быка (Е), нагруженными антителами (А) и комплементом (С). Взаимодействие обусловлено наличием у В-лимфоцитов рецепторов к комплементу.

2. Определение числа В-лимфоцитов (CD20+ или CD19+) с помощью ИФА и проточной цитометрии.

 

- качественная (функциональная) оценка:

1. Определение концентрации иммуноглобулинов в реакции преципитации по Манчини и ИФА.

Принцип метода по Манчини: образцы исследуемой сыворотки помещают в лунки агарового геля, который содержит антитела против иммуноглобулина определенного класса. Иммуноглобулины, диффундирующие в агар, при взаимодействии с соответствующими антителами образуют кольца преципитата, диаметр которых пропорционален концентрации иммуноглобулинов соответствующего класса в исследуемой сыворотке. Концентрацию иммуноглобулина определяют по заранее построенному с помощью эталонных сывороток графику (калибровочной кривой).

2. Определение функциональной активности лимфоцитов с помощью РБТЛ на В-митоген.

3. Определение продукции ИЛ-6 с помощью ИФА и проточной цитометрии.

 

КОЖНЫЕ АЛЛЕРГИЧЕСКИЕ ПРОБЫ

Применяются для выявления ГЗТ (инфекционной аллергии). ГЗТ – реакция, опосредованная Т-лимфоцитами играют важную роль в патогенезе многих инфекций (туберкулеза, лепры, бруцеллеза, сифилиса и др.).

Для постановки аллергических проб применяются аллергены (корпускулярные и растворимые):

- растворимые аллергены - отдельные фракции клеточной стенки, выделенные из микробов:

1) очищенный туберкулин (ППД-Л) – очищенный белок (низкомолекулярный белок) туберкулезной палочки. Применяется для выявления аллергии к возбудителю туберкулеза (проба Манту);

2) аллерген бруцеллезный (бруцеллин) – полисахаридно-белковый комплекс B. аbortus. Применяется для выявления аллергии к возбудителю бруцеллеза.

3) аллерген сибироязвенный (антраксин) – белковонуклиосахаридный комплекс. Применяется для выявления аллергии к возбудителю сибирской язвы.

- корпускулярные аллергены (взвесь убитых микробов):

1) аллерген туляримийный (тулярин) применяется для выявления аллергии к возбудителю туляремии.

2) лепромин применяется для выявления аллергии к возбудителю лепры.

 

Принцип метода: внутрикожно или накожно в ладонную поверхность предплечья вводится небольшое количество аллергена. При наличии инфекционной аллергии через 24-48-72 час. Развивается инфекционная аллергия в виде гиперемии, инфильтрата, отека кожи (рис.17).

Рис. 17. Механизм ГЗТ.

ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ

 

Выберите один правильный ответ

1. С какой целью применяется реакция Кумбса?

1) для обнаружения опсонинов;

2) для обнаружения неполных антител;

3) для установления вида микроорганизма;

4) для определения серовара микроорганизма;

5) для обнаружения антитоксинов.

 

2. Укажите механизм первой стадии серологической реакции

1) агглютинация;

2) преципитация;

3) соединение АГ с АТ;

4) лизис;

5) связывание комплемента.

 

3. Какую реакцию можно использовать для оценки состояния Т-звена иммунной системы?

1) РСК;

2) РПГА;

3) проточную цитометрию;

4) опсоно – фагоцитарную реакцию.

 

4.Какой феномен серологических реакций наблюдается, если антигеном является экзотоксин?

1) преципитация;

2) агглютинация;

3) опсонизация;

4) лизис;

5) нейтрализация.

5. ЕАС-РОК основан на выявлении…

1) С3 рецептора В-клеток;

2) С3 рецептора А-клеток;

3) рецепторов к эритроцитам;

4) Fс-рецепторов.

 

6. ЕА-РОК основан на выявлении…

1) С3 рецепторов В-клеток;

2) Fc-рецепторов А-клеток;

3) Fc-рецепторов Т-клеток;

4) рецепторов к эритроцитам.

 

7. Назовите компоненты системы комплемента, обладающие опсонизирующими свойствами

1) С 5;

2) С 7;

3) С 9;

4) С3В С4В.

 

8.Назовите компоненты системы комплемента, обеспечивающие литическое действие

1) С2;

2) С3В;

3) С8, С9;

4) С3А, С3В;

5) С1.

 

9.Рабочая доза комплемента равна …

1) титру комплемента;

2) титру, сниженному на 25-30%;

3) титру, увеличенному на 25-30%;

4) 1/2 титра.

 

10. Назовите маркера Т-киллеров

1) HLA - A;

2) HLA - DR;

3) CD - 3;

4) CD - 8;

5) CD - 4.

 

11. Активацию Т – лимфоцитов вызывает…

1) митоген Лаконоса;

2) липополисахарид;

3) фитогемагглютинин;

4) декстрансульфат;

5) поливинилпирролидон.

 

12.Лимфобласт – это…

1) лимфоцит в конечной фазе дифференцировки;

2) лимфоцит с цитотоксическими эффекторными свойствами;

3) предшественник зрелых лимфоцитов;

4) лимфоцит в фазе интенсивного размножения.

 

13. Назовите цитокина Т-хелпера, стимулирующего пролиферацию и дифференцировку других субпопуляций Т-клеток

1) интерлейкины;

2) ÌL 2;

3) ÌL 3;

4) ÌL – 6;

5) ÌL – 5.

14. В реакции агглютинации участвует антиген…

1) растворимые;

2) корпускулярные;

3) любые.

 

15. Повышением чувствительности бактерий к фагоцитозу является реакция…

1) агглютинации;

2) нейтрализации токсина;

3) опсонизации;

4) связывание комплемента;

5) преципитации.

 

16. Какие антигены участвуют в реакции агглютинации?

1) белки;

2) полисахариды;

3) экзотоксин;

4) микробные клетки.

 

17. Назовите антигены - маркеры Т-киллеров

1) HLA - A;

2) HLA - DR;

3) CD - 3;

4) CD - 8;

5) CD - 4.

 

18. Какая реакция применяется для идентификации Т-лимфоцитов?

1) М - РОК;

2) ЕА - РОК;

3) ЕАС - РОК;

4) Е - РОК.

19. Активацию Т – лимфоцитов вызывает…

1) митоген Лаконоса;

2) липополисахарид;

3) фитогемагглютинин;

4) декстрансульфат;

5) поливинилпирролидон.

 

20. Лимфобласт – это…

1) лимфоцит в конечной фазе дифференцировки;

2) лимфоцит с цитотоксическими эффекторными свойствами;

3) предшественник зрелых лимфоцитов;

4) лимфоцит в фазе интенсивного размножения.

 

21. Показателем активности инфекционного процесса является...

1) Ig M;

2) IgG;

3) IgМ и IgG.

 

22. АГ – 2-х млрд. взвесь бактерий на физиологическом растворе вызывает следующий феномен серологической реакции:

1) преципитация;

2) агглютинация;

3) опсонизация;

4) лизис;

5) флокуляция.

 

23. Детерминанты иммуноглобулинов, взаимодействующие с антиглобулиновыми антитела, применяемыми в «непрямых» серологических реакциях?

1) идиотипическими;

2) аллотипическими;

3) изотипическими.

24. Иммунным интерфероном является…

1) бетта- интерферон;

2) гамма-интерферон;

3) альфа- интерферон.

 

25. Часть молекулы антитела, ответственная за активацию комплемента

1) «L» - цепи;

2) Fс– фрагмент;

3) Fав – фрагмент;

4) активные центры;

5) H- цепи.

 

26. Назовите цитокин Т-хелпера, стимулирующий пролиферацию и дифференцировку других субпопуляций Т-клеток

1) ÌL - 1;

2) ÌL - 2;

3) ÌL - 3;

4) ÌL - 6;

5) ÌL - 5.

 

27. Какие антитела используют для иммуноферментного анализа?

1) антител, реагирующих с ферментами;

2) антител, коньюгированных с ферментами

3) антител, нейтрализующих действие ферментов.

 

28. Какое время требуется для проявления ГЗТ к аллергену?

1) несколько минут;

2) 24 часа;

3) 72 часа;

4) 12 часов;

5) не ранее 6 часов.

29. Какие лимфоциты играют главную роль при ГЗТ?

1) В1-лимфоциты;

2) В-лимфоциты;

3) Т-хелперы;

4) сенсибилизированные Т - лимфоциты;

5) Т-киллеры.

 

30. Активацию В – лимфоцитов не вызывают…

1) фитогемагглютинин;

2) коканавалин А;

3) липополисахарид;

4) антигены;

5) цитокины.

 

31. Классический путь активации комплемента запускается…

1) комплексом АГ – АТ;

2) липополисахаридами микробов;

3) через пропердиновую систему.

 

32. Назовите функцию, которую не вызывают активированные компоненты комплемента.

1) разрушают клетки;

2) усиливают фагоцитоз;

3) участвуют в анафилактических реакциях;

4) вызывают хемотаксис;

5) стимулируют антителообразование.

33.Какие рецепторы имеются на макрофагах?

1) Fc - Ig G;

2) Fc – Ig A;

3) эритроцитов.

 

34. Укажите название сыворотки, необходимую для постановки реакции агглютинации с целью серодиагностики

1) диагностикум;

2) испытуемая сыворотка;

3) физиологический раствор;

4) диагностическая сыворотка;

5) комплемент.

 

35. Назовите способ постановки реакции агглютинации

1) в специальных пробирках диаметром 0,5 см;

2) на стекле;

3) в геле.

 

36. Назовите рецептор – маркер Т лимфоцитов

1) FC - рецепторы для Ig;

2) к эритроцитам мыши;

3) СЗ рецепторы для комплемента;

4) к эритроцитам барана.

 

37. Назовите рецептор, имеющийся на В-лимфоцитах

1) вируса кори;

2) вируса герпеса;

3) вируса Эпштейн – Барра;

4) эритроцитов барана.

 

38. Активацию В-лимфоцитов вызывают следующие вещества

1) фитогемагглютинин;

2) коканавалин А.

 

39. Цитокины – это…

1) белки, образуемые активированными клетками иммунной системы;

2) интерфероны;

3) интерлейкины;

4) ФНО;

5) лейкины.

 

40. Назовите антиген, участвующий в реакции РП

1) корпускулярный;

2) растворимый.

 

41. Назовите основные способы постановки РП

1) реакция на стекле;

2) реакция в геле;

3) развернутая реакция.

 

42. Назовите условия, определяющие скорость серологических реакций

1) оптимальное соотношение антигена и антитела;

2) рН среды;

3) степень специфичности антигена и антитела;

4) температура;

5) концентрация электролитов.

 

43. Назовите рецептор – маркер Т- лимфоцитов

1) Fс – рецептор для IgА;

2) для эритроцитов мыши;

3) СЗ – рецептор для комплемента;

4) для эритроцитов барана.

 

44. Кожно-аллергические пробы применяются для выявления следующих реакций

1) анафилактической реакции;

2) цитотоксической реакции;

3) иммунокомплексной реакции;

4) клеточно-опосредованной реакции.

 

45. Назовите компонент-антиген РНГА

1) эритроцитарный диагностикум;

2) физиологический раствор;

3) сыворотка больного;

4) сыворотка морской свинки;

5) гемолитическая сыворотка.

 

46. Назовите аллергены, применяемые для выявления ГЗТ

1) взвесь убитых бактерий;

2) пыльца растений;

3) вирусы.

 

47. Инфекционная аллергия - это повышенная чувствительность к…

1) аллергенам микроорганизмов;

2) сывороточным аллергенам;

3) пыльцам растений;

4) пищевым аллергенам.

48. Кожно-аллергические пробы, применяемые при туберкулезе

1) р. Манту;

2) р. Бюрне;

3) р. с тулярином;

4) р. с антраксином;

5) р. с кандидозным аллергеном.

 

49. Диагностическая система РСК включает следующий антиген

1) комплемент;

2) диагностикум;

3) сыворотку крови больного;

4) эритроциты барана;

5) гемолитическую сыворотку.

 

50. Индикаторная система РСК включает следующий антиген

1) комплемент;

2) диагностикум;

3) сыворотку крови больного;

4) эритроциты барана;

5) гемолитическую сыворотку.

 

51. С какой целью применяется р. опсонизации?

1) выявления АТ в исследуемой сыворотке;

2) выявления АТ к вирусам;

3) идентификации микробных АГ;

4) установления серовара бактерий.

 

52. Назовите реагенты, используемые для выявления антител в непрямом методе иммуноферментного анализа

1) меченые антитела против антигена;

2) меченые антитела против иммуноглобулинов;

3) немеченые антитела против иммуноглобулинов;

4) комплемент.

 

53. Назовите ингредиент, служащей меткой для постановки иммуноферментного анализа

1) индикаторный фермент;

2) антигены;

3) энзиммеченные антитела;

4) немеченые антитела;

5) хромоген.

 

54. Назовите методы иммунохимического анализа, в которых используется хромогенный субстрат

1) радиоиммунный анализ;

2) иммунофлюоресцентный анализ;

3) иммуноэлектрофорез;

4) иммуноблоттинг.

 

55. Выберите характеристику метода иммуноблотинга

1) основан на сочетании электрофореза и иммуноферментного анализа.;

2) позволяет выявлять нуклеотидов;

3) позволяет судить о сероконверсии;

4) включает использование меченых антител.

 

56. С какой целью применяется реакция нейтрализации?

1) опсонинов

2) токсинов

3) неполных антител

4) антигена, полученного путем кипячения.

 

57. Назовите антигены, участвующие в реакции нейтрализации

1) белки;

2) полисахариды;

3) корпускулярные антигены;

4) экстракты клеток.

 

58. Реакция преципитации применяются с целью…

1) выявления антител в исследуемой сыворотке;

2) выявления антител к вирусам;

3) идентификации микробных антигенов;

4) установления серовара бактерий;

5) установления серогруппы микроорганизмов.

 

59. Назовите реакцию используемую для определения неполных антител

1) реакция Оухтерлони;

2) реакция Кумбса;

3) реакция Вассермана

 

60. Назовите сыворотку, применяемую для нейтрализации биологической активности вируса

1) антитоксическая сыворотка;

2) противовирусная сыворотка;

3) экзотоксин;

4) вируссодержащий материал.

61. Назовите индикаторный объект в РН для определения цитопатогенного действия вируса

1) куриные эмбрионы;

2) лабораторные животные;

3) вируссодержащий материал;

4) иммунная сыворотка;

5) тканевая культура

 

62. Реакции нейтрализации основаны на ингибировании антителами…

1) инфекционного свойства вирусов;

2) куриного эмбриона

 

63. Реакции РН применяются для определения…

1) активности экзотоксинов;

2) активности эндотоксинов

 

64. Назовите способы постановки РН.

1) в организме лабораторных животных;

2) на стекле капельным способом

 

65. Индикаторами РН являются…

1) латекс-частицы;

2) эритроциты

 

66. Определение иммуноглобулинов по Манчини – это…

1) РП в геле;

2) РП в пробирках;

3) РА;

4) РПГА.

ОТВЕТЫ НА ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ

1.		23.		45.
2.		24.		46.
3.		25.		47.
4.		26.		48.
5.		27.		49.
6.		28.		50.
7.		29.		51.
8.		30.		52.
9.		31.		53.
10.		32.		54.
11.		33.		55.
12.		34.		56.
13.		35.		57.
14.		36.		58.
15.		37.		59.
16.		38.		60.
17.		39.		61.
18.		40.		62.
19.		41.		63.
20.		42.		64.
21.		43.		65.
22.		44.		66.

 

СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ

Задача 1. Из испражнения больного с подозрением на дизентерию выделена чистая культура Sh.flexneri. Какая серологическая реакция позволит определить серотип возбудителя для расшифровки эпидемиологической обстановки? Назовите компоненты реакции.

Задача 2. В клинику поступил больной с предполагаемым диагнозом: «Грипп», «Парагрипп». Для экспресс - диагностики поставлен непрямой способ РИФ. Назовите компонентов реакции.

Задача 3. В инфекционную больницу поступили двое больных с предполагаемым диагнозом «Гепатит А». У первого больного в сыворотке крови обнаружены IgM против вируса гепатита А, а у второго – IgG. С помощью какого метода можно определить Ig? У кого из больных подтвержден диагноз и почему?

Задача 4. Выделена чистая культура вируса полиомиелита. Требуется определение серотипа вируса (1,2,3) в реакции нейтрализации на тканевой культуре. Назовите ингредиентов и механизм реакции.

Задача 5. В вирусологическую лабораторию поступил материал (ликвор) от больного с предположительным диагнозом: «Клещевой энцефалит». После выделения чистой культуры вируса осуществляется идентификация вируса в РН на мышах. Назовите ингредиентов и механизм реакции.

Задача 6. В лабораторию поступила сыворотка крови пациента переболевшего брюшным тифом. С помощью какой серологической реакции можно установить брюшнотифозное бактерионосительство? Назовите ингредиентов.

Задача 7. Выделить чистую культуру М.pneumoniae удается редко и не ранее через месяц. В связи с этим основным методом диагностики пневмоний является серодиагностика, которая осуществляется постановкой РСК. Назовите компонентов реакции.

Задача 8. При исследовании отделяемого зева больного выделена культура С.diphteriae. Какой метод следует применить для определения ее токсигенности? Назовите ингредиентов реакции.

Задача 9. Для уточнения диагноза заболевания больного с подозрением на бруцеллез необходимо использовать опсонофагоцитарную реакцию. Какие ингредиенты следует подготовить для ее постановки? Что такое опсонины, фагоцитарный показатель и опсонический индекс?

Задача 10. Какие ингредиенты необходимо подготовить для постановки непрямого способа ИФА с целью определения Т-хелперов?

Задача 11. У больного с хроническим сепсисом необходима оценка иммунологического статуса. Какие ингредиенты необходимо подготовить для постановки непрямого способа ИФА с целью определения В-лимфоцитов?

Задача 12. У ребенка 3 лет подозревают наличие иммунодефицитного состояния. Какие показатели будут использованы для оценки В-системы иммунитета и какие тесты будут включены в иммунологический анализ?

Задача 13. В лабораторию поступила кровь от больного брюшным тифом для постановки реакции агглютинации. Какие ингредиенты будут использованы для ее постановки? Какой показатель реакции будет использован в качестве диагностического?

Задача 14. Из испражнений больного выделена Е.сoli. Какие методики реакции агглютинации будут использованы для идентификации культуры?

Задача 15. В детском саду планируется ревакцинация детей против туберкулеза. Какую аллергическую пробу и с какой целью предварительно сделать детям? Какой препарат применяется для постановки пробы?

Задача 16. В лабораторию поступил материал (кожа из полушубка) для выявления возбудителя сибирской язвы. Какую серологическую реакцию следует применить для обнаружения антигенов возбудителя в исследуемом материале? Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки?

Задача 17. В лабораторию поступила кровь больного с подозрением на грипп. Для подтверждения диагноза необходимо поставить РСК. Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки? По какому признаку будете оценивать положительный или отрицательный результат реакции?

Задача 18. Выделена культура вируса гриппа А заражением в аллантоисную полость куриного эмбриона. Необходимо поставить РТГА с целью определения серотипа вируса гриппа. Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки? По какому признаку можно оценить результат реакции?

Задача 19. В лабораторию поступил смыв из носоглотки больного аденовирусной инфекцией. Необходимо поставить реакцию нейтрализации с диагностической целью. Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки? Оцените результат.

Задача 20. В детском садике планируется осуществить вакцинацию против дифтерии и столбняка АДС вакциной. Какую иммунологическую реакцию используют для определения напряженности поствакцинального иммунитета? Какие ингредиенты следует подготовить? Как оценивается реакция?

Задача 21. В лабораторию института вакцин и сывороток поступила противодифтерийная сыворотка для определения ее специфической активности. Какую реакцию следует использовать для этой цели? Какие ингредиенты следует приготовить для ее постановки?

Задача 22. В лабораторию поступила кровь от больного с подозрением на эпидемический сыпной тиф. При изучении ее в реакции агглютинации получен положительный результат (титр сыворотки 1:800). Антитела при сыпном тифе обнаруживаются с 5-6-го дня болезни, достигая максимума к 14-16-му дню и сохраняются в организме переболевших долгие годы.

Удалось ли поставить этиологический диагноз? Почему? Какие дополнительные исследования можно предложить?

Задача 23. У доярки совхоза при исследовании крови на наличие антител к бруцеллам обнаружен титр 1:200. Как доказать, больна ли доярка в настоящий момент или этот показатель – результат прививки?

Задача 24. В хирургическом отделении у больного развилось осложнение послеоперационной раны. Клинически была заподозрена газовая гангрена. Поставлена РНГА для обнаружения экзотоксина в крови больного. Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки?

Задача 25. В порт прибыл корабль с грузом из Африки. Карантинная служба порта обнаружила в трюмах трупы крыс. Укажите метод серологического исследования термоэкстракта трупного материала крыс. Предполагаемый диагноз чума.

Задача 26. Мужчина 40 лет обратился к врачу на 8- й день болезни. Несколько дней назад он купался в реке, выше по течению которой было место скота. Среди животных в данной местности регистрировались заболевания лептоспирозом. Врач заподозрил возможность лептоспироза. Для подтверждения диагноза необходимо поставить реакцию агглютинации - лизиса. Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки? По какому признаку будете оценивать положительный или отрицательный результат реакции? Как оценивается реакция? Назовите механизм реакции.

Задача 27. В одном из детских садов зарегистрированы случаи заболевания скарлатиной. Как проверить наличие антитоксического иммунитета к скарлатине у контактных детей? Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки?

Задача 28. Первые опыты по противотуберкулезной иммунизации были проведены Р. Кохом. Он многократно вводил туберкулин морской свинке, а затем и инфицировал ее микобактериями туберкулеза. Животное погибало от туберкулеза через 2-4 недели. Почему у животных отсутствовал иммунитет против туберкулеза?

 

ОТВЕТЫ НА СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ

1. РА на стекле капельным способом.

Компоненты: Выделенная чистая культура Sh.flexneri, диагностические монорецепторные сыворотки против 1 и 2 типов Sh.flexneri, физиологический раствор.

2. Отделяемое носоглотки, диагностические видоспецифические сыворотки (противогриппозная и противопарагриппозная), антиглобулиновая сыворотка, меченная флюорохромом; изотонический раствор хлорида натрия

3. Ig отдельных классов определяют с помощью ИФА. Гепатит А подтверждается у первого больного, так как Ig M является показателем активности инфекционного процесса.

4. Исследуемый вирус, диагностические типоспецифические сыворотки с антителами против трех серотипов вируса полиомиелита, тканевые культуры. Учет реакции проводится по отсутствии ЦПД на тканевой културе из-за нейтрализации патогенного свойства вируса специфическими антителами

5. Исследуемый вирус, диагностическая видоспецифическая сыворотка с антителами против вируса клещевого энцефалита, белые мыши для опыта и контроля (вирус без сыворотки). При положительной реакции мышка выживает из-за нейтрализации инфекционного свойства вируса гомологичными антителами.

6. Реакция пассивной Vi-гемагглютинации. Ингредиенты: сыворотка больного, эритроцитарный Vi-диагностикум (Vi - АГ S.typhi, адсорбированной на поверхности эритроцитов барана), физиологический раствор.

7. Сыворотка крови больного, диагностикум М.pneumoniae, сыворотка морской свинки (комплемент), эритроциты барана, гемолитическая сыворотка, физиологический раствор.

8. РП в геле по Оухтерлони. Ингредиенты: выделенная чистая культура C.diphtheriae, полоска фильтровальной бумаги, пропитанной противодифтерийной антитоксической сывороткой, чашка Петри с питательной средой.

9. Ингредиенты: исследуемая сыворотка крови, суточная микробная культура, взвесь нейтрофилов (фагоцитов).

Опсонины – антитела (IgG, частично IgA), усиливающие фагоцитоз микробов. Роль опсонинов выполняют также компоненты комплемента, белки острой фазы, сурфактантные белки легких и другие факторы.

Фагоцитарный показатель – количество микробов, поглощенных одним нейтрофилом, определяют путем подсчета среднего количества фагоцитированных бактерий на один лейкоцит.

Опсонический индекс – фагоцитарный показатель иммунной (исследуемой) сыворотки / фагоцитарный показатель нормальной сыворотки.

Чем выше опсонический индекс (должен быть > 1), тем выше иммунитет.

10. Ингредиенты: плазма крови (взвесь лимфоцитов), моноклониалные антитела против CD3 клеток, антиглобулиновая сыворотка, меченная пероксидазой; субстрат для пероксидазы (ОФД), фосфатно-солевой буфер.

11. Ингредиенты: плазма крови (взвесь лимфоцитов), моноклониалные антитела против CD19-22 клеток, антиглобулиновая сыворотка, меченная пероксидазой; субстрат для пероксидазы (ОФД), фосфатно-солевой буфер.

12. Определение количества В-лимфоцитов методом ЕАС – розеткообразования (ЕАС-РОК), ИФА, ПЦ. Определение концентрации иммуноглобулинов в реакции преципитации по Манчини, ИФА. Определение продукции ИЛ-4, 5, 6 с помощью ИФА и проточной цитометрии.

13. Ингредиенты: сыворотка крови больного в разведениях 1:100, 1:200, 1:400, 1:800; диагностикумы (S.typhi, S.P.A., S.P.B), физиологический раствор. Диагностический титр – 1:200, т.е. реакция считается положительной при наличии агглютинации в разведении сыворотки 1:200 и более. Обычно она наступает в больших разведениях. Если наблюдается групповая агглютинация с двумя или тремя антигенами, то учет реакции проводится по максимальному разведению сыворотки.

14. РА на стекле капельным способом. Положительная реакция подтверждается развернутой РА.

15. Перед вакцинацией ставится проба Манту с целью определения поствакцинального противотуберкулезного нестерильного иммунитета. Ревакцинации подлежат лица с отрицательной пробой Манту. Для постановки пробы применяются очищенный туберкулин (ППД-Л) – очищенный белок туберкулезной палочки.

16. РП по Асколи. Для постановки реакции преципитации необходимо иметь: преципитиноген - гаптен B. antanthracis (экстракт из тканей), преципитин (преципитирующая противосибиреязвенная сыворотка) и физиологический раствор.

17. Ингредиенты: парные сыворотки крови (сыворотки, взятые в начале и конце заболевания), диагностикум вируса гриппа, комплемент (сыворотка морской свинки), гемолитическая сыворотка, 3% взвесь эритроцитов барана, физиологический раствор. При положительной реакции наблюдается гемагглютинация, при отрицательной - гемолиз эритроцитов (лаковая кровь). Диагностическое значение имеет четырехкратное увеличение титра антител во второй сыворотке.

18. Аллантоисная жидкость куриного эмбриона, диагностические противогриппозные типоспецифические сыворотки: А0, А1, А2; 5% взвесь куриных эритроцитов, физиологический раствор.

Реакция ставится на стекле капельным способом. На стекло наносят по 1 капле диагностических сывороток и исследуемого материала, перемешивают, затем добавляют 1 каплю взвеси эритроцитов. При положительной реакции наблюдается гомогенное покраснение, а при отрицательной – выпадение хлопьев красного цвета (гемагглютинация).

19. Смыв из носоглотки, диагностическая видоспецифическая сыворотка с антителами против аденовируса, индикатор реакции (тканевые культуры или эритроциты).При положительной реакции отмечается задержка цитопатогенного действия в культуре тканей или отсутствие гемагглютинации).

20. РПГА. Необходимые ингредиенты: испытуемая сыворотка в различных разведениях (1:10, 1::20, 1:40 и др); эритроцитарные диагностикумы (дифтерийный и столбнячный),физиологический раствор, контрольные сыворотки(противодифтерийная и противостолбнячная) с активностью 10МЕ/мл.

Учет реакции проводят по степени агглютинации эритроцитов. При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде компактной точки или толстого кольца, при положительной - оседают в виде ровного слоя клеток с неровным краем (в виде зонтика).

Титром антитоксина в исследуемом материале считают последнее максимальное разведение, где еще наблюдается агглютинация.

21. Можно использовать реакцию флоккуляции. Ингредиенты реакции: противодифтерийная сыворотка в различных разведениях, дифтерийный анатоксин с активностью 1Lf, физиологический раствор.

Активность сыворотки выражается в МЕ/мл. (минимальное количество сыворотки, которое даёт интенсивную «инициальную» флоккуляцию с 1Lf анатоксина). Феномен флоккуляции – (помутнение) – внешнее проявление образования комплекса анатоксин + антитоксин в оптимальных количественных соотношениях ингредиентов.

22. Нет, т.к. реакция может быть положительной в 3-х случаях: у больных, переболевших и вакцинированных. Рекомендуется повторная постановка реакции через 10 – 14 дней для определения нарастания титра антител в 4 и более раза, что определяется только у больных.

23. Подтвердить диагноз можно с помощью ИФА определением противобруцеллезных IgM и IgG. IgM является показателем острого бруцеллеза.

24. Двухкратные разведения исследуемой сыворотки, эритроцитарный антительный диагностикум (эритроциты с адсорбированными антитоксинами к экзотоксинам соответствующих видов возбудителей газовой гангрены), физиологический раствор.

25. Реакция термокольцепреципитации по Асколи.

26. Ингредиенты реакции: исследуемая сыворотка крови в различных разведениях, живая лабораторная культура лептоспир, комплемент, физиологический раствор. Учет реакции проводят в препаратах «раздавленной» капли в темном поле или при фазово–контрастной микроскопии. Под воздействием противолептоспирозных бактериолизинов в присутствии комплемента лептоспиры теряют подвижность и распадаются.

27. Проверить наличие иммунитета к скарлатине у контактных детей можно с помощью РПГА.. Ингредиенты реакции: испытуемая сыворотка (разводят физ. раствором от 1:10 до 1:20480 в 12 лунках. полистероловой пластины), диагностикум скарлатинозный эритроцитарный (анатоксин Str.pyogenes, адсорбированный на поверхности эритроцитов), противодифтерийная контрольная сыворотка с активностью 10 МЕ/мл, физиологический раствор;

Титром антитоксина в исследуемом материале считают последнее максимальное разведение, которое еще вызывает агглютинацию эритроцитов.

28. Туберкулин применяется для постановки кожно-аллергической пробы с целью выявления специфической сенсибилизации к инфекционному аллергену, что возникает в результате текущего, перенесенного заболеваний, вакцинации или инфицирования. Для специфической профилактики применяется вакцина BCG.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

Основная литература:

1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник для студентов мед. вузов / под ред. А. А. Воробьева. – 2-е изд., испр. и доп. М.: МИА, 2012. – 702 с.

2. Коротяев А. И., Бабичев. С. А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология [Электронный ресурс]: учебник для мед. вузов. СПб.: СпецЛит, 2010.

Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785299004250.html.

3. В. В. Зверев, М. Н. Бойченко. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология [Электронный ресурс]: учебник: в 2 т. Т. 1. М.:Гэотар Медиа, 2010.

Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142241.html.

4. В. В. Зверев, М. Н. Бойченко. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология [Электронный ресурс]: учебник: в 2 т. Т. 2. М.:Гэотар Медиа, 2010.

Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142242.html.

5. Хаитов Р.М. Иммунология: учебник второе издание. - М.: Гэотар Медиа, 2011. – 312с.

6. Хаитов Р.М. Иммунология [Электронный ресурс]: учебник. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009.

Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785970412220.html.

 

Дополнительная литература:

1. Л. В. Ковальчук, Г. А. Игнатьева, Л. В. Ганковская и др. Иммунология. Практикум. Клеточные, молекулярные и генетические методы исследования [Электронный ресурс]: учебное пособие. М.: Гэотар Медиа, 2010.

2. Р. М. Хаитов, А. А. Ярилин, Б. В. Пинегин Иммунология [Электронный ресурс]: атлас. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011.

Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785970418581.html

3. Е.Н. Медуницына, Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин. Методы диагностики в аллергологии и иммунологии [Электронный ресурс]. M.: ГЭОТАР-Медиа, 2011.

Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/970409039V0001.html.

4. Н. Ф. Снегова, Р. Я. Мешкова, М. П. Костинов, О. О. Магаршак. Вакцинопрофилактика в аллергологии и иммунологии [Электронный ресурс]. M.: ГЭОТАР-Медиа, 2011.

Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/970409039V0005.html.

 

Давлетшина Гульшат Кинзябулатовна

Габидуллин Зайнулла Гайнулинович

Ахтариева Айгуль Атласовна

Туйгунов Марсель Маратович

Булгаков Айдар Казбекович

Савченко Татьяна Алексеевна

Хуснаризанова Рауза Фазыловна

Габидуллин Юлай Зайнуллович

Алсынбаев Махамат Махаматуллович