Работа № 1. Принципиальная схема лабораторной диагностики клостридиальных инфекций

Модульная единица 2.2.

«Частная микробиология. Анаэробные инфекции. Туберкулез. Дифтерия. Коклюш. Спирохетозы. ООИ»

 

Принципиальная схема лабораторной диагностики бактериальных инфекций

Забор материала:

1) от больного (в зависимости от входных ворот инфекции и локализации возбудителя в организме) до приема химиотерапевтических препаратов

2) от трупа – в зависимости от патогенеза заболевания

3) из очага – источник зависит от механизма циркуляции возбудителя в абиотической среде

Микроскопия	Бактериологический	Серодиагностика
Цель:изучение морфологических и тинкториальных свойств возбудителей. Выдача ориентировочного или окончательного ответа. Методы: 1.Экспресс-метод: прямая РИФ с применением для диагностики люминесцирующих сывороток.       2.Основной метод: окраска по Граму.     3.Изучение подвижности в препаратах «раздавленная» капля, «висячая» капля.       4.Сложные и простые методы для выявления морфологических особенностей возбудителя.	Цель:выделение возбудителя в чистом виде при посеве на специальные среды с последующей идентификацией. I этап – Посев и получение изолированных колоний. Плотные питат.ср. Жидкие питат.ср.     II этап – изучение изолированных колоний. 1)изучение культуральных свойств «подозрительных» колоний 2)изучение морфологических и тинкториальных свойств м/о из «подозрительных» колоний 3)отсев на скошенный агар (Ресселя, Клиглера)   Накопление чистой культуры (с контролем при микроскопии)   III этап – идентификация (определение рода, вида, серовара, биовара, фаговара и т.д.) 1.Изучение культуральных свойств Плотные питат.ср. Жидкие питат.ср.     2.Изучение морфологии микробной клетки     3.Изучение биохимических свойств (по набору ферментов)   4.Изучение антигенной структуры возбудителя в РА при помощи иммунных диагностических сывороток (Сероидентификация)     5.Изучение фаголизабельных свойств     6.Изучение вирулентных свойств возбудителя, выделенной чистой культуры, обнаружение токсинов возбудителя. 7.Антибиотикочувствительность.     IV этап – выдача окончательного ответа из баклаборатории.	Цель:изучение сывороток больного с целью выявления динамики нарастания титра специфических иммуноглобулинов. Реакции: 1.РА 2.РПГА 3.РСК 4.Непрямая РИФ 5.ИФА 6.РП 7.РН   Биопроба – обнаружение экзотоксинов возбудителей, воспроизведение инфекций (туляремия, чума).   Аллергическая проба (на макроорганизме)

Занятие № 2.2.1

Анаэробы. Лабораторная диагностика клостридиальных и неклостридиальных анаэробных инфекций

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

изучить биологические свойства возбудителей анаэробных инфекций и принципы лабораторной диагностики клостридиальных и неклостридиальных анаэробных инфекций. Классифицировать препараты для идентификации, лечения и профилактики анаэробных инфекций.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Характеристику биологических свойств возбудителей.

2. Эпидемиологию, патогенез, восприимчивость и иммунитет при
анаэробных инфекциях.

3. Основные клинические проявления заболеваний при анаэробных
инфекциях.

4. Принципы лабораторной диагностики.

5. Препараты для идентификации, лечения и профилактики заболеваний.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

· дифференцировать возбудителей анаэробных инфекций по
морфологическим, биохимическим, агглютинабельным,
фаголизабельным свойствам;

· интерпретировать результаты серологических реакций;

· классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ: алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей анаэробных инфекций.

РН на белых мышах

I. Этап: Подготовка исследуемого материала.

экстракт

II. Этап: Обнаружение токсина

экстракт

 

экстракт +

поливалентная

противоботулиническая

сыворотка

Экспозиция 30-40 мин

По 0,5 млПо 0,5 мл

 

Лабораторные животные

Лабораторные животные

выживают погибают

Результат: обнаружен ботулинический токсин

 

БАКТЕРИОСКОПИЯ

Cl. septicum)

Результат:______________________________________________________________________________________________________________

 

б) Возбудитель столбняка (Cl. tetani)

Результат:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

в) Возбудитель ботулизма (Cl. botulinum)

Результат:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

БАКТЕРИОЛОГИЯ

ГАЗОВАЯ ГАНГРЕНА

Таксономия возбудителя:

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид________________________________________________________________________

Морфологические и тинкториальные свойства _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культуральные и биохимические свойства ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Резистентность _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции_____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период_______________________________________________________________________

 

Основные факторы патогенности ________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

 

Основные фазы патогенеза________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Клинические симптомы_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Иммунитет___________________________________________________________________

Основные направления лабораторной диагностики _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты) _______________________________________________________________________________________________________________________________________________

СТОЛБНЯК

Таксономия возбудителя:

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид________________________________________________________________________

Морфологические и тинкториальные свойства _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культуральные и биохимические свойства ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура _____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Резистентность _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции_____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период_______________________________________________________________________

 

Основные факторы патогенности ________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

 

Основные фазы патогенеза_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Клинические симптомы____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Иммунитет________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Основные направления лабораторной диагностики ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты) ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

БОТУЛИЗМ

Таксономия возбудителя:

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид________________________________________________________________________

Морфологические и тинкториальные свойства __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культуральные и биохимические свойства _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Резистентность ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции_____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период_______________________________________________________________________

Основные факторы патогенности ________________________________________________

_____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

 

Основные фазы патогенеза_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Клинические симптомы____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Иммунитет___________________________________________________________________

Основные направления лабораторной диагностики ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты) ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Ситуационные задачи

 

1. В инфекционную больницу поступил больной с подозрением на пищевой ботулизм. Для диагностики в целях обнаружения в крови больного токсина был использован биологический метод. Для выявления источника инфекции прове­дено бактериологическое исследование остатков рыбных кон­сервов, которые употреблялись пострадавшим в пищу. Учесть результаты бактериологического метода и биологической про­бы. Дать диагностическую оценку методов.

Выделяется следующий материал для учета результатов ис­следования: пробирка с исследуемым материалом; рисунок с результатом биологического метода; микропрепарат чистой культуры С. botulinum; пробирка с ростом палочки ботулизма на тиогликолиевой среде.

Вопросы 1. Под­тверждается ли диагноз? Если да, то почему? 2. Какая иммуно­логическая реакция определяет результат биологической про­бы? 3. Достаточно ли представленных данных бактериологиче­ского метода, чтобы считать консервы источником заболева­ния? Ответ объяснить. 4. Что необходимо обнаружить в пище­вых продуктах, чтобы доказать, что они явились источником заболевания?

 

2. Больной поступил в хирургическое отделение с проникающим ранением брюшной полости. После операции на 2-е сутки развились симптомы перитонита. Для определения этиологии перитонита проведено микроскопическое, бактериологическое исследование перитониального экссудата путем посева на питательные среды (Эндо, ЖСА, МПА).

При микроскопии перитониального экссудата обнаружены Гр- палочки. Роста микрофлоры на питательных средах не выявлено. Учитывая наличие клинических симптомов, характерных для неклостридиальных анаэробов, проведено повторное бактериоскопическое исследование экссудата на кровяном агаре. Учтите результат бактериологического исследования.

Вопросы 1. Установить этиологию перитонита. 2. Чем объясняется отсутствие роста микрофлоры на питательных средах Эндо, ЖСА, МПА. 3. Укажите возможные пути проникновения.

 

Пример решения задачи

Пострадавшему в автомобильной катастрофе больному С, 45 лет, после оказания экстренной хирургической помощи было введено 3000 ME противостолбнячной антиток­сической сыворотки. Вопрос о давности вакцинации против столбняка не был выяснен. Спустя два месяца С. был доставлен в инфекционное отделение с диагнозом столбняка. В течение указанного срока никаких других травм не было.

 

Вопросы для студентов	Ответы
Мог ли развиться столбняк у данно­го больного в результате автоката­строфы?	Да, мог (так называемый «поздний» столбняк)
Основные клинические симптомы, позволяющие поставить диагноз столбняка	Тризм (тоническое напряжение жевательных мышц); спазм мимичес­кой мускулатуры (сардоническая улыбка); тоническое напряжение мышц затылка; опистотонус
Возможная причина развития столб­няка у данного больного?	Введение пострадавшему только противостолбнячной сыворотки, со­здающей кратковременный пассив­ный иммунитет (до 2 месяцев); возбуди­тель мог сохраниться в организме и в дальнейшем вызвать это заболева­ние.
Укажите врачебные ошибки, кото­рые могли способствовать развитию заболевания	Необходимо было ввести столб­нячный анатоксин. Не выяснено, проводилась ли и в ка­кие сроки активная иммунизация против столбняка - противостолб­нячным анатоксином
Какой препарат используется для со­здания активного иммунитета против столбняка, какой иммунитет по на­правленности он создает и на какой срок (при однократном введении)?	Анатоксин; иммунитет - антитокси­ческий; срок полгода - год

Теоретическая справка

К работе № 1

Clostridium perfringens

К работе № 4

Схема патогенеза ботулизма

Ведущую роль патогенеза ботулизма играет токсин. На сегодняшний день патогенез ботулизма ещё недостаточно изучен, существуют разногласия по вопросу действия токсина на центральную нервную систему, вегетативную нервную систему и другие структуры. При обычном заражении он попадает в организм вместе с пищей, содержащей также и вегетативные формы возбудителей — продуцентов яда. Ботулотоксин всасывается из слизистой оболочки или лёгких. В желудке под действием соляной кислоты желудочного сока ботулотоксин не разрушается. Наиболее значимо поступление токсина через слизистую оболочку желудка и тонкой кишки, откуда он попадает в кровь и разносится по всему организму, нарушая деятельность нервных клеток, ответственных за передачу возбуждения к мышцам. При ботулизме поражаются все черепные нервы, кроме чувствительных, таких как обонятельный, зрительный, преддверно-улитковый нервы. В первую очередь, страдают мышцы глаз, глотки и гортани, затем дыхательные мышцы. Особой чувствительностью к ботулотоксину обладают мотонейроны спинного и продолговатого мозга, что проявляется развитием бульбарного и паралитического синдромов. Ботулотоксин блокирует освобождение ацетилхолина в холинергических синапсах, что обусловливает развитие периферических параличей. Холинэстеразная активность в синапсах практически не изменяется.

Также в патогенезе ботулизма большую роль играет гипоксия. Развитие прогрессирующей острой дыхательной недостаточности обусловлено угнетением активности больших мотонейронов передних рогов спинного мозга, иннервирующих дыхательную мускулатуру. Гипоксическая гипоксия нарастает при обтурации бронхов аспирационными рвотными массами, слюной и пищей, что связано с парезами мышц гортани, глотки и надгортанника. Из-за гипосаливации воспаляется слизистая оболочка ротоглотки, может развиваться гнойный паротит вследствие восходящей инфекции. Гибель обычно наступает от вентиляционной дыхательной недостаточности и иногда от внезапной остановки сердца. Токсинемия вызывает угнетение ферментов пентозофосфатного шунта, ингибирование клеточных Na+/K+ насосов и обусловливает развитие гемической гипоксии.

Фармакологическое действие токсинов включает связывание Н-цепи с мембраной, поглощение токсина и расщепление L-цепью белка SNAP-25 — одного из белков семейства SNARE — на мембране синаптических пузырьков, что блокирует слияние синаптических пузырьков с пресинаптической мембраной нервного окончания.

Модульная единица 2.2.

«Частная микробиология. Анаэробные инфекции. Туберкулез. Дифтерия. Коклюш. Спирохетозы. ООИ»

 

Принципиальная схема лабораторной диагностики бактериальных инфекций

Забор материала:

1) от больного (в зависимости от входных ворот инфекции и локализации возбудителя в организме) до приема химиотерапевтических препаратов

2) от трупа – в зависимости от патогенеза заболевания

3) из очага – источник зависит от механизма циркуляции возбудителя в абиотической среде

Микроскопия	Бактериологический	Серодиагностика
Цель:изучение морфологических и тинкториальных свойств возбудителей. Выдача ориентировочного или окончательного ответа. Методы: 1.Экспресс-метод: прямая РИФ с применением для диагностики люминесцирующих сывороток.       2.Основной метод: окраска по Граму.     3.Изучение подвижности в препаратах «раздавленная» капля, «висячая» капля.       4.Сложные и простые методы для выявления морфологических особенностей возбудителя.	Цель:выделение возбудителя в чистом виде при посеве на специальные среды с последующей идентификацией. I этап – Посев и получение изолированных колоний. Плотные питат.ср. Жидкие питат.ср.     II этап – изучение изолированных колоний. 1)изучение культуральных свойств «подозрительных» колоний 2)изучение морфологических и тинкториальных свойств м/о из «подозрительных» колоний 3)отсев на скошенный агар (Ресселя, Клиглера)   Накопление чистой культуры (с контролем при микроскопии)   III этап – идентификация (определение рода, вида, серовара, биовара, фаговара и т.д.) 1.Изучение культуральных свойств Плотные питат.ср. Жидкие питат.ср.     2.Изучение морфологии микробной клетки     3.Изучение биохимических свойств (по набору ферментов)   4.Изучение антигенной структуры возбудителя в РА при помощи иммунных диагностических сывороток (Сероидентификация)     5.Изучение фаголизабельных свойств     6.Изучение вирулентных свойств возбудителя, выделенной чистой культуры, обнаружение токсинов возбудителя. 7.Антибиотикочувствительность.     IV этап – выдача окончательного ответа из баклаборатории.	Цель:изучение сывороток больного с целью выявления динамики нарастания титра специфических иммуноглобулинов. Реакции: 1.РА 2.РПГА 3.РСК 4.Непрямая РИФ 5.ИФА 6.РП 7.РН   Биопроба – обнаружение экзотоксинов возбудителей, воспроизведение инфекций (туляремия, чума).   Аллергическая проба (на макроорганизме)

Занятие № 2.2.1

Анаэробы. Лабораторная диагностика клостридиальных и неклостридиальных анаэробных инфекций

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

изучить биологические свойства возбудителей анаэробных инфекций и принципы лабораторной диагностики клостридиальных и неклостридиальных анаэробных инфекций. Классифицировать препараты для идентификации, лечения и профилактики анаэробных инфекций.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Характеристику биологических свойств возбудителей.

2. Эпидемиологию, патогенез, восприимчивость и иммунитет при
анаэробных инфекциях.

3. Основные клинические проявления заболеваний при анаэробных
инфекциях.

4. Принципы лабораторной диагностики.

5. Препараты для идентификации, лечения и профилактики заболеваний.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

· дифференцировать возбудителей анаэробных инфекций по
морфологическим, биохимическим, агглютинабельным,
фаголизабельным свойствам;

· интерпретировать результаты серологических реакций;

· классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ: алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей анаэробных инфекций.

Работа № 1. Принципиальная схема лабораторной диагностики клостридиальных инфекций

Самостоятельная работа: разобрать особенности лабораторной диагностики газовой гангрены, столбняка и ботулизма

Исследуемый материал:

____________________

____________________

____________________

 

 

Работа № 2. Метод выявления токсинов возбудителей (на примере ботулинического токсина)

Цель: определить наличие и тип ботулинического токсина в исследуемом материале.

РН на белых мышах

I. Этап: Подготовка исследуемого материала.

экстракт