Индивидуальные и групповые автопоилки: для животных. Схемы и конструкции...
Кормораздатчик мобильный электрифицированный: схема и процесс работы устройства...
Топ:
Выпускная квалификационная работа: Основная часть ВКР, как правило, состоит из двух-трех глав, каждая из которых, в свою очередь...
Оценка эффективности инструментов коммуникационной политики: Внешние коммуникации - обмен информацией между организацией и её внешней средой...
Теоретическая значимость работы: Описание теоретической значимости (ценности) результатов исследования должно присутствовать во введении...
Интересное:
Аура как энергетическое поле: многослойную ауру человека можно представить себе подобным...
Мероприятия для защиты от морозного пучения грунтов: Инженерная защита от морозного (криогенного) пучения грунтов необходима для легких малоэтажных зданий и других сооружений...
Финансовый рынок и его значение в управлении денежными потоками на современном этапе: любому предприятию для расширения производства и увеличения прибыли нужны...
Дисциплины:
2017-10-07 | 237 |
5.00
из
|
Заказать работу |
|
|
Занятие № 23
ТЕМА. ПЕРЕВАРИВАНИЕ И ВСАСЫВАНИЕ ЛИПИДОВ. УЧАСТИЕ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ В ПРОЦЕССЕ УСВОЕНИЯ ЛИПИДОВ.
Цель занятия: 1.Повторить физико-химические свойства и био-логическую роль липидов.
2.Знать процессы переваривания и всасывания липидов, роль желчных кислот.
3.Ознакомиться с методами качественного определения желчных кислот и активности липаз.
Исходный уровень знаний:
- строение и свойства высших жирных кислот;
- строение и свойства нейтральных жиров;
- строение и свойства сложных липидов;
- биологическая роль липидов;
- классификация и номенклатура ферментов.
Содержание занятия.
I.2.Строение и свойства природных высших жирных кислот на примере пальмитиновой, олеиновой, линолевой и других кислот.
Классификация липидов.
Физико-химические свойства и биологическое значение триацилглицеринов.
Особенности строения и биологическая роль фосфолипидов.
Особенности строения и биологическая роль сфинголипидов.
Особенности строения и биологическая роль стероидов.
Переваривание и всасывание липидов.
Физиологическое значение желчных кислот.
II.1. Работа № 1. ВЛИЯНИЕ ЖЕЛЧИ НА АКТИВНОСТЬ
ЛИПАЗЫ.
Липаза - малоспецифичный фермент, действующий на многие жиры при рН=9,0, гидролитически расщепляющий эфирную связь в a-положении (т.е. в крайнем положении).
Принцип метода.
Скорость действия липазы в отдельных порциях молока можно узнать по количеству жирных кислот, образующихся при гидролизе жира за определенный промежуток времени. Количество жирных кислот (ЖК) определяют титрованием щелочью в присутствии фенолфталеина. В случае добавления в пробу желчи липаза активируется и гидролиз жиров молока протекает с большей скоростью. Результаты определения выражают в миллилитрах титрованного раствора щелочи. Строят графики, где по оси ординат откладывают количество 0,05 N раствора щелочи в миллилитрах, пошедшей на нейтрализацию жирных кислот, а на оси абсцисс - время в минутах.
|
Порядок выполнения работы.
Реактивы (мл) | Колба № 1 | Колба № 2 |
Молоко | 10,0 | 10,0 |
5% р-р панкреатина | 1,0 | 1,0 |
Дистиллированная вода | 1,0 | - |
Желчь | - | 1,0 |
Быстро перемешать и поместить в термостат при t=380С |
Каждые 15 мин из обеих колб переносить в стаканчики по 1,0 мл смеси и сразу титровать 0,05 N раствором NaОН до слаборозового окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек. Всего провести 4 определения. По полученным данным построить 2 графика в одной системе координат.
РЕЗУЛЬТАТЫ:
мл
0,05 N р-р NaOH
0 15 30 45 время в мин
ВЫВОД:
Работа № 2. ДЕЙСТВИЕ ФОСФОЛИПАЗ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ
ЖЕЛЕЗЫ.
В поджелудочной железе и ее соке содержится несколько фосфолипаз - ферментов, ускоряющих гидролиз фосфолипидов, в частности, лецитина. Лецитин под действием фосфолипаз А1, А2, С и D расщепляется на глицерин, жирные кислоты, фосфорную кислоту и холин. Точки приложения действия фосфолипаз на лецитин (фосфатидилхолин):
фосфолипаза А1
фосфолипаза А2 СH2-O-CO-R
|
R-CO-О-CH
|
CH2-O-PO-O-CH2-СH2-N(CH3)3
|
OH
фосфолипаза С фосфолипаза Д
Принцип метода.
Об активности фосфолипаз поджелудочной железы судят по появлению свободной фосфорной кислоты, способной образовывать желтый осадок при нагревании с молибдатом аммония.
Порядок выполнения работы.
В две пробирки налить по 5 кап. суспензии яичного желтка. В первую пробирку добавить 2 кап. панкреатина, а во вторую (контроль) - 2 кап. воды. Обе пробирки поместить в термостат при t=380 C на 30 мин. После инкубации в обе пробирки налить по 5 кап. молибденового реактива, нагреть их на пламени горелки и охладить водой под краном.
РЕЗУЛЬТАТЫ:
ВЫВОД:
Работа № 3. КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ НА ЖЕЛЧНЫЕ
|
КИСЛОТЫ.
Переваривание и всасывание липидов и жирорастворимых витаминов нарушается при воспалении печени, желчного пузыря и при желчнокаменной болезни.
Принцип метода.
Желчные кислоты можно открыть реакцией Петтенкофера. При взаимодействии желчной кислоты с оксиметилфурфуролом, образующимся из тростникового сахара под действием концентрированной серной кислоты, появляется красно-фиолетовое окрашивание.
Порядок выполнения работы.
На сухую чашку Петри, под которую подложен лист белой бумаги для лучшей визуализации результатов, нанести 2 кап желчи, 2 кап 20% раствора сахарозы и тщательно перемешать стеклянной палочкой, затем прилить 7 кап концентрированной H2SO4 и вновь перемешать. Через 2-3 мин отметить появление окраски.
РЕЗУЛЬТАТ:
III.2. Контрольные вопросы.
Какие условия нужны для переваривания липидов?
В каком отделе желудочно-кишечного тракта и под действием каких ферментов происходит основной распад липидов и почему?
Какие Вы знаете промежуточные и конечные продукты переваривания триглицеридов, фосфолипидов?
Как и в каком отделе желудочно-кишечного тракта происходит всасывание продуктов переваривания липидов?
Какие фосфолипиды Вы знаете?
Что такое лизофосфатидилхолины?
Что такое парные желчные кислоты?
Материал для самоподготовки.а)1. с.363-370; II, III
Занятие № 24
ТЕМА. ОКИСЛЕНИЕ И СИНТЕЗ ЖИРНЫХ КИСЛОТ. МЕТА-БОЛИЗМ КЕТОНОВЫХ ТЕЛ. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕ-ЛЕНИЕ ТРИГЛИЦЕРИДОВ В КРОВИ.
Цель занятия: 1.Усвоить химизм и значение b-окисления высших жирных кислот в тканях.
2.Уяснить процесс синтеза ВЖК в тканях.
3.Знать метаболизм кетоновых тел.
4.Овладеть методами качественного определения кетоновых тел и количественного определения триглицеридов в сыворотке крови.
Исходный уровень знаний:
- особенности строения ВЖК - компонентов липидов человека;
- структура нейтральных жиров;
- классификация и номенклатура ферментов;
- строение и биологическая роль витаминов РР, В2, В3, Н.
Содержание занятия.
I.2. Окисление ВЖК в тканях: локализация в клетке, химизм, энергетический выход (в молекулах АТФ).
Окисление глицерина в тканях.
Энергетический баланс окисления триацилглицеринов.
Синтез ВЖК: локализация в клетке, последовательность реакций, ферменты.
|
Участие витаминов в процессах окисления и синтеза ВЖК.
Современные представления о синтезе кетоновых тел (локализация в организме, химизм, значение).
II.1. Работа № 1. КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА АЦЕТОН И АЦЕТОУКСУСНУЮ КИСЛОТУ.
К кетоновым телам относятся ацетон, b-оксимасляная и ацетоуксусная кислоты. В крови в норме они содержатся в очень небольшом количестве - 13,4-185,2 мкмоль/л (0,14-1,9 мг%). В моче обычными реакциями ацетоновые тела у здоровых людей не определяются.
а) Проба Легаля на ацетон.
Принцип метода и химизм реакции.
Ацетон и ацетоуксусная кислота в щелочной среде образуют с нитропруссидом натрия продукт оранжево-красного цвета.
СН3-СО-СН3 + Na2[Fe(CN)5NO] + 2NaOH
aцетон нитропруссид натрия
Na4[Fe(CN)5NO=CH-CO-CH3] + 2H2O
комплексное соединение
После подкисления ледяной уксусной кислотой образуется соединение вишневого цвета.
Na4[Fe(CN)5NO=CH-CO-CH3] + CH3COOH
Na3[Fe(CN)5-NO-CH2-CO-CH3] + CH3COONa
Порядок выполнения работы.
В пробирку внести 1 кап мочи, 1 кап. 10% раствора NaOH и 1 кап. нитропруссида Na. Отметить окраску. Добавить 3 кап. ледяной уксусной кислоты.
РЕЗУЛЬТАТ:
б) Проба Герхарда на ацетоуксусную кислоту.
Принцип метода и химизм реакции.
Енольная форма ацетоуксусной кислоты вступает в реакцию с хлорным железом с образованием комплексного соединения вишнево-красного цвета. При стоянии окраска бледнеет вследствие спонтанного декарбоксилирования ацетоуксусной кислоты.
Порядок выполнения работы.
К 5 кап. мочи прибавить по каплям 5% раствор хлорного железа. Зафиксировать появление сначала осадка (FeРО4), а затем окрашивания.
N.B. При кипячении процесс протекает очень быстро. Сходное окрашивание возможно после приема салициловой кислоты, антипирина и др. лекарственных препаратов, но при этом окраска при стоянии и кипячении не исчезает.
РЕЗУЛЬТАТ:
Клинико-диагностическое значение.
Гиперкетонемия и кетонурия наблюдаются при сахарном диабете, приеме кетогенной пищи (дефицит углеводов), голодании, гиперпродукции гормонов (антагонистов инсулина), напр., кортикостероидов, болезни Гирке.
Гипокетонемия не имеет диагностического значения.
|
При сахарном диабете, когда печень бедна гликогеном, происходит усиленный распад жиров как источника энергии. В результате окисления ВЖК накапливается ацетил-КоА, что способствует его конденсации с накоплением кетоновых тел.
В раннем детском возрасте продолжительные желудочно-кишечные заболевания (дизентерия, токсикозы) могут вызвать кетонемию в результате голода и истощения.
Работа № 2. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТРИАЦИЛ-ГЛИЦЕРИДОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
Принцип метода.
липаза
Триацилглицериды → глицерин + жирные кислоты
глицерокиназа
Глицерин + АТФ → глицерил-3-фосфат + АДФ
ГФО
Глицерил-3-фосфат + О2 → диоксиацетонфосфат + 2Н2О2
пероксидаза
Н2О2 + 4-ААР + 4-хлорфенол → хинонимин + 4 Н2О
Концентрация хинонимина, определяемая фотометрически, пропорциональна концентрации триглицеридов в пробе.
Порядок выполнения работы
Реактивы (мл) | Р-р сравнения | Эталон | Проба |
Рабочий реагент | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
Дистиллированная вода | 0,02 | - | - |
Калибратор | - | 0,02 | - |
Сыворотка крови | - | - | 0,02 |
Содержимое пробирок перемешать, инкубировать не менее 15 мин. при t=26-250Сили 10 мин при t=370С |
Измерить оптическую плотность опытной и калибровочной проб против контрольной пробы в кювете 1 см при длине волны 500 нм (490-520 нм). Окраска стабильна не менее часа после окончания инкубации при предохранении от прямого света.
РАСЧЕТ. По оптической плотности пробы (А) и калибратора (Б) рассчитать содержание триглицеридов (Х) пробы по формуле:
Х = А: Б • 200 мг/100мл
или Х = А: Б • 2,29 ммоль/л
В норме содержание триглицеридов в сыворотке крови составляет 0,15-1,71 ммоль/л или 13-160 мг/100 мл.
Группа риска - 1,71- 2,29 ммоль/л или 160-2060 мг/100 мл
Патологические показатели - >2,29 ммоль/л или 2000 мг/100 мл
РЕЗУЛЬТАТ:
ВЫВОД:
III.2. Контрольные вопросы.
Какие Вы знаете кетоновые тела?
Каково содержание кетоновых тел в крови в норме?
Где синтезируются кетоновые тела?
Как называется повышенное выделение кетоновых тел с мочой?
Каковы причины кетонурии?
Какова роль триацилглицеринов в организме?
Как подсчитывается энергетическая ценность окисления триацилглицеринов?
Сколько в норме в сыворотке крови триглицеридов?
Материал для самоподготовки. а)1 с.363-39; II, III
Занятие № 25
ТЕМА. БИОСИНТЕЗ ЛИПИДОВ И ХОЛЕСТЕРИНА. РЕГУЛЯ-ЦИЯ И НАРУШЕНИЯ ЛИПИДНОГО ОБМЕНА. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХОЛЕСТЕРИНА.
Цель занятия: 1.Изучить обмен холестерина у человека.
2.Усвоить синтез триглицеридов и фосфоглицеридов.
3.Ознакомиться с регуляцией и патологией липидного обмена.
4.Овладеть методом количественного определения холестерина в сыворотке крови (по Ильку).
Исходный уровень знаний:
|
- строение и классификация липидов;
- регуляция активности ферментов;
- строение ц-АМФ, АТФ, ЦТФ;
- жирорастворимые витамины.
Содержание занятия.
I.2. Синтез и ресинтез триглицеридов.
Пути синтеза и ресинтез глицерофосфолипидов.
Синтез холестерина: локализация в организме, этапы, химизм I стадии.
Биологическое значение и структура стероидов - производных холестерина.
Выведение холестерина из организма.
Липопротеиды: виды, состав.
Регуляция липидного обмена: роль ЦНС, эндокринной системы, ц-АМФ.
Патология липидного обмена: причины, симптоматика, примеры энзимопатий.
II.1. Работа № 1. РЕАКЦИЯ ЛИБЕРМАННА-БУРХАРДТА
НА ХОЛЕСТЕРИН.
Холестерин и его эфиры содержатся в различных тканях и жидкостях животных: головном мозге, кожном сале, крови, желчи. В мозге холестерин в норме присутствует почти исключительно в свободном виде, а не в виде эфиров. В белом веществе мозга содержится 4-5% холестерина на влажную массу.
Принцип метода.
Раствор холестерина в хлороформе дает с уксусным ангидридом и концентрированной серной кислотой красное окрашивание, переходящее затем в синее и зеленое. Под действием концентрированной серной кислоты происходит отщепление воды от вторичного спирта холестерина с последующей конденсацией непредельных углеводородов, соединяющихся с серной кислотой, и образованием окрашенных продуктов.
Порядок выполнения работы.
К 1 мл хлороформного экстракта из мозга добавить 10 кап уксусного ангидрида и 2 кап. концентрированной H2SO4 и хорошо перемешать. Отметить изменение окраски.
РЕЗУЛЬТАТ:
Работа № 2. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ХОЛЕСТЕ-РИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
Принцип метода.
Холестерин взаимодействует с ацетангидридом и серной кислотой с образованием соединения зеленого цвета. Интерференция белков подавлена 2,5-диметилбензосульфоновой кислотой.
Порядок выполнения работы.
Реактивы (мл) | Р-р сравнения | Эталон | Проба |
Сыворотка крови | - | - | 0,1 |
Стандартный –р (реактив 1) | - | 0,1 | - |
Дистиллированная вода | 0,1 | - | - |
Реактив 2 | 3,0 | 3,0 | 3,0 |
Перемешать, на водяную баню t=20оС на 5 мин. | |||
Реактив 3 (Н2SO4) | 0,6 | 0,6 | 0,6 |
Быстро перемешать, на водяную баню t=20оС на 10 мин. |
Измерить оптическую плотность пробы и эталона против раствора сравнения в кювете 1 см при длине волны 560-590 нм.
РАСЧЕТ:
А1
Х =, где
А2
Х -количество холестерина в ммоль/л
А1 – оптическая плотность пробы
А2 – оптическая плотность стандарта.
РЕЗУЛЬТАТ:
ВЫВОД:
Клинико-диагностическое значение.
При нарушении жирового обмена холестерин может накапливаться в крови. Увеличение содержания холестерина в крови (гиперхолестеринемия) наблюдается при атеросклерозе, сахарном диабете, механической желтухе, нефрите, нефрозе (особенно при липоидных нефрозах), гипотиреозе.
Понижение холестерина в крови (гипохолестеринемия) наблюдается при анемиях, голодании, туберкулезе, гипертиреозе, раковой кахексии, паренхиматозной желтухе, поражении центральной нервной системы, лихорадочных состояниях, при введении инсулина.
III.2. Контрольные вопросы.
В каком виде холестерин содержится в сыворотке крови и тканях?
В чём заключается физиологическое значение холестерина?
Какова нормальная концентрация холестерина в сыворотке крови?
При какой патологии наблюдается гиперхолестеринемия?
Когданаблюдается гипохолестеринемия?
Назовите исходные вещества для синтеза холестерина.
Предшественником каких биологически активных соединений является холестерин?
Материал для самоподготовки. а)1 с.392-408, 556-558, 574-577,
245, 454; II, III
Занятие № 26
КОЛЛОКВИУМ ПО РАЗДЕЛУ:
"ОБМЕН И ФУНКЦИИ ЛИПИДОВ".
Вопросы к коллоквиуму.
1. Общая характеристика и классификация липидов. Биологическая роль в организме. Пищевые липиды, норма суточного потребления.
2. Переваривание и всасывание липидов в желудочно-кишечном тракте (особенности переваривания и всасывания жиров у детей раннего возраста).
3. Переваривание и всасывание сложных липидов (на примере глицерофосфолипидов) в желудочно-кишечном тракте.
4. Желчные кислоты и их роль в процессе пищеварения.
5. Ресинтез триацилглицеринов в кишечной стенке и синтез их в тканях. Физиологическое значение.
6. Ресинтез фосфоглицеролипидов в кишечной стенке и синтез их в тканях. Физиологическое значение.
7. Пути поступления липидов в ткани. Липопротеиды крови: особенности строения, состава и функции.
8. Роль хиломикронов в обмене жиров. Депонирование липидов в жировой ткани. Концентрация липидов в крови.
9. Значение метионина и холина для обмена липидов.
10. Внутриклеточный липолиз. Каскадный механизм активации липазы.
11. Транспорт и утилизация жирных кислот, образующихся при мобилизации жиров. Изменение скорости использования жирных кислот в зависимости от ритма питания и мышечной активности.
12. Бета-окисление высших жирных кислот (ВЖК). Последовательность реакций, связь с цитратным циклом и дыхательной цепью. Физиологическое значение.
13. Окисление глицерина в тканях. Энергетическая ценность этого процесса.
14. Энергетический баланс окисления триацилглицеринов в тканях.
15. Биосинтез ВЖК: последовательность реакций, место синтеза, физиологическое значение.
16. Участие витаминов в окислении и синтезе ВЖК. Роль пентозофосфатного пути обмена глюкозы для синтеза ВЖК. Зависимость скорости биосинтеза от ритма питания и состава пищи.
17. Кетоновые тела: место, химизм, регуляция синтеза. Утилизация кетоновых тел. Физиологическая концентрация кетоновых тел в крови, изменение этого показателя при сахарном диабете и голодании.
18. Представления о биосинтезе холестерина: химизм I стадии, регуляция процесса. Выведение холестерина из организма. Физиологическая концентрация холестерина в крови.
19. Холестерин как предшественник стероидных гормонов, желчных кислот, витамина Д.
20. Роль липопротеидов в обмене холестерина. Гиперхолестеринемия: ее причины и последствия. Современные биохимические основы атеросклероза.
21. Регуляция липидного обмена. Влияние адреналина, глюкагона, инсулина на мобилизацию и депонирование липидов. (Неустойчивость жирового обмена у детей, характер проявления и факторы, ее определяющие.)
22. Патология липидного обмена, обусловленная нарушением переваривания и всасывания жиров. Механизм желчно-каменной болезни.
23. Патология межуточного обмена липидов. Врожденные нарушения обмена: болезни Гоше, Пик-Нимана, Тей-Сакса, ксантоматоз и др.
24. Нарушения, связанные с недостаточным поступлением в организм жирорастворимых витаминов.
25. Витамин D, его влияние на обмен кальция и фосфора. Нарушения минерального обмена при рахите.
|
|
Поперечные профили набережных и береговой полосы: На городских территориях берегоукрепление проектируют с учетом технических и экономических требований, но особое значение придают эстетическим...
Опора деревянной одностоечной и способы укрепление угловых опор: Опоры ВЛ - конструкции, предназначенные для поддерживания проводов на необходимой высоте над землей, водой...
Кормораздатчик мобильный электрифицированный: схема и процесс работы устройства...
Эмиссия газов от очистных сооружений канализации: В последние годы внимание мирового сообщества сосредоточено на экологических проблемах...
© cyberpedia.su 2017-2024 - Не является автором материалов. Исключительное право сохранено за автором текста.
Если вы не хотите, чтобы данный материал был у нас на сайте, перейдите по ссылке: Нарушение авторских прав. Мы поможем в написании вашей работы!