Микробиологическая диагностика крови.

Точный диагноз устанавливают только при обнаружении возбудителей в крови пациентов. Важное условие — своевременный забор пробы. Для проведения анализа используют только венозную кровь; наиболее адекватные результаты получают при двух или трёхкратном заборе крови по 20-30 мл с интервалом 3-4 ч. Кровь немедленно помещают в сосуд с питательной средой (не меняя иглы) в соотношении 1:10 и перемешивают. Отобранный материал быстро доставляют в лабораторию, сохраняя при комнатной температуре. Образцы крови замораживать нельзя. Микроскопию мазков крови проводят при распознавании паразитарных инфекций (малярии, трипаносомозов). При бактериальных инфекциях микроскопию мазков крови обычно не проводят, так как число бактерий, циркулирующих в кровотоке, невелико. Единственная бактерия, обнаруживаемая в мазках, — Borrelia recurrentis. Для культивирования образцов используют обогащенные питательные среды. При подозрении на конкретную инфекцию можно использовать соответствующие среды, например среду для выращивания бруцелл. Посевы проводят в 2 сосуда (по 5 мл крови в каждом) для дальнейшего культивирования в аэробных и анаэробных условиях. Посевы инкубируют при температуре 35-37 °С и в течение 7 дней ежедневно осматривают. Помутнение среды указывает на рост бактерий; при отсутствии роста проводят повторное исследование на 14-й день. Факт циркуляции грибов в кровотоке устанавливают посевом крови больного на питательные среды. Для обнаружения простейших проводят микроскопию мазков крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе или Райту. На бактериемию или септицемию указывают следующие признаки.

• Повторное выделение одних и тех же микроорганизмов (в том числе и в больших количествах) при заборе крови из разных мест.

• Обнаружение представителей кожной флоры (например, стафилококков или дифтероидов) в нескольких пробах, особенно при наличии сосудистых катетеров или протезов.

• Выявление ожидаемых микроорганизмов (например, зеленящих стрептококков) при подозрении на эндокардит.

Исследование мокроты

Материал для бактериологических исследований — мокрота. Следует помнить, что мокрота должна происходить из нижних отделов; для облегчения её отхождения можно предварительно провести ингаляцию горячего 0,9% раствора NaCl. Мокрота содержит микроорганизмы, ответственные за развитие инфекционного процесса, и виды, обитающие в полости рта. При хронических процессах отхождение мокроты затруднено; в этих случаях прибегают к бронхоальвеолярному лаважу (что препятствует контаминации образца микрофлорой верхних дыхательных путей и полости рта). Мокроту помещают в чашки Пётри. Из слизисто-гнойных образцов выделяют гнойные комочки, которые промывают 0,9% раствором NaCl (что способствует удалению контаминирующей микрофлоры). При изучении слизисто-гнойной мокроты всегда обнаруживают гнойные тяжи, используемые для дальнейшего исследования, которое начинают не позднее 1 —2 ч после изъятия образца. Из материала необходимо готовить мазки для микроскопии, так как некоторые патогены могут не прорастать при посевах на среды.

 

Кроме перечисленных исследований нередко подсчитывают количество выросших колоний. Особенно большое значение это имеет при заболеваниях, вызванных условно патогенными микроорганизмами, так как в этих случаях судить о ведущей роли того или иного возбудителя можно лишь по содержанию его в патологическом материале в большом количестве и преобладанию над другой флорой. Для проведения такого исследования готовят последовательные разведения исследуемого материала, из которых производят высев на чашки с питательной средой, подсчитывают число выросших колоний, умножают на разведение и таким образом определяют содержание микробов в материале.

 

 

Основные направления бактериологического исследования мочи.

 

Подготовка к исследованию мочеполовой системы.

Перед проведением забора мочи больного просят обмыть наружные половые органы с мылом. В стерильный сосуд отбирают 3~5 мл средней порции утренней мочи, так как она содержит повышенное количество микроорганизмов, скопившихся за время сна. Критическая величина нормального содержания бактерий в моче — 105/мл. Полученный образец быстро (в течение 30 мин) доставляют в лабораторию, исследование начинают не позднее 1 ч после забора. При невозможности начать работу немедленно мочу можно сохранять в холодильнике не более 24 ч. Некоторые методики позволяют проводить посев у постели больного: чаще используют метод предметного стекла (стекло, покрытое слоем питательной среды, погружают в мочу, извлекают, дают моче стечь и инкубируют) и метод калиброванных флаконов (используют сосуды ёмкостью 30 мл, стенки которых покрыты питательной средой; в сосуд вносят 3-5 мл мочи, ополаскивают стенки и сливают; сосуды инкубируют в термостате). При невозможности самостоятельного мочеиспускания показаны катетеризация и надлобковая пункция мочевого пузыря. На факт контаминирования образца часто указывает наличие нескольких видов бактерий. Наличие в моче клеток эпителия влагалища указывает, что забор образца был проведён неправильно.

Количественные методы бактериологического исследования мочи.

Наибольшее распространение получил метод калиброванной петли. Образец мочи высевают на подходящую плотную среду платиновой калиброванной петлёй диаметром 2 мм. Следует соблюдать технику посева. Дальнейшее исследование проводят обычным методом, подсчитывая число выросших колоний (зная, скольким колониям соответствует определённое количество бактерий в 1 мл мочи). Быстрый метод определения количества бактерий в моче — микроскопия нецентрифугированной мочи; выявление хотя бы одной бактерии в поле зрения при большом увеличении микроскопа (тысячекратном) эквивалентно наличию 105 бактерий в 1 мл мочи. При поражениях в моче часто обнаруживают лейкоциты и эритроциты, что может указывать на наличие патологического процесса, но не считается диагностическим показателем.

Экспресс - тесты

При профилактических осмотрах можно использовать экспресс-тесты для скрининговых обследований мочи, выявляющие основные биохимические характеристики, например содержание ферментов (нитратазы, трифенилтетразолийхлорид редуктазы).

Бактериурия.

В I мл мочи здорового человека содержится не более 104 бактерий (критическое количество — 105 бактерий), превышение этих величин считают патологией, а состояние рассматривается как клинически значимая бактериурия. При выявлении 106 — 108 бактерий в правильно отобранных образцах наличие инфекции моче выводящих путей можно считать несомненным. Неясные, пограничные значения требуют проведения многократных повторных исследований.

• Транзиторная бактериурия в зависимости от количества микроорганизмов может быть явной или незначимой. Транзиторная бактериурия нередко развивается при различных патологиях, например энтероколитах, а также при проведении различных медицинских манипуляций. При отсутствии патологии мочевыводящих путей бактерии быстро выводятся из организма.

• Неясная бактериурия: содержание бактерий в моче не превышает 104, к находке следует отнестись серьёзно и повторить исследования 2-3 раза через различные интервалы (учитывая время проведения последнего курса антибиотикотерапии). Особое внимание следует обратить на наличие бактериурии неясного генеза у детей младшего возраста.

• Значимая бактериурия, как правило, сопровождается объективными или субъективными признаками поражения мочевыводящих путей. К этой группе относят и бессимптомные бактериурии, сопровождающиеся выделением 105 и более бактерий (обычно соответствует бессимптомной стадии цистита или пиелонефрита). При поражениях, вызванных не энтеробактериями, наблюдают менее выраженную бактериурию. У пациентов, предрасположенных к развитию инфекций, также наблюдают бактериурию с выделением меньшего количества микроорганизмов. При поражениях мочевыводящих путей часто большее значение имеют биологические свойства возбудителя, а не его содержание в моче.

Глава III. ИММУНОЛОГИЯ