Лабораторная диагностика энтеровирусов

При острых энтеровирусных инфекциях диагностика основана прежде всего на результатах изоляции вируса из смывов глотки, прямой кишки, из жидкостей организма или различных тканей, из фекалий. За исключением детей раннего возраста, в момент появления клинических симптомов вирусемия практически не поддается обнаружению. При поражении центральной нервной системы в 10—85% случаев посевы спинномозговой жидкости, взятые в острой фазе заболевания, могут быть положительными (за исключением полиовирусной инфекции, при которой выделить вирус из СМЖ удается лишь в редких случаях). Частота выделения вируса зависит от стадии заболевания и серотипа вируса. Непосредственная изоляция вируса из пораженной ткани или жидкости организма, находящейся в закрытом пространстве (например, плевральная, перикардиальная или спинномозговая), обычно подтверждает диагноз. Выделение энтеровируса из ротоглотки указывает на этиологическую связь его с заболеванием, так как обнаружить здесь вирус можно только в период времени длительностью от 2 дней до 2 нед с момента внедрения патогенного агента. Изоляция вируса из препаратов фекалий должна интерпретироваться с осторожностью, так как бессимптомное выделение вируса во внешнюю среду из толстого кишечника может продолжаться в течение 4 мес.

Кроме того, диагноз может быть подтвержден четырехкратным или более изменением титра нейтрализующих антител при сравнении парных препаратов сыворотки, взятой в острой фазе заболевания и в фазе выздоровления. Этот метод дорог и трудоемок, требует тщательного отбора серотипов для использования в качестве антигенов. Поэтому серодиагностику применяют в критических ситуациях, когда вирус можно выделить только из периферических источников (например, из фекалий), или в случае заболеваний (например, миоперикардит), при которых рутинное взятие посевов малоинформативно, а число серотипов, способных вызвать заболевание, ограничено. Количественная интерпретация титра антител при однократном исследовании сыворотки нередко бывает целесообразна при постановке диагноза, так как даже у здорового человека могут встречаться антитела к различным серотипам вируса, а титры их могут колебаться в широких пределах. При острой полиовирусной инфекции определенную помощь при диагностике может оказать определение титра комплементсвязывающих антител в острой фазе заболевания и в периоде выздоровления.

Величины таких показателей, как лейкоцитоз и скорость оседания эритроцитов, лишь незначительно увеличены. При некрозе (например, печени, легких) отмечают нейтрофильную реакцию. У больных с гепатитом обнаруживают гипербилирубинемию и повышение активности трансаминаз и щелочных фосфатаз. Часто возникает транзиторная альбуминурия; гематурия наблюдается редко.

Общая характеристика микобактерий. Возбудитель туберкулеза. Лабораторная диагностика. Туберкулин, аллергические пробы. Особенности иммунитета. Активная иммунизация. Достижения в борьбе с туберкулезом в России.

Микобактерии. В состав рода Mycobacterium семейства Mycobacteriaceae отдела Firmicutes включены неподвижные аэробные грамположительные палочковидные бактерии. Иногда они образуют нитевидные структуры, напоминающие мицелий грибов. Это и послужило основанием для их названия [греч. mykes, гриб и лат. bacterium, бактерия]. Для микобактерий характерно высокое содержание липидов, фосфатидов и восков в клеточных стенках (до 60%), что определяет их щёлоче-, спирто- и кисдотоустойчивость (признак особенно выражен у паразитических видов микобактерий). Поэтому микобактерии плохо воспринимают анилиновые красители и обычные способы окрашивания. Для окраски применяют интенсивные методы, обычно Циля-Нильсена. Растут медленно или очень медленно; сапрофитические виды растут несколько быстрее. Некоторые виды образуют каротиноидные недиффундирующие в среду пигменты. Микобактерии широко распространены в окружающей среде и вызывают поражения, известные как микобактериозы Заболевания регистрируют у различных холоднокровных и теплокровных животных; наиболее характерны поражения кожи, лёгких и лимфатических узлов.

Классификация микобактерий При классификации микобактерий учитывают патогенность для человека, способность к пигментообразованию, скорость роста и способность синтезировать никотиновую кислоту (ниацин).

• По патогенности выделяют собственно патогенные (вызывающие конкретные заболевания), потенциально патогенные и сапрофитические микобактерии. Патогенными для человека свойствами обладают М. tuberculosis, M. leprae, M. bovis. Прочие виды, вызывающие поражения у человека, известны как атипичные микобактерии.

• По скорости роста выделяют быстрорастущие (дают видимый рост на. 4-7-е сутки), медленнорастущие (рост наблюдают через 7-10 и более дней) и не растущие на искусственных средах (М. leprae) виды микобактерий.

• По способности образовывать пигменты выделяют фотохромогенные (образуют пигмент на свету), скотохромогенные (образуют пигмент в темноте) и нефотохромогенные (не образуют пигмента) виды микобактерий.

Возбудитель туберкулеза

Семейство: Micobacteriacae

Род: Micobacterium

Вид: M. tuberculosis,

Свойства возбудителя

Морфология: Прямые или изогнутые палочки. Напоминают мицелий гриба. Спор, капсулы нет, жгутиков нет. Морфологически изменчив под действием лекарств – может переходить в кокковые формы. Кислото, щелоче, спирто – устойчивы. Хорошо красится флюорохромными красителями ауронином, родомином → можно обнаружить с помощью прямой флюоресценции.

Культуральные свойства. Аэробы, размножаются медленно – скорость деления 14-18 часов → колонии мы увидим через несколько недель.

Питательные среды: глицериновые, картофельно-глицериновые яичные среды (Левейнштейна-Иенсена) + железо, фосфор, сера, факторы роста (биотин, РР, незаминимые аминокислоты) синтетические, полусинтетические.

Характер роста: единичные колонии, морщинистые, пигментированные, крошатся, трещат при прокаливании

Резистентность: быстро вырабатывается ко многим препаратам благодаря R-плазмиде. Устойчивость есть первичная (у микобактерий выделенных от больных которые никогда не лечились), вторичная (формируется в процессе лечения и составляет).

Патогенез.

Источник инфекции: больные БК+ - открытой формы (очаг поражения дренируется черед дыхательные пути и выделяется с мокротой, Патогенность: токсины, ферменты, структурные и химические компоненты клетки.

Образование в месте внедрения туберкулезного бугорка → ответная реакция первичного лимфатического узла → образование дорожки соединяющий первичный эффект с узлом → первичная гранулема. → в месте образования гранулемы в центре развивается некроз, который в дальнейшем замещается фиброзной тканью с отложением солей кальция. У части пациентов из первичного очага может наступить реактивация бактерий – эндогенное развитие туберкулеза. Заболевание связывают либо с суперинфицированием либо снижением защитных сил организма.

Пути передачи: воздушно-капельные, воздушно – пылевой (аэрогенный), алиментарный Первичная встреча человека с микобактерией не вседаведет к туберкулезу может быть инфицированность (благоприятный исход), а может быть болезнь.

Микробиологическая диагностика. Необходима для определения фазы процесса (БК+, БК-) и определения чуствительности к противотуберкулезным препаратам.

Микроскопия пат.материала мокроты окрашенной по Циль-Нильсену (бактериоскопия) прямая – позволяет обнаружить бактерии если их концентрация 10 000 и выше обогощение - гомогенизируют, центрифугируют → ↑ концентрация или добавление стерильной воды и ПАВ (ксилол)→трясут → на ксилоле адсорбируются микобактерии → отстаивают → красят люминесцентная микроскопия – добавляют родомин → трясут→микобактерии связываются с родомином → смотрим в люминесцентный микроскоп

Бактриологический: суточная мокрота + кислота (убиваются другие микробы) → +щелочь → засевание на среды → в термостат на несколько недель → идентификация: миациновая проба, культуральные особенности → проверка патогенности на морских свинках → проверка чувствительности к антибиотикам.

Ускоренная диагн-ка: Метод микрокультур по Прайсу – мазок опускают в цитратную кровь если есть МБ --микроколлония на стекле → через 5-7 дней красят по Ц-Н РИФ с исп-ем м/клон АТ

Иммунитет. Создается искусственный, клеточный, активный, нестерильный иммунитет – гарантии защиты от туберкулеза нет. Защищен от первичного инфицирования и от развития генерализованных форм у детей.

Лечение: специальными противотуберкулезными препаратами – изобутон, изаниазид.

Кожные пробы с туберкулином. Оценка пробы Манту.

Прививка Манту позволяет проводить обследования населения. Включают внутрикожное введение 5 ЕД PPD [от англ. purified protein derivate] — белкового экстракта культуры М. tuberculosis (реакция Манту). При положительном результате пробы Манту через 48 ч в месте введения формируется папула диаметром 10 мм с гиперемированными краями. Положительная реакция прививки Манту указывает на контакт лица с Аг М. tuberculosis или других бактерий, дающих перекрёстную реакцию. Положительный результат прививки Манту нельзя рассматривать как признак активного процесса. Если папулы имеют меньшие размеры (5-10 мм), то результат считают сомнительным и пробу повторяют с введением 10 ЕД PPD. Если размеры папулы ещё меньше, то реакцию считают отрицательной прививкой Манту. Следует помнить, что отрицательная реакция Манту не всегда указывает на отсутствие туберкулёзного процесса — у больных с иммунодефицитами реакция обычно также отрицательна.

Профилактика туберкулеза. Включает соблюдение элементарных правил гигиены, а также проведение специализированных мероприятий по диспансеризации больных лиц и широкомасштабному профилактическому обследованию населения. При положительной кожной пробе и отсутствии признаков активного туберкулеза назначают изониазид курсом до года. Для специфической иммунопрофилактики туберкулеза применяют аттенуированный штамм М. bovis; так называемые бациллы Каль-метта-Герена (БЦЖ). Иммунизацию проводят внутрикожным введением 0,1 мл вакцины всем новорождённым. После вакцинации от туберкулеза на некоторое время отказываются от постановки кожных проб для предупреждения гиперреактивных осложнений (некротические реакции и др.). Ревакцинацию проводят в возрасте 7, 12, 17, 22 и 27-30 лет лицам с отрицательной реакцией Манту.

Борьба с туберкулезом в России.

*флюорография в обязательном порядке

*пробы Манту

71. Возбудитель коклюша. Микробиологический диагноз, эпидемиология, профилактика и терапия коклюша.

Таксономия: род Bordetella, семейство Brucellaceae, отдел Gracilicutes, возбудитель Bordetella pertussis

Свойства возбудителя:

Морфология: мелкая овоидная палочка, неподвижная, образует капсулу, неспорообразующая, аэробная грамотрицательная коккобацилла, каталаза-положительна

Культуральные свойства: Классической для первичного выделения этого микроба является среда Борде-Жангу, содержащая кровь и крахмал, с добавлением пенициллина или одного из цефалоспоринов, подавляющего рост стрептококка. На агаре Борде-Жангу образует выпуклые и блестящие колонии, окруженные зоной слабого гемолиза. На казеиново-угольном агаре колонии блестящие, серовато-кремового цвета.

Эпидемиология: Коклюш-антропонозная инфекция. Источником и переносчиком инфекции является только человек (больные типичными и атипичными формами коклюша, а также здоровые бактерионосители). Передача инфекции осуществляется воздушно-капельным путем.

Патогенез: Входными воротами инфекции являются верхние дыхательные пути. Здесь благодаря адгезивным факторам бордетеллы адсорбируются на ресничках эпителия, размножают­ся, выделяют токсины и ферменты агрессии. Развиваются вос­паление, отек слизистой оболочки, при этом часть эпителиаль­ных клеток погибает. В результате постоянного раздражения ток­синами рецепторов дыхательных путей появляется кашель.

Клиника: Инкубационный период составляет 2—14 дней. В начале болезни появляются недомогание, невысокая темпера­тура тела, небольшой кашель, насморк. Позже начинаются при­ступы спазматического кашля, заканчивающиеся выделением мокроты. Таких приступов может быть 5—50 в сутки. Болезнь продолжается до 2 мес.

Иммунитет: После перенесенной болезни иммунитет стой­кий, сохраняется на протяжении всей жизни. Видоспецифический.

Микробиологическая диагностика: Материалом для исследования служит слизь из верхних дыхательных путей, используют метод «кашлевых пластинок» (во время приступа кашля ко рту больного подставляют чашку Петри с питательной средой). Основной метод диагностики — бактериологический. Позволяет отдифференцировать возбудителя коклюша от паракоклюша. Посев на плотные питательные среды с антибиотиками. Для идентификации возбудителя – реакция агглютинации на стекле с К-сыворотками. Для ускоренной диаг­ностики применяют прямую РИФ со специфической флуоресцентной сывороткой и материалом из зева. Серологический метод – обнаружение IgG и IgA против феламентозного гемаггютинина и против токсина В.pertussis.

Лечение: Режим — щадящий (уменьшение отрицательных психоэмоциональных нагрузок) с обязательными индивидуальными прогулками.

Диета — обогащённая витаминами, соответствующая возрасту.

Этиотропная терапия — назначение антибиотиков (макролиды, полусинтетические пенициллины, цефалоспорины 3 поколения). Если кашель сохраняется — то дальнейшее применение антибиотиков нецелесообразно.
Патогенетическая терапия — противосудорожные препараты, успокаивающие средства.
Симптоматическая терапия — отсасывание слизи из верхних дыхательных путей, аэрозольтерапия, физиотерапия, массаж, дыхательная гимнастика.

Профилактика: Адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина (АКДС). В ее со­став входит убитая культура В. pertussis I фазы, коклюшный токсин, агглютиногены, капсульный антиген. Нормальный человеческий иммуноглобулин вводят неиммунизированным детям при контакте с больными для экстренной профилактики.