Результат реакции с димастином.

Таблица 15

Показатели	«+» реакция (мастит)	«±» реакция (подозрение на мастит)	«-» реакция (мастита нет)
Консистенция сгустка	Плотный или очень плотный	Плотный или очень плотный	Слабое желе	Однородная жидкость, сгустка нет или слабое желе	Слабое желе
Цвет смеси	Алый, пунцовый	Оранжевый, оранжево-красный, красный	Алый. пунцовый	От оранжевого до пунцового	Оранжевый, оранжево-красный, красный

Необходимо учитывать, что при исследовании молока коров яловых, находящихся на 6-8 мес стельности и больных гастроэнтеритами, можно при реакции с димастином увидеть желе и красную или алую окраску.

Д. Проба с мастопримом

Основана на взаимодействии препарата с лейкоцитами молока. Эта проба позволяет выявить маститное молоко отдельных коров, а также обнаружить в сборном молоке примесь маститного при его наличии более 5%.

Техника определения.

В луночки пластинки внести 1мл 2.5% раствора мастоприма и 1мл молока. Размешать и наблюдать за изменением консистенции.

«-» реакция – однородная жидкость, желе не образуется. Такое молоко не имеет примеси анормального молока или примесь незначительная (2-3%).

«+» реакция – образуется желеобразный сгусток. Степень положительной реакции учитывается в крестах:

(+) – слабое желе, при перемешивании смесь молока с реактивом тянется за палочкой в виде нити (такое молоко содержит в среднем 4-5% анормального молока);

(++) – более выраженный желеобразный сгусток, при перемешивании которого, желе из луночки пластинки еще не поднимается (12% анормального молока);

(+++) – хорошо сформированный желеобразный сгусток, который легко выбросить палочкой из луночки пластинки (более 15% анормального молока).

Контроль пастеризации молока

Методические указания.

Контроль пастеризации молока основан на определении ферментов фосфатазы и пероксидазы.

А. Реакция на пероксидазу с йодистокалиевым крахмалом.

Сущность реакции.

В молоке сыром и пастеризованном при температуре ниже 75ºС в течение 10мин или ниже 80ºС в течение 30 сек, а также в пастеризованном молоке, но с примесью сырого молока фермент пероксидаза находится в активном состоянии. Метод основан на разложении перекиси водорода ферментом пероксидаза. Образующийся при разложении перекиси водорода активный кислород окисляет йодид калия, освобождая йод, дает при этом с крахмалом синее окрашивание.

Недостаток этой пробы состоит в том, что относительно малая чувствительность пероксидазы к температурным воздействиям не позволяет использовать ее для контроля молока, пастеризованного при низких температурах. Даже в кипяченом молоке, спустя некоторое время после прибавления реактивов, может появиться бледно-голубое окрашивание вследствие постепенного разложения Н₂О₂ без воздействия фермента. Поэтому для проверки качества реактивов надо поставить контрольную пробу с кипяченым молоком.

Техника определения.

В пробирку налить 3 капли йодистокалиевого крахмала и 1каплю 0.5% раствора перекиси водорода. Перемешать. Появление интенсивного окрашивания указывает на наличие пероксидазы (молоко сырое). Появление бледно-синего окрашивания указывает на частичное разрушение фермента при температуре 65-70ºС (недостаточная пастеризация). Отсутствие окрашивания сразу после прибавления реактивов указывает на пастеризацию молока при температуре выше 80ºС.

Б. Реакция на фосфатазу (ускоренный метод).

Сущность реакции.

Реакцией на фосфатазу устанавливают добавление сырого молока к пастеризованному в количестве не менее 2%.

Фермент фосфатаза наименее устойчив к нагреванию по сравнению со всеми другими ферментами молока. Следовательно, этой реакцией можно устанавливать правильность соблюдения режима низкой пастеризации. Под влиянием фосфатазы добавленный к молоку фенолфталеинфосфат натрия в аммиачной смеси гидролизуется с появлением цветового эффекта.

Следует учитывать, что под действием небольшого нагревания фосфатаза может остаться активной, хотя и в меньшей степени, т.е. как и при малой ее концентрации в молоке. Это обстоятельство может существенно затормозить скорость появления окраски, которая становится видимой позднее чем через час. В таком случае в пробирку нужно прибавить 3 капли хлороформа, закрытье пробкой, перемешать и оставить на 24ч. Если через 24ч. розовая окраска не появится, реакция считается как отрицательная.

Техника определения

В пробирку налить 2мл исследуемого молока, 1мл 0.1% раствора фенолфталеинфосфата натрия в аммиачной буферной смеси и закрывают пробирку пробкой; перемешивают тщательно и помещают в водяную баню при 40-45ºС. Ход реакции проверяют через 10мин и чрез час.

В пробирке с правильно пастеризованным молоком никаких изменений цвета не наблюдается. При нарушении режима пастеризации, когда фосфатаза остается в активном состоянии, цвет идет от светлой до ярко-розовой. Такой же результат получают, если молоко сырое или пастеризованное, но разбавленное сырым молоком.

В. Лактоальбуминовая проба. Выделение казеина кислотой.

Сущность реакции.

Основана на способности казеина свертываться под воздействием молочной кислоты, образующейся в результате молочно-кислого брожения, используется при производстве кисломолочных продуктов.

Действие молочной кислоты на казеинат Са происходит по схеме:

казеинат Са - молочная кислота

кальциевая соль молочной кислоты – чистый казеин (казеиновая кислота).

Техника определения.

В колбочку или стаканчик наливают 5 мл исследуемого молока, 20 мл дистиллированной воды и добавляют 3 мл или по каплям 0.1 раствора серной или уксусной кислоты. Выпавший казеин отфильтровывают, после чего берут в пробирку 5мл прозрачного фильтрата и кипятят.

Молоко, пастеризованное при температуре выше 80ºС, не дает хлопьев альбумина при кипячении пробы – фильтрат остается прозрачным. В пробе молока, сырого или пастеризованного при температуре ниже 80ºС, появляются хлопья альбумина в различном количестве в зависимости от степени и продолжительности нагревания молока.

Самостоятельная работа: ход выполнения АКР

Задание 1. Провести исследование молока на наличие стафилококкового токсина. Анализировать полученные результаты. Наблюдения записать в рабочую тетрадь.

Ход работы

В бактериологические пробирки налить 2мл от каждой исследуемой пробы молока, а для контроля в 1 пробирку – 2мл физ. раствора. Во все пробирки добавляют по 1 капле разведенных 5% раствором лимоннокислого натрия эритроцитов кролика, встряхивают и помещают на 1ч в термостат при температуре 37ºС, после чего выдерживают 1ч при комнатной температуре, центрифугируют при 1000об/мин в течение 10мин и учитывают реакцию. Если молоко в процессе исследования свернется, то такие пробы учету не подлежат.

«+» реакция – (токсин имеется) эритроциты лизируются, столбик молока окрашен в равномерно красный цвет.

«-» реакция – (отсутствие токсина) в испытуемой пробе молоко над осевшими эритроцитами остается белым.

«Контрольная пробирка» - эритроциты оседают на дно, физ. раствор над ними не окрашивается.

Пробы молока, давшие «+» реакции, проверяют повторно со специфической антитоксической сывороткой. Для этого берут 2 пробирки, наливают в каждую по 2 мл испытуемого молока, в 1 добавляют 1 каплю эритроцитов кролика, во 2 добавляют 1 каплю эритроцитов кролика и 2АЕ (антитоксическая единица) указанной сыворотки. Пробы выдерживают 1ч в термостате при 37ºС и 1ч при комн. температуре, затем центрифугируют при 1000об/мин в течение 10мин и окончательно учитывают результат.

Если в пробирке без сыворотки будет гемолиз, а в пробирке с сывороткой гемолиз отсутствует и столбик молока над эритроцитами остается белым, реакция считается специфической. При гемолизе в обеих пробирках реакция считается неспецифической.

Задание 2. Определить Са в молоке. Использовать метод озоления и метод Дуденкова. Обратить внимание на факторы, влияющие на точность анализа. Сделать заключение и результаты записать в рабочую тетрадь.